在進行液相色譜儀分析實驗時,流動相再進入儀器之前,必須使用超聲波清洗機進行簡單的除氣泡處理,以防對泵造成損害,對檢測結果造成干擾。若在檢測過程中發(fā)現(xiàn)液相色譜儀恒流泵里有氣泡,須及時進行排除,排除高壓液相色譜儀泵中氣泡的方法如下。
1、首先,檢查流動相儲液瓶中的溶劑過濾頭是否阻塞。具體做法:將輸入三通器上的溶劑塑料連接管的卸下,將流動相儲液瓶置于高位,利用壓差使溶液流出。如果溶劑流的很順暢,說明溶劑過濾頭是好的。如果是一滴一滴的流出,則說明過濾頭阻塞,需要超聲清洗,復原。
2、用堵頭將儀器的高壓液流輸出口封住將色譜柱連在管路上、,可避免在抽液時將空氣抽入管路內。將儀器所配的注射器及塑料連接管插到放空閥的導管上,逆時針旋開放空閥旋鈕,抽液5-10mL,將泵的流速設定在每分鐘一毫升的流速。啟動泵,觀察塑料連接管的流動溶液是否還有氣泡。如沒有氣泡說明從過濾頭到放空閥這一段已將氣泡排除。
3、將泵關閉,將堵頭從儀器的高壓液流輸出口去掉將色譜柱從管路上卸掉、使輸出口放空。順時針關閉放空閥旋鈕,將泵的流速設定在3-5mL的流速,將泵內的阻尼器和壓力傳感器的氣泡趕出,流出溶液10-15mL將泵關閉。連接上色譜柱,將流速設定在每分鐘一毫升,啟動泵,觀察壓力及壓力脈動。
4、用水和異丙醇甲醇、交替沖洗泵的內腔,使吸附在內墻壁上的氣泡趕出。
5、應用快速降壓法趕出氣泡:用小堵頭將泵的流動相輸出口堵上,將流速設定在1毫升/分,將柱前壓力升至20Mpa左右,將排空閥快速打開,重復2~3即可。
1、反相柱
分別用甲醇:水=90:10,純甲醇(HPLC級),異丙醇(HPLC級),二氯甲烷(HPLC級)等溶劑作為流動相,依次沖洗,每種流動相流經(jīng)色譜柱不少于20倍的色譜柱體積.然后再以相反的次序沖洗。
2、正相柱
分別用正己烷(HPLC級),異丙醇(HPLC級),二氯甲烷(HPLC級),甲醇(HPLC級)等溶劑做流動相,順次沖洗,每種流動相流經(jīng)色譜柱不少于20倍的柱體積(異丙醇粘度大,可降低流速,避免壓力過高).注意使用溶劑的次序不要顛倒,用甲醇沖洗完后,再以相反的次序沖洗至正己烷,所有的流動相必須嚴格脫水。
3、離子交換柱
長時間在緩沖溶液中使用和進樣,將導致色譜柱離子交換能力下降,用稀酸緩沖溶液沖洗可以使陽離子柱再生,反之,用稀堿緩沖溶液沖洗可以使陰離子柱再生。
另外,還可以選擇能溶解柱內污染物的溶劑為流動相做正方向和反方向沖洗。但再生后的色譜柱柱效是不可能恢復到新柱的水平的.如果柱子裝反了,可以調回來,但可能會造成柱內擔體塌陷.在不得已的情況下盡量不要反裝色譜柱。
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