一般來說,果膠是由D-半乳糖醛酸以a-1,4糖苷鍵連接形成的鏈狀雜多糖,其中,部分D-半乳糖醛酸上的羧基被甲醇所酯化形成甲酯。但是,亞麻纖維中的果膠具有一定的特殊性,其多聚半乳糖醛酸主鏈和側鏈上都含有鼠李糖殘基,而且主鏈鼠李糖殘基上連接著主要由β-1,4-D-半乳聚糖組成的較長側鏈。國內外對于亞麻纖維果膠的類型和結構特征鮮見報道。
單糖的檢測常采用紫外或熒光試劑進行衍生后再用色譜方法進行分離檢測以提高檢測靈敏度。采用1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)作為柱前衍生試劑,其優(yōu)點在于反應條件溫和,無需酸催化,不會引起去唾液酸化作用,產物無立體異構體,在245nm處有強烈的紫外吸收,已經成功用于單糖及低聚糖的分離分析。本文以混合單糖的峰面積為指標,確定了單糖Z佳衍生條件,并在此條件下對水解的亞麻纖維果膠進行分析,獲得了亞麻纖維果膠的單糖組成,為亞麻纖維果膠的綜合利用提供理論依據(jù)。
儀器準備
儀器簡介
LC-600A智能全控液相色譜系統(tǒng)由P600高壓恒流泵與UV600紫外檢測器直接構成等度分析系統(tǒng)。使用WS600工作站可以同時控制數(shù)臺P600高壓恒流泵、UV600紫外檢測器及恒溫柱箱等,實行多元高壓洗脫、波長掃描等功能。
應用領域
化合物檢測、法醫(yī)毒物分析、蛋白質組學食品檢測、藥物分析、環(huán)境分析、聚合物分析
色譜條件:
柱溫 | 30℃ |
檢測波長 | 245nm |
流動相 | 0.05mol/L磷酸鹽緩沖液(pH值6.7):乙腈(V/V)=83:17 |
流速 | 1.0mL/min |
進樣量 | 20μL |
測定結果:
液相色譜柱、特別是高效液相色譜柱的填裝,需要有較高的技巧和熟練的技能。因此,有人甚至將“裝柱”看作是“藝術加技術”。但是,只要掌握了一些基本的規(guī)律和方法,任何實驗室都可以填裝出具有較高柱性能的色譜柱。當然,目前大多數(shù)實驗室多是購買商品預填裝柱來滿足分離、分析之需。但是在一些有特殊需要的情況下,或為節(jié)省經費,在實驗室中自行填裝高效液相色譜柱還是可取的。
液相色譜柱填裝程序中應該注意的問題:
?、俑邏翰僮鞯陌踩珕栴}。常發(fā)生的問題是柱子與勻漿罐連接不牢,造成加壓時柱頭被高壓沖下或柱子從勻漿罐上滑脫。此時,輕則填裝失敗,材料損失,重則造成人身傷害事故,一定要加以防范。除每次填裝前均須仔細確認是否連接正確且牢靠外,可以還可加上由法蘭盤和長螺桿組成的預防脫落裝置,以防萬一。
?、谕ǔ?,先填裝的柱床較后填裝的柱床緊密。因此,當使用時宜以相反的方向為宜,即讓近勻漿罐一端作為使用時流動相的出口,而填裝時的出口端則作為流動相的入口。
?、坌轮邮褂们皯约状紱_洗20-30min, 后,再改用流動相平衡。
?、苄轮右诉x適宜的標準樣品進行評價并記錄,以備存查和比較。
當樣品定量管經過充分的沖洗后,可以將旋柄轉回取樣位置(Load),也可以繼續(xù)保持在進樣位置,到下次取樣前才切換回取樣位置。在切換回取樣位置時,將樣品進樣針或微量樣品進樣針從進樣閥中拔出。
為防止交叉污染,正常情況下不必每次進樣后都沖洗進樣閥注射針導入口。進樣閥內根據(jù)專利設計的直接連接進樣孔,可以使注射針頭的前端直接連接到樣品定量管的末端,沒有其他空間供樣品殘留。這樣在下一次進樣時,就不會有上一次殘留的樣品進入樣品定量管。
但是在進樣針頭插入或拔出過程中,會有痕量的樣品沉積在針頭密封區(qū)域。精密的測定顯示這種殘留有1nL ~ 10nL。這表明進20μL樣品,會殘留0.005% ~ 0.05%。每次進樣后沖洗注射針導入口可以將此殘留沖洗干凈。沖洗注射針導入口的過程為:設定流動相的流速為0.1mL/min ~ 1mL/min,將注射針導入口沖洗頭(Rheodyne部件號7125-054)連接到一只體積相對較大的注射器上,用大量的流動相只在進樣位置清洗注射針導入口。這樣進入進樣閥中的液體繞過樣品定量管由樣品溢出管5# 口排出。這一過程可以將注射針導入口、引導管、注射針導入管和注射針密封圈徹底清洗。而采用注射器完全插入式的沖洗方式,則不能全部清洗上述部分的表面。在取樣位置將注射針插入注射針導入口時,針頭推動注射針密封圈內少量樣品液體(上一次沖洗注射針導入管留下的)進入樣品定量管。當該樣品液體與所用的流動相組成不同,且同時采用部分充滿定量管進樣方式時,在高靈敏度的檢測器上可能出現(xiàn)怪峰。所以沖洗注射針時可以用流動相沖洗。