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液相色譜儀的這些使用要點你做到了嗎 液相色譜操作規(guī)程

時間:2020-05-16    來源:儀多多儀器網(wǎng)    作者:儀多多商城     
  【中國儀器網(wǎng) 使用手冊】色譜法,又稱“色層法”、“層析法”,早誕生于俄國植物學家——茨維特之手,后在此基礎上又相繼發(fā)展出薄層色譜法、氣相色譜法、液相色譜法以及紙色譜法。目前,常見的液相色譜儀生產(chǎn)廠家有沃特世、安捷倫、島津、依利特、上海分析儀器廠、北京分析儀器廠等。
 
  在液相色譜儀開機前,我們首先應當做好準備工作,主要有配置試驗要求的流動相、安裝試驗用的色譜、將流動相過濾脫氣三點。流動相的過濾,主要是為了除去流動相中的微粒物質,所應用到的濾膜可分脂溶性濾膜(有機濾膜)、水溶性濾膜與通用型濾膜。
 
  而流動相的脫氣,則是為了流動相防止在泵、流路、檢測器等儀器組成部分中產(chǎn)生氣泡,從而造成泵的不穩(wěn)定,并增加檢測器的噪音。據(jù)了解,氦氣脫氣、真空脫氣、超聲脫氣、加熱脫氣均可運用于液相色譜儀的流動相脫氣。脫氣的操作,需要以流動相中的混合物濃度不發(fā)生變化為主要原則。
 
  另外,色譜柱的安裝調試,還涉及反相色譜柱與正相色譜柱兩種。反向色譜柱多以硅膠為基質,常以硅膠健合C18、C8為填料。值得一提的是,液相色譜儀還應當采用穩(wěn)定性較高的反相色譜柱。因為,這種色譜柱還能夠承受酸與堿的作用。同時,因存在著色譜儀遭受腐蝕的可能性,操作人員還應當勤勞更換每次試驗用水,不使用鹵化物。后,為控制樣品在分析過程中的解離,操作人員還需注意反向色譜柱使用時的pH值,過高的pH值會溶解硅膠,過低的pH則會造成烷基的脫落。
 
  除上述幾個檢測的開機準備工作以外,儀器設備本身的質量、色譜條件、操作人員技術熟練程度、儀器安裝環(huán)境,都是影響著液相色譜儀發(fā)揮作用的關鍵因素。不僅如此,儀器使用者還應當每三個月,就對液相色譜儀的清洗溶劑過濾器及溶劑瓶進行清洗,以此來保證儀器長時間、率的使用。

如何排除液相色譜儀高壓泵中的氣泡

  在進行液相色譜儀分析實驗時,流動相再進入儀器之前,必須使用超聲波清洗機進行簡單的除氣泡處理,以防對泵造成損害,對檢測結果造成干擾。若在檢測過程中發(fā)現(xiàn)液相色譜儀恒流泵里有氣泡,須及時進行排除,排除高壓液相色譜儀泵中氣泡的方法如下。

  1、首先,檢查流動相儲液瓶中的溶劑過濾頭是否阻塞。具體做法:將輸入三通器上的溶劑塑料連接管的卸下,將流動相儲液瓶置于高位,利用壓差使溶液流出。如果溶劑流的很順暢,說明溶劑過濾頭是好的。如果是一滴一滴的流出,則說明過濾頭阻塞,需要超聲清洗,復原。

  2、用堵頭將儀器的高壓液流輸出口封住將色譜柱連在管路上、,可避免在抽液時將空氣抽入管路內。將儀器所配的注射器及塑料連接管插到放空閥的導管上,逆時針旋開放空閥旋鈕,抽液5-10mL,將泵的流速設定在每分鐘一毫升的流速。啟動泵,觀察塑料連接管的流動溶液是否還有氣泡。如沒有氣泡說明從過濾頭到放空閥這一段已將氣泡排除。

  3、將泵關閉,將堵頭從儀器的高壓液流輸出口去掉將色譜柱從管路上卸掉、使輸出口放空。順時針關閉放空閥旋鈕,將泵的流速設定在3-5mL的流速,將泵內的阻尼器和壓力傳感器的氣泡趕出,流出溶液10-15mL將泵關閉。連接上色譜柱,將流速設定在每分鐘一毫升,啟動泵,觀察壓力及壓力脈動。

  4、用水和異丙醇甲醇、交替沖洗泵的內腔,使吸附在內墻壁上的氣泡趕出。

  5、應用快速降壓法趕出氣泡:用小堵頭將泵的流動相輸出口堵上,將流速設定在1毫升/分,將柱前壓力升至20Mpa左右,將排空閥快速打開,重復2~3即可。

標簽: 液相色譜儀
液相色譜儀 如何排除液相色譜儀高壓泵中的氣泡_液相色譜儀

高效液相色譜之色譜柱的清洗方法

  高效液相色譜是20世紀60年代后期發(fā)展起來的分離分析技術,是現(xiàn)代分離測定的重要手段。問世以來,因其具有分離效能高、分析速度快、檢測靈敏度好、能分析高沸點但不能氣化的熱不穩(wěn)定生理活性物質的特點而被廣泛應用于生物化學、藥物及臨床分析。高效液相色譜柱是消耗品,會隨使用時間或進樣的次數(shù)增加,出現(xiàn)色譜峰高降低,峰寬加大或出現(xiàn)肩峰,柱效下降。需要定期進行徹底清洗和再生,不同的色譜柱清洗方法各不相同比如:

  1、反相柱

  分別用甲醇:水=90:10,純甲醇(HPLC級),異丙醇(HPLC級),二氯甲烷(HPLC級)等溶劑作為流動相,依次沖洗,每種流動相流經(jīng)色譜柱不少于20倍的色譜柱體積.然后再以相反的次序沖洗。

  2、正相柱

  分別用正己烷(HPLC級),異丙醇(HPLC級),二氯甲烷(HPLC級),甲醇(HPLC級)等溶劑做流動相,順次沖洗,每種流動相流經(jīng)色譜柱不少于20倍的柱體積(異丙醇粘度大,可降低流速,避免壓力過高).注意使用溶劑的次序不要顛倒,用甲醇沖洗完后,再以相反的次序沖洗至正己烷,所有的流動相必須嚴格脫水。

  3、離子交換柱

  長時間在緩沖溶液中使用和進樣,將導致色譜柱離子交換能力下降,用稀酸緩沖溶液沖洗可以使陽離子柱再生,反之,用稀堿緩沖溶液沖洗可以使陰離子柱再生。

  另外,還可以選擇能溶解柱內污染物的溶劑為流動相做正方向和反方向沖洗。但再生后的色譜柱柱效是不可能恢復到新柱的水平的.如果柱子裝反了,可以調回來,但可能會造成柱內擔體塌陷.在不得已的情況下盡量不要反裝色譜柱。

標簽: 高效液相色譜 色譜柱
高效液相色譜 色譜柱 高效液相色譜之色譜柱的清洗方法_高效液相色譜 色譜柱

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