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液相色譜注意事項 液相色譜如何操作

時間:2020-08-31    來源:儀多多儀器網(wǎng)    作者:儀多多商城     

液相色譜注意事項

1.流動相必須用HPLC級的試劑.
2.流動相過濾后要用超聲波脫氣.脫氣后應該恢復到濕溫后使用.
3.長時間不使用儀器,應該將柱子取下用堵頭封好保存.
4.每次做完樣品后應該用溶解樣品的溶劑清洗進樣器.

液相色譜柱的使用方法

  色譜柱在使用前,可以進行柱的性能測試,并將結果保存起來,作為今后評價柱性能變化的參考。但要注意:柱性能可能由于所使用的樣品、流動相、柱溫等條件的差異而有所不同;另外,在做柱性能測試時是按照色譜柱出廠報告中的條件進行(出廠測試所使用的條件是較佳條件),只有這樣,測得的結果才有可比性。

  1、樣品的前處理:

  a、可以使用流動相溶解樣品。

  b、使用予處理柱除去樣品中的強極性或與柱填料產(chǎn)生不可逆吸附的雜質(zhì)。

  c、使用0.45?m的過濾膜過濾除去微粒雜質(zhì)。

  2、流動相的配制:

  液相色譜是樣品組分在柱填料與流動相之間質(zhì)量交換而達到分離的目的,因此要求流動相具備以下的特點:

  a、流動相對樣品具有一定的溶解能力,保證樣品組分不會沉淀在柱中(或長時間保留在柱中)。

  b、流動相具有一定惰性,與樣品不產(chǎn)生化學反應(特殊情況除外)。

  c、流動相的黏度要盡量小,以便在使用較長的分析柱時能得到好的分離效果;同時降低柱壓降,延長液體泵的使用壽命(可運用提高溫度的方法降低流動相的黏度)。

  d、流動相的物化性質(zhì)要與使用的檢測器相適應。如使用UV檢測器,可以使用對紫外吸收較低的溶劑配制。

  e、流動相沸點不要太低,否則容易產(chǎn)生氣泡,導致實驗無法進行。

  f、在流動相配制好后,一定要進行脫氣。除去溶解在流動相中的微量氣體既有利于檢測,還可以防止流動相中的微量氧與樣品發(fā)生作用。

  3、流動相流速的選擇:

  因柱效是柱中流動相線性流速的函數(shù),使用不同的流速可得到不同的柱效。對于一根特定的色譜柱,要追求較佳柱效,可以使用較佳流速。對內(nèi)徑為4.6mm的色譜柱,流速一般選擇1ml/min,對于內(nèi)徑為4.0mm柱,流速0.8ml/min為佳。

  當選用較佳流速時,分析時間可能延長??刹捎酶淖兞鲃酉嗟南礈鞆姸鹊姆椒ㄒ钥s短分析時間(如使用反相柱時,可適當增加甲醇或乙腈的含量)。

標簽: 液相色譜柱 液相色譜柱 液相色譜柱的使用方法_液相色譜柱   【儀器網(wǎng) 使用手冊】色譜法的分離原理是溶于流動相(mobile phase)中的各組分經(jīng)過固定相時,由于與固定相(stationary phase)發(fā)生作用(吸附、分配、離子吸引、排阻、親和)的大小、強弱不同,在固定相中滯留時間不同,從而先后從固定相中流出的分離過程,其實質(zhì)是一個吸附與解吸附的平衡過程。
 
  色譜柱與流動相的溫度,影響著組分的分離平衡,對于使用柱溫箱的有益之處我們認為有以下幾點:
 
  1. 可以使保留時間相對恒定,對需要進行的定性鑒別可提高其可信度;
 
  2. 保留時間相對恒定是進行定量的基礎,不同的保留時間不僅不能判斷其成份的一致性,同時,由于保留時間不同峰面積也必將發(fā)生變化,其檢測結果的可信度將受質(zhì)疑。
 
  3. 溫差較大時,因保留時間不穩(wěn)將增加檢測工作的麻煩。
 
  4. 溫度低的時候,因流動相黏度增加而使檢測時間延長,同時增加泵的磨損,影響設備的使用壽命。
 
  5. 溫度低的時候還因溶解度相對下降而出現(xiàn)緩沖鹽結晶而堵塞泵、進樣閥、管道、色譜柱的現(xiàn)象。
 
  6. 溫度低時還因溶解度下降使雜質(zhì)吸附在填料上而難于洗脫,從而 影響色譜柱的使用壽命。
 
  ☆對于流動相溫度的控制目前沒有很好的方法,即使是整個室內(nèi)使用空調(diào)也難于使流動相的溫度保持一致,因此,目前大多采用控制柱溫的方法,使用柱溫箱能耗低,控溫精度高,是液相色譜儀必備的輔助設備,藥品標準中,有不少品種對柱溫也有明確要求。


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