液相色譜儀在高效使用中需注意以下幾個問題:
1、色譜柱中的流動相是否會會排干的問題:
不少做色譜分離試驗的人遇到過這樣的情形:不慎未及時補充流動相,泵將溶劑瓶中的流動相吸干了,HPLC系統(tǒng)由此而停止工作了。如此情況是否會損壞色譜柱?泵是否已將色譜柱中所有流動相都排干了?色譜柱還能使用嗎?事實上,如果泵將溶劑瓶中的流動相吸干,并不會造成色譜柱的損壞。即使泵中充滿了空氣,泵也不會將空氣排入色譜柱。因為泵只能輸送液體,而不能輸送空氣。
2、色譜柱變干的問題:
另一個更可能發(fā)生的情況是忘記蓋上色譜柱兩端的密封蓋或蓋子太松而使色譜柱變干。同樣,整個色譜柱干涸的情況不太容易發(fā)生,多半可能只是色譜柱兩端的幾個毫米變干了,因揮發(fā)掉所有溶劑是色譜柱變干需要相當長的時間。即使色譜柱真的變干了,也不一定就不可救藥了??梢試L試用一種完全脫氣的、表面張力低的溶劑(如經氦氣脫氣的甲醇)沖洗色譜柱以除去氣體。較低的表面張力有助于浸潤填料表面;已脫氣的溶劑應該能夠溶解并去除滯留在填料中的氣體。色譜柱大約需要(以1mL/min的流速)沖一個小時或更多的時間被徹底浸潤,恢復到正常狀態(tài)。
3、使用PEEK(polyetheretherketone)管路和接頭需要注意以下問題:
如果經常需要改變流路或更換不同品牌的色譜柱,使用PEEK材料制成的管路和接頭會非常方便。PEEK管路容易連接;PEEK接頭不僅無需工具,手擰即可固定,而且容易調節(jié)錐箍之外的管路長度,方便與不同品牌或規(guī)格的色譜柱相連接。
使用此類材料的管路需要注意的是:PEEK對鹵代烷烴和四氫呋喃的兼容性不好。雖然未觀察到上述溶劑溶解PEEK材料的明顯跡象,但PEEK遇到上述溶劑會變脆。另一個西藥考慮的因素是壓力限。不銹鋼管可耐受6000psi的壓力,但PEEK管只能耐受近4000psi(但多數(shù)HPLC應用系統(tǒng)壓力不會超過3000psi)。
使用PEEK接頭時則無需擔心接頭耐溶劑性能,因為接頭幾乎或很少與溶劑直接接觸。但手擰固定的PEEK接頭壓力限低于不銹鋼管,因而壓力太高時,可能會使接頭在管路上滑動而產生死體積或漏液。
4、預防液相泵的故障:
處于良好操作狀態(tài)的泵,應該能使色譜圖上的基線平穩(wěn);保留時間的重復性好。在等度洗脫時壓力波動小于2%。梯度洗脫時壓力變化應是緩慢和平穩(wěn)的。 要保持泵的良好操作性能,必須維護系統(tǒng)的清潔,保證溶劑和試劑的質量,對流動相進行過濾和脫氣.下面列出預防泵故障的幾項措施:
1)用高質量試劑和HPLC級溶劑;
2)過濾流動相和溶劑;
3)脫氣;
4)每天開始使用時放空排氣,工作結束后從泵中洗去緩沖液;
5)不讓水或腐蝕性溶劑滯留泵中;
6)定期更換墊圈;
7)需要時加潤滑油;
8)查閱有關泵操作手冊中的其它建議。
9)為了使故障發(fā)生后盡快排除,平時應常備密封、單向閥(入口與出口)、泵頭裝置、各式接頭、保險絲等部件,以及更換工具。
高效液相色譜儀可以完成二元高壓梯度洗脫,也可以拓展為制備系統(tǒng),采用高壓混合器連接兩個高壓恒流泵,利用RS232通訊,即可實現(xiàn)梯度分析;
便于用戶自由選擇與搭配,混合器材主要由不銹鋼、生物惰性PEEK等構成,用途廣泛;
可廣泛應用于研究開發(fā)、醫(yī)藥檢驗、食品檢測、化工分析、環(huán)境監(jiān)測等眾多分析領域。
高效液相色譜儀分離原理:液-液分配(Liquid-liquid Partition Chromatography)及化學鍵合相色譜(Chemically Bonded Phase Chromatography) 流動相和固定相都是液體。
流動相與固定相之間應互不相溶(極性不同,避免固定液流失),有一個明顯的分界面。
當試樣進入色譜柱,溶質在兩相間進行分配。達到平衡時,高效液相色譜儀報價,服從于高效液相色譜計算公式;
6種定量計算方法:歸一法、修正歸一法、帶比例因子的修正歸一法、內標法、外標法,高效液相色譜儀適用范圍,以及指數(shù)計算法。
高效液相色譜儀特點:
1、梯度洗脫內部軟件可自控制,編輯、存貯60個梯度方法,運行復雜的梯度程序;
2、泵形式:串聯(lián)雙柱塞 浮動式密封圈;泵頭自沖洗功能,泵無須手動排空即可輸液“自吸式單向閥”技術,可延長密封圈使用壽命;
3、光路系統(tǒng)采用精密定位結構和獨特的散熱技術,高效的光學系統(tǒng)和數(shù)字過濾;
4、程序化的溶劑類和壓縮因子,可自動補償;完整的預清洗功能,更于快速溶劑更換;
5、波長調節(jié)功能:既可由鍵盤面板控制也可由程序軟件設定,全封閉集成型光電檢測元件,無需任何機械部分調整即可選擇或改變波長;
6、光源運行時間在線監(jiān)測并顯示,方便用戶確定光源壽命;
7、三條流量校正曲線以及特有的多點參數(shù)校正,保障了極高的流量準確性;
8、梯度:高壓2-3元;梯度方式:高壓,梯度洗脫內部軟件可自控制,可通過PC機及泵控制;
9、實時顯示樣品池和參比池能量,方便判斷光源和流通池狀態(tài);
10、紫外檢測器具有自動波長定位調整,自動調零,多量程輸出選擇;
11、智能化高,可實現(xiàn)網絡化平臺監(jiān)控,提高了你的QC效益;
12、自動化,讓你從繁鎖的分析操作中解放出更多的時間。
1、流動相的抽濾要求
色譜純試劑,二次蒸餾水,緩沖鹽一定要過濾。
2、吸濾頭
特殊情況下可拆下濾頭抽取以判斷其中是否堵塞;亦可用注射器吸取流動相通過吸濾頭打出以判斷其是否堵塞。若有堵塞情況可用異丙醇超聲波清洗;清洗不成功則需要更換。
3、單向閥
如遇到泵壓不穩(wěn)或流動相不能抽取,則可能是單向閥出現(xiàn)問題,卸下用異丙醇超聲波清洗,清洗時須按其安裝的反相放置在小燒杯中,切記不可與安裝方向倒置超洗!
4、泵頭
泵頭漏液或出現(xiàn)其它故障一般要申請維修(如漏液,或更換柱塞桿及其密封墊等)。
5、過濾片
當色譜峰出現(xiàn)異常情況時,有可能是此部件被污染,拆下用異丙醇超洗或更換過濾墊片。
6、排液閥
此處不能完全密封或漏液時一般是其中的墊片污染或磨損,可卸下后取出其墊片用異丙醇超聲波清洗或更換墊圈。
7、手動進樣器
平時應注意用二次蒸餾水和甲醇在裝載狀態(tài)及進樣分析狀態(tài)清洗;如出現(xiàn)漏液現(xiàn)象,原因極可能為轉子密封墊磨損或污染,一般須申請維修或更換配件。
8、流通池
在色譜峰不正常時可能是此部件被污染可拆卸后取出其中的墊片用異丙醇超洗(可根據說明書進行操作或申請維修)。
9、工作站
出現(xiàn)死機可重啟計算機;不正常運行時,首先可更換電腦測試其硬件故障;或在本機上重新插撥接口、重新安裝軟件。
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