紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)來(lái)自于美國(guó),產(chǎn)品包含光源,單色器,吸收池,檢測(cè)器和顯 示器等,它是一款對(duì)物質(zhì)進(jìn)行定性,定量以及結(jié)構(gòu)分析的儀器。這款儀器和人們常 用的可見(jiàn)光光度計(jì)有有很大的區(qū)別,除了波長(zhǎng)范圍,使用光源都不一樣等,價(jià)格也 是后者要要貴一些;平時(shí)的使用和注意事項(xiàng)不一樣的,今天就先來(lái)學(xué)習(xí)一下紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)使用方法: 1.試驗(yàn)中所用的量瓶、移液管均應(yīng)經(jīng)檢定校正、洗凈后使用。 2.使用的石英吸收池必須潔凈。用于盛裝樣品、參比及空內(nèi)溶液的吸收池,當(dāng)裝 入同一溶劑時(shí),在規(guī)定波長(zhǎng)測(cè)定吸收池的透光率,如透光率相差在0.3%以下者可配 對(duì)使用,否則必須加以校正。 3.取吸收池時(shí),手指拿毛玻璃面的兩側(cè)。裝盛樣品溶液以池休積的4/5為度,使用 揮發(fā)性溶液吋應(yīng)加蓋,透光面要用擦鏡紙由上而下擦拭干凈,檢視應(yīng)無(wú)殘留溶劑。 為防止溶劑揮發(fā)后溶質(zhì)殘留在池子的透光面,可先用蘸有空白溶劑的擦鏡紙擦拭, 然后再用干擦鏡紙拭凈。吸收池放入樣品室時(shí)應(yīng)注意每次放入方向相同。使用后用 洗液及水沖洗干凈,晾干防塵保存,吸收池發(fā)現(xiàn)污染不易洗凈時(shí)可用硫酸發(fā)煙硝酸(3 :1V/V)混合液稍加浸泡后,洗凈備用。如用重鉻酸鉀清潔液清洗時(shí),吸收池不貧在 清潔液中長(zhǎng)時(shí)間浸泡,否則清潔液中的重鉻酸鉀結(jié)晶會(huì)損壞吸收池的光學(xué)表面,并 應(yīng)充分甩水沖洗,以防重鉻酸鉀吸附于吸收池表面。 4.測(cè)定前應(yīng)先檢查所用的溶劑在測(cè)定供試品所用的波長(zhǎng)附近是否符合要求,可用 lcm石英吸收池盛溶劑以空氣為空白(即參比光路中不放置任何物質(zhì))測(cè)定其吸收度 ,應(yīng)符合規(guī)定。 5.稱(chēng)量應(yīng)按藥典規(guī)定要求。配制測(cè)定溶液時(shí)稀釋轉(zhuǎn)移次數(shù)應(yīng)盡可能少,轉(zhuǎn)移稀釋 時(shí)所取容積一般應(yīng)不少于5cm。含量測(cè)定供試品應(yīng)稱(chēng)取2份,如為對(duì)照品比較法,對(duì) 照品一般也應(yīng)稱(chēng)取2份。吸收系數(shù)檢查也應(yīng)稱(chēng)取供試品2份,平行操作,每份結(jié)果對(duì) 平均值的偏差應(yīng)在±0.5%以?xún)?nèi)。作鑒別或檢查可取樣品1份。 6.供試品測(cè)定溶液的濃度,除各該品種項(xiàng)下已有注明者外,供試品溶液的吸收度 以在0.3~0.7之間為宜,吸收度讀數(shù)在此范圍誤差較小,并應(yīng)結(jié)合所用儀器吸收度線 性范圍,配制合適的讀數(shù)濃度。 7.選用儀器的狹縫譜帶寬度應(yīng)小于供試品吸收帶的半寬度,否則測(cè)得的吸收度值 會(huì)偏低,狹縫寬度的選擇應(yīng)以減小狹縫寬度吋供試品的吸收度不揮增加為準(zhǔn),對(duì)于 紫外測(cè)定的部分品種,可以使用2nm縫寬,但對(duì)某些品種如青霉素鉀及鈉的吸收度 檢查則需用lnm縫寬或更窄,否則其264nm的吸收度會(huì)偏低。 8.測(cè)定時(shí)除另有規(guī)定者外,應(yīng)在規(guī)定的吸收峰±2nm處,再測(cè)幾點(diǎn)的吸收度,以核 對(duì)供試品的吸收峰位置是否正確,并以吸收度最大的波長(zhǎng)作為測(cè)定波長(zhǎng),除另有規(guī) 定外吸收度最大波長(zhǎng)應(yīng)在該品種項(xiàng)下規(guī)定的波長(zhǎng)±lnm以?xún)?nèi),否則應(yīng)考慮試樣的同一 性、純度以及儀器波長(zhǎng)的準(zhǔn)確度 9.除另有規(guī)定外,比色法所用的空內(nèi)系指用同休積的溶劑代替對(duì)照品或供試品溶 液,然后依次加入等量的相應(yīng)試劑,并用同樣方法處理。 10.當(dāng)吸收度和濃度關(guān)系不呈線性關(guān)系時(shí),應(yīng)取數(shù)份梯度量的對(duì)照濃度,用溶劑補(bǔ) 充至同一休積,顯色后測(cè)定各份溶液的吸收度,然后以吸收度與相應(yīng)的濃度繪制標(biāo) 準(zhǔn)曲線,再根據(jù)供試品的吸收度在標(biāo)準(zhǔn)曲線上求出其含量。
分光光度計(jì)采用一個(gè)可以產(chǎn)生多個(gè)波長(zhǎng)的光源,通過(guò)系列分光裝置,從而產(chǎn)生特定波長(zhǎng)的光源,光源透過(guò)測(cè)試的樣品后,部分光源被吸收,計(jì)算樣品的吸光值,從而轉(zhuǎn)化成樣品的濃度。樣品的吸光值與樣品的濃度成正比。常用于核酸,蛋白定量以及細(xì)菌生長(zhǎng)濃度的定量。
操作方法:
接通電源,打開(kāi)儀器開(kāi)關(guān),掀開(kāi)樣品室暗箱蓋,預(yù)熱 10 分鐘。
將靈敏度開(kāi)關(guān)調(diào)至“1”檔(若零點(diǎn)調(diào)節(jié)器調(diào)不到“0”時(shí),需選用較高檔。
根據(jù)所需波長(zhǎng)轉(zhuǎn)動(dòng)波長(zhǎng)選擇鈕。
將空白液及測(cè)定液分別倒入比色杯 3/4 處,用擦鏡紙擦清外壁,放入樣品室內(nèi),使空白管對(duì)準(zhǔn)光路。
在暗箱蓋開(kāi)啟狀態(tài)下調(diào)節(jié)零點(diǎn)調(diào)節(jié)器,使讀數(shù)盤(pán)指針指向 t=0 處。
蓋上暗箱蓋,調(diào)節(jié)“100”調(diào)節(jié)器,使空白管的 t=100,指針?lè)€(wěn)定后逐步拉出樣品滑竿,分別讀出測(cè)定管的光密度值,并記錄。
比色完畢,關(guān)上電源,取出比色皿洗凈,樣品室用軟布或軟紙擦凈。
三大注意事項(xiàng):
分光光度計(jì)應(yīng)放在干燥的房間內(nèi),使用時(shí)放置在堅(jiān)固平穩(wěn)的工作臺(tái)上,室內(nèi)照明不宜太強(qiáng)。熱天時(shí)不能用電扇直接向儀器吹風(fēng),防止燈泡燈絲發(fā)亮不穩(wěn)定。
分光光度計(jì)使用前,使用者應(yīng)該首先了解本儀器的結(jié)構(gòu)和工作原理,以及各個(gè)操縱旋鈕之功能。在未按通電源之前,應(yīng)該對(duì)儀器的安全性能進(jìn)行檢查,電源接線應(yīng)牢固,通電也要良好,各個(gè)調(diào)節(jié)旋鈕的起始位置應(yīng)該正確,然后再按通電源開(kāi)關(guān)。
分光光度計(jì)在儀器尚未接通電源時(shí),電表指針必須于“0”刻線上,若不是這種情況,則可以用電表上的校正螺絲進(jìn)行調(diào)節(jié)。