高效液相色譜儀的系統(tǒng)由儲(chǔ)液器、泵、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測(cè)器、記錄儀等幾部分組成。與經(jīng)典的液相色譜相比，具有高效液相所用的固定相粒度?。?um-10um）、傳質(zhì)快、柱效高的優(yōu)勢(shì)。近年來，在保健食品功效成分、營養(yǎng)強(qiáng)化劑、維生素類、蛋白質(zhì)的分離測(cè)定等應(yīng)用廣泛。世界上約有80％的有機(jī)化合物可以用HPLC來分析測(cè)定。
高效液相色譜的分離過程HPLC，借溶質(zhì)在兩相間分配系數(shù)、親和力、吸附力或分子大小不同而引起的排阻作用的差別使不同溶質(zhì)得以分離。
高效液相色譜儀操作步驟：
1)過濾流動(dòng)相，根據(jù)需要選擇不同的濾膜。
2)對(duì)抽濾后的流動(dòng)相進(jìn)行超聲脫氣10-20分鐘。
3)打開HPLC工作站(包括計(jì)算機(jī)軟件和色譜儀)，連接好流動(dòng)相管道，連接檢測(cè)系統(tǒng)。
4)進(jìn)入HPLC控制界面主菜單，點(diǎn)擊manual，進(jìn)入手動(dòng)菜單。
5)一段時(shí)間沒用，或者換了新的流動(dòng)相，需要先沖洗泵和進(jìn)樣閥。沖洗泵，直接在泵的出水口，用針頭抽取。沖洗進(jìn)樣閥，需要在manual菜單下，先點(diǎn)擊purge，再點(diǎn)擊start，沖洗時(shí)速度不要超過10ml/min。
6)調(diào)節(jié)流量，初次使用新的流動(dòng)相，可以先試一下壓力，流速越大，壓力越大，一般不要超過2000。點(diǎn)擊injure，選用合適的流速，點(diǎn)擊on，走基線，觀察基線的情況。
7)設(shè)計(jì)走樣方法。點(diǎn)擊file，選取selectusersandmethods，可以選取現(xiàn)有的各種走樣方法。若需建立一個(gè)新的方法，點(diǎn)擊newmethod。選取需要的配件，包括進(jìn)樣閥，泵，檢測(cè)器等，根據(jù)需要而不同。選完后，點(diǎn)擊protocol。一個(gè)完整的走樣方法需要包括：a.進(jìn)樣前的穩(wěn)流，一般2-5分鐘；b.基線歸零；c.進(jìn)樣閥的loading-inject轉(zhuǎn)換；d.走樣時(shí)間，隨不同的樣品而不同。
8)進(jìn)樣和進(jìn)樣后操作。選定走樣方法，點(diǎn)擊start。進(jìn)樣，所有的樣品均需過濾。方法走完后，點(diǎn)擊postrun，可記錄數(shù)據(jù)和做標(biāo)記等。全部樣品走完后，再用上面的方法走一段基線，洗掉剩余物。
9)關(guān)機(jī)時(shí)，先關(guān)計(jì)算機(jī)，再關(guān)液相色譜。
液相色譜儀是一種常見的色譜分析方法，與氣相色譜相比液相色譜可以在常溫中操作，且不受樣品揮發(fā)度和熱穩(wěn)定性的限制。
這使得液相色譜非常適合相對(duì)分子量較大，難汽化；
不易揮發(fā)或?qū)崦舾械奈镔|(zhì)、離子型化合物和高聚物的分離分析。
然而要選購一臺(tái)品質(zhì)優(yōu)良的液相色譜并不容易。
液相色譜儀的指標(biāo)很多，有關(guān)于泵的、關(guān)于檢測(cè)器的、關(guān)于色譜柱的……不過，從選購角度考慮；
可以優(yōu)先考慮噪音、漂移、最小檢測(cè)濃度、定性定量重復(fù)性等主要技術(shù)指標(biāo)。
當(dāng)然，這些指標(biāo)都要放在系統(tǒng)、回路里去看去比較。
1.噪音
噪音指由儀器的電器元件、溫度波動(dòng)、電壓的線性脈沖以及其他非溶質(zhì)作用產(chǎn)生的高頻噪聲和基線的無規(guī)則波動(dòng)產(chǎn)生的聲音。
噪音的大小直接關(guān)系到儀器的檢測(cè)靈敏度，噪音越大檢測(cè)的靈敏度就越低。
對(duì)于檢測(cè)低含量的樣品就要求儀器的噪音越小越好，否則噪音過大將會(huì)導(dǎo)致基線不穩(wěn)，甚至影響分析結(jié)果；
2.最小檢測(cè)濃度(最小檢測(cè)限)
最小檢測(cè)濃度是反映儀器靈敏度的重要參數(shù)。
根據(jù)公式CL=2×Nd×C/H(CL：最小檢測(cè)濃度Nd：噪音C：樣品濃度最小檢測(cè)濃度H：樣品峰高)；
最小檢測(cè)濃度是和噪音成正比的，噪音越大，最小檢測(cè)濃度就越大，靈敏度就越低。
如果選購的儀器回避了這個(gè)指標(biāo)，說明他們不愿在最小檢測(cè)濃度的基礎(chǔ)上去比較噪音；
3.漂移
漂移是指儀器穩(wěn)定后一段時(shí)間內(nèi)基線漂離原點(diǎn)的距離，通常用來衡量?jī)x器穩(wěn)定快慢。
高品質(zhì)的儀器能在較短的時(shí)間內(nèi)達(dá)到穩(wěn)定，從而在一定程度上提高分析效率；
4.定性定量重復(fù)性
主要是考核儀器穩(wěn)定性的指標(biāo)，這對(duì)于分析樣品來說是非常重要的。
好的儀器其穩(wěn)定性應(yīng)該是十分不錯(cuò)的，這就要求多次進(jìn)樣保留時(shí)間及含量的一致性，這樣做出來的結(jié)果才能使人信服。
雖然這些指標(biāo)都屬于檢測(cè)器，但是就像前面所說的，條件是要放在整個(gè)回路和系統(tǒng)里去看去比較。
例如：泵的脈動(dòng)會(huì)直接影響噪音指標(biāo)、泵的流量準(zhǔn)確度指標(biāo)，以及密封性不好也會(huì)影響相關(guān)指標(biāo)。
所以要系統(tǒng)地看指標(biāo)才可以反應(yīng)出儀器的一些真實(shí)水平。
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