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色譜柱的使用及維護(hù) 色譜柱操作規(guī)程

時(shí)間:2020-06-21    來源:儀多多儀器網(wǎng)    作者:儀多多商城     
【導(dǎo)讀】色譜柱的平衡和使用 反向色譜柱在經(jīng)過出廠測(cè)試后是保存在甲醇(或乙睛)/水中的。請(qǐng)一定確保您所使用的流動(dòng)相和甲醇(或乙睛)/水互溶。由于色譜柱在運(yùn)輸過程中可能會(huì)干掉,因此在用流動(dòng)相分析樣品之前,應(yīng)使用

色譜柱的平衡和使用

反向色譜柱在經(jīng)過出廠測(cè)試后是保存在甲醇(或乙睛)/水中的。請(qǐng)一定確保您所使用的流動(dòng)相和甲醇(或乙睛)/水互溶。由于色譜柱在運(yùn)輸過程中可能會(huì)干掉,因此在用流動(dòng)相分析樣品之前,應(yīng)使用10-20倍的體積的甲醇或乙睛平衡色譜柱:如果您所使用的流動(dòng)相中含有緩沖鹽,應(yīng)注意用含水量很高(約95%)的流動(dòng)相過渡,樣品分析完后,沖洗柱子是亦然。過去傳統(tǒng)的方法使用純水沖洗,對(duì)于非極性柱,如C8或C18,由于純水不能浸潤(rùn)填料表面而沖倒碳鏈,造成柱效下降。另外,分析樣品時(shí),由于純水在填料表面不能浸潤(rùn)形成水膜,出現(xiàn)樣品不保留而分不開,重現(xiàn)性差,所以對(duì)一般的C18和C8,有機(jī)溶劑不能低于5%。硅膠柱或極性色譜柱在經(jīng)過出廠測(cè)試后是保存在正庚烷中的。如果該色譜柱需要使用含水或甲醇或乙睛的流動(dòng)相,請(qǐng)?jiān)谑褂昧鲃?dòng)相之前用乙醇或異丙醇平衡。

平衡過程中,將流速緩慢地提高用流動(dòng)相平衡色譜柱直到獲得穩(wěn)定的基線(緩沖鹽或離子對(duì)試劑濃度如果較低,則需要較長(zhǎng)的時(shí)間平衡)

色譜柱的再生

建議用來沖洗的溶劑體積

?

?色譜柱規(guī)格

柱體積?

溶劑體積?

?150*4.6

2.50ml?

50ml

?250*4.6

?5.0ml

100ml

?250*10

?20ml

400ml?

?

請(qǐng)根據(jù)下表選擇您的再生方法:

極性固定相(如Si,NH2,Diol色譜填料)的再生:正庚烷-氯仿-乙酸乙酯-丙酮-乙醇-水

非極性固定相(如反向填料C18,C8等)的再生:水-乙睛-氯仿(或異丙醇)-乙睛-水

0.05M稀硫酸可以用來清洗已污染的色譜柱

色譜柱的維護(hù):

? 1、使用保護(hù)柱

? 2、大多數(shù)柱的PH穩(wěn)定范圍是2-7.5,盡可能在此范圍內(nèi)使用

? 3、避免流動(dòng)相組成及極性有劇烈變化

? 4、流動(dòng)相使用前必須經(jīng)脫氣和過濾處理

? 5、如果使用極性或離子性的緩沖溶液作流動(dòng)相,要在實(shí)驗(yàn)完畢將柱子沖洗干凈

? 6、壓力升高時(shí)更換保護(hù)柱

?


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  尺寸排阻色譜柱通過優(yōu)化填料的粒徑和細(xì)孔容積,實(shí)現(xiàn)了色譜柱性能的提升,和色譜柱操作壓強(qiáng)的降低。特別是對(duì)單克隆抗體三聚體/二聚體/單體的分離性能有很大的提高,對(duì)單體/片段也有很好的分離效果。
  尺寸排阻色譜柱采用單分散、球形、表面鍵合了一層納米厚度中性親水性薄膜的3 ?m硅膠作為填料。3μm的粒徑結(jié)合大的孔體積使其成為目前國(guó)際上分辨率優(yōu)良的體積排阻柱。成都摩爾科學(xué)儀器有限公司獨(dú)有的表面鍵合技術(shù)保證了填料表面鍵合的很大化,使其具有高的化學(xué)穩(wěn)定性及小的非特異性吸附。尺寸排阻色譜柱體積排阻柱有100、150及300三種孔徑選擇,廣泛的應(yīng)用于生物分子及水溶性聚合物的分離與分析。
  尺寸排阻色譜柱的保存:日常使用中,Sepax SEC色譜柱建議保存在150mM磷酸鹽緩沖液中(pH7.0)。如長(zhǎng)期不用時(shí),可將色譜柱保存至20%乙醇中,以防止菌體污染。(注:可根據(jù)具體使用條件選擇保存方式,如實(shí)驗(yàn)條件為緩沖鹽體系,建議保存在150mM磷酸鹽緩沖液中,pH 7.0。若實(shí)驗(yàn)條件為有機(jī)溶劑體系,建議保存在20%乙醇中。)
  尺寸排阻色譜柱的清洗:多次使用后某些樣品可能會(huì)吸附到入口篩板或填料上,當(dāng)積累至一定程度時(shí)會(huì)出現(xiàn)壓力升高并伴隨峰型展寬的現(xiàn)象,此時(shí)需要清洗色譜柱。一般流程為:斷開檢測(cè)器,反接色譜柱,在低于50%較大推薦流速下用清洗液沖洗10-15倍柱體積。
  尺寸排阻色譜柱是7.8 mm ID X 30 cm通用尺寸的高性能SEC色譜柱。采用以親水性乙烯基聚合物為基材的高親水性填料充填,因此適合用于分析水溶性聚合物。對(duì)于分子量較小的肽、蛋白質(zhì)聚合物、DNA片段和病毒的分析,TSKgel PL 色譜柱具有很好的分離效果。
  尺寸排阻色譜柱由親水性球形聚甲基丙烯酸酯顆粒填充。尺寸排阻色譜柱的主要應(yīng)用范圍在于分析水溶性聚合物,如纖維素、丙烯酰胺、二醇、葡聚糖、聚乙烯醇和低聚糖等。化學(xué)修飾的尺寸排阻色譜柱提高了陽離子型聚合物的回收率。



    氣相色譜柱除用于定量和定性分析外,還能測(cè)定樣品在固定相上的分配系數(shù)、活度系數(shù)、分子量和比表面積等物理化學(xué)常數(shù),是一種對(duì)混合氣體中各組成分進(jìn)行分析檢測(cè)的儀器。廣泛應(yīng)用于石油、化工、生物化學(xué)、醫(yī)藥衛(wèi)生、食品工業(yè)、環(huán)保等方面。

 


    高性能色譜柱特點(diǎn):柱效高,價(jià)格高,通用性好,使用壽命長(zhǎng),pH范圍寬,一般這類色譜柱可用于解決一些疑難雜癥,并不是平時(shí)經(jīng)常使用的色譜柱。


    低流失色譜柱:在色譜柱生產(chǎn)過程中我們采用自己特殊工藝合成的低流失固定相。色譜柱在出廠前都經(jīng)過了嚴(yán)格的鈍化、鍵合和老化處理,使色譜柱的流失降低到很低水平,完全能夠滿足痕量物質(zhì)分析和MS檢測(cè)的要求。


    色譜柱的安裝


    1、請(qǐng)將液相色譜裝置中的流動(dòng)相完全置換后再連接色譜柱。并且完全排出流路內(nèi)的空氣。


    2、裝置內(nèi)的液體和所使用的流動(dòng)相不能相溶的情況下,請(qǐng)使用雙方都能相溶的液體做過渡。比如從水置換到氯仿的情況,就需要使用丙酮做過渡,才能完全置換。


    3、將鹽溶液置換成有機(jī)溶劑的時(shí)候,需要通過純水、丙酮的順序來進(jìn)行置換。相反,從有機(jī)溶劑轉(zhuǎn)換成鹽溶液的情況下,需要通過丙酮、純水的順序置換。


    4、不僅僅是泵,流動(dòng)相流動(dòng)的所有流路都必須進(jìn)行置換。例如,注入樣品的情況,軟管內(nèi)的液體也需要置換。另外,如果使用壓力計(jì)等別的軟管的情況,取下來的管子也必須由流動(dòng)相洗凈后才能繼續(xù)使用。


    色譜柱的清洗:


    樣品中的雜質(zhì)吸附在色譜柱內(nèi),會(huì)造成色譜柱性能的劣化。這種情況下,需要對(duì)色譜柱進(jìn)行清洗。色譜柱嚴(yán)重污染無法再生時(shí),建議更換新的色譜柱。然而,即使可以再生也有可能性能不能完全恢復(fù)。再生后,一定要使用色譜柱出廠時(shí)的溶液進(jìn)行保存。


    分離原理是基于不同物質(zhì)在兩相間具有不同的分配系數(shù),Vm與Vs之比成為相比以β表示它反映各種色譜柱柱型及結(jié)構(gòu)的重要特性。


    為了避免由于吸附雜質(zhì)造成色譜柱性能降低,建議使用保護(hù)柱。在分析柱前連接保護(hù)柱,雜質(zhì)會(huì)被保護(hù)柱吸附,預(yù)防分析柱的劣化。清洗保護(hù)柱的時(shí)候,一定要取下分析柱后再洗凈,因?yàn)槿绻B接著分析柱就洗凈保護(hù)柱,保護(hù)柱里面的雜質(zhì)可能會(huì)轉(zhuǎn)移到分析柱中。







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