熒光分光光度計是用于掃描液相熒光標記物所發(fā)出的熒光光譜的一種儀器。其能提供包括激發(fā)光譜、發(fā)射光譜以及熒光強度、量子產(chǎn)率、熒光壽命、熒光偏振等很多物理參數(shù),從各個角度反映了分子的成鍵和結構情況。通過對這些參數(shù)的測定,不但可以做一般的定量分析,而且還可以推斷分子在各種環(huán)境下的構象變化,從而闡明分子結構與功能之間的關系。熒光分光光度計的激發(fā)波長掃描范圍一般是190~650nm，發(fā)射波長掃描范200~800nm?？捎糜谝后w、固體樣品（如凝膠條）的光譜掃描。
熒光光譜法具有靈敏度高、選擇性強、用樣量少、方法簡便、工作曲線線形范圍寬等優(yōu)點，可以廣泛應用于生命科學、醫(yī)學、藥學和藥理學、有機和無機化學等領域。
熒光分光光度計使用說明：
開機時，請先開氙燈電源，再開主機電源。每次開機后請先確認一下一起兩邊排熱風扇工作正常，以確保儀器正常工作，發(fā)現(xiàn)風扇有故障，應停機檢查。
主機工作時頂部排熱器溫度很高,切勿觸摸,以免受傷.氙燈點亮后需一定時間穩(wěn)定，故進行精密測試應在30分鐘以上。當氙燈未能觸發(fā)，并連續(xù)發(fā)生“吱吱”高頻聲或“叭叭”打火聲時，請立即關掉氙燈電源，稍后數(shù)秒重新觸發(fā)。請盡量減少不必要的氙燈觸發(fā)次數(shù)，避免氙燈在高壓下反復觸發(fā)。
封閉氙燈電源后，若要重新使用，請等待60秒以后重新觸發(fā)。運行未知濃度的樣品測試時，靈敏度設置請從低位向高圍（0-7）逐步設置，當靈敏度較高時（>3），為了保護光電倍增管，請擁護勿將強光置進樣品室內(nèi)。當（僅當）操縱者錯誤操縱或其他干擾引起微機錯誤時，應該立即關斷主機電源，重新啟動，但無須關斷氙燈電源。單色器內(nèi)用螺絲緊固處不得松動，光學器件和儀器運行環(huán)境需保護清潔。清潔儀器外表時,請勿使用乙醇乙MI等有機溶劑,請勿在工作中清潔,不使用時請加防塵罩.比色皿保持清潔。
熒光分光光度計是用于掃描液相熒光標記物所發(fā)出的熒光光譜的一種儀器。其能提供包括激發(fā)光譜、發(fā)射光譜以及熒光強度、量子產(chǎn)率、熒光壽命、熒光偏振等許多物理參數(shù)，從各個角度反映了分子的成鍵和結構情況。通過對這些參數(shù)的測定，不但可以做一般的定量分析，而且還可以推斷分子在各種環(huán)境下的構象變化，從而闡明分子結構與功能之間的關系。熒光分光光度計的激發(fā)波長掃描范圍一般是190~650nm，發(fā)射波長掃描范圍是200~800nm?？捎糜谝后w、固體樣品（如凝膠條）的光譜掃描。
熒光分光光度計的原理：
由高壓汞燈或氙燈發(fā)出的紫外光和藍紫光經(jīng)濾光片照射到樣品池中，激發(fā)樣品中的熒光物質(zhì)發(fā)出熒光，熒光經(jīng)過濾過和反射后，被光電倍增管所接受，然后以圖或數(shù)字的形式顯示出來。
物質(zhì)熒光的產(chǎn)生是由在通常狀況下處于基態(tài)的物質(zhì)分子吸收激發(fā)光后變?yōu)榧ぐl(fā)態(tài)，這些處于激發(fā)態(tài)的分子是不穩(wěn)定的，在返回基態(tài)的過程中將一部分的能量又以光的形式放出，從而產(chǎn)生熒光。
不同物質(zhì)由于分子結構的不同，其激發(fā)態(tài)能級的分布具有各自不同的特征，這種特征反映在熒光上表現(xiàn)為各種物質(zhì)都有其特征熒光激發(fā)和發(fā)射光譜，因此可以用熒光激發(fā)和發(fā)射光譜的不同來定性地進行物質(zhì)的鑒定。
在溶液中，當熒光物質(zhì)的濃度較低時，其熒光強度與該物質(zhì)的濃度通常有良好的正比關系，即IF=KC，利用這種關系可以進行熒光物質(zhì)的定量分析，與紫外-可見分光光度法類似，熒光分析通常也采用標準曲線法進行。
熒光分光光度計與紫外分光光度計屬一類產(chǎn)品，結構均由激發(fā)光源、單色器、樣品室、光電倍 增管和讀出（記錄）裝置所組成。但是它們光源是不同的，熒光分光光度計多采用高壓汞燈、氙燈和激光光源。同時，熒光測量多采用激發(fā)光和發(fā)射光成直角的光路，儀器組件的布置有所不同。
下圖為某型號熒光分光光度計的光學系統(tǒng)圖，其主要工作原理是：當光源光束經(jīng)入射單色器色散，提取所需波長單色光照射于樣品上，由樣品發(fā)出的熒光經(jīng)發(fā) 射單色器色散后照射于光電倍增管，光電倍增管把熒光強度信號轉(zhuǎn)化成電信號并經(jīng)放器放大后記錄或讀出信號。
熒光分光光度計的光學系統(tǒng)圖
1.氙燈（150W）；2.透鏡；3.光束分裂器；4.水平狹縫；5.激發(fā)單色器光柵；6.參考放電管；7.關閘；8.樣品室關閘；10.發(fā)射單色器光柵；12.光電倍增管
(1)激發(fā)光源：要比吸收法中光源強度大。
汞燈：發(fā)射強度大、穩(wěn)定，不需復雜電源，但譜線不連續(xù)，數(shù)目少，主要用于濾片熒光計。
碘鎢燈：提供連續(xù)光譜300~700mn。
氙燈：發(fā)出射線的強度大，譜線連續(xù)，分布于200~700 nm光域內(nèi)，且在300~400nm 波段內(nèi)射線強度幾乎相等，但該燈的電源功率要求大，且電源穩(wěn)定，因此電源結構復雜。
激光：發(fā)光強度大，能極大地提高熒光分析的靈敏度。
(2)樣品池：通常由石英池（液體樣品用）或固體樣品架（粉末或片狀樣品）組成。測量液體時，光源與檢測器成直角安排；測量固體時，光源與檢測器成銳角安排。低溫熒光測定時在一樣品池外套一個液氮的透明石英真空瓶。
(3)單色器：熒光分光計通常具有兩個濾光片：第一濾光片在光源與樣品池之間，濾去不需要的光，讓需要的激發(fā)光通過。第二濾光片在樣品池與檢測器之間，濾去溶劑散射 光、容器表面散射光、雜質(zhì)發(fā)出的光等，讓待測物質(zhì)發(fā)射的熒光通過。
熒光分光光度計通常具有兩個光柵，位置同濾光片，單色性好。
(4)檢測器：因熒光通常較弱，采用光電倍增管作檢測器，靈敏度高。選擇光電倍增管要考慮：響應波長、靈敏度和嗓聲水平。 藍敏管對蛋白質(zhì)、核酸的測量適用，而紅敏管則適用于熒光染料檢測。
(5)顯示系統(tǒng)：光度表、計算機操作系統(tǒng)等。
補充說明：與紫外分光光度計的結構區(qū)別：
1.熒光分光光度計采用的是垂直的測量方式，以消除透射光的影響。
2.檢測器前面有無單色器，熒光分光光度計有兩個單色器又上圖可以看出，能夠獲得單色性較好的激發(fā)光并消除其他雜散光干擾。
正確了解熒光分光光度計的結構，也是能夠幫助我們更好使用和操作，一定要仔細閱讀哈~
下一篇：恒溫水浴的操作使用及注意事項
449717568