（一）消化
1、準(zhǔn)備6個凱氏燒瓶，標(biāo)號。1、2、3號燒瓶中分別加入適當(dāng)濃度的蛋白溶液1.0mL，樣品要加到燒瓶底部，切勿沾在瓶口及瓶頸上。再依次加入硫酸鉀-硫酸銅接觸劑0.3g，濃硫酸2.0mL，30%過氧化氫1.0mL。4、5、6號燒瓶作為空白對照，用以測定試劑中可能含有的微量含氮物質(zhì)，對樣品測定進(jìn)行校正。4、5、6號燒瓶中加入蒸餾水1.0mL代替樣液，其余所加試劑與1、2、3號燒瓶相同。
2、將加好試劑的各燒瓶放置消化架上，接好抽氣裝置。先用微火加熱煮沸，此時燒瓶內(nèi)物質(zhì)炭化變黑，并產(chǎn)生大量泡沫，務(wù)必注意防止氣泡沖出管口。待泡沫消失停止產(chǎn)生后，加大火力，保持瓶內(nèi)液體微沸，至溶液澄清后，再繼續(xù)加熱使消化液微沸15min。在消化過程中要隨時轉(zhuǎn)動燒瓶，以使內(nèi)壁粘著物質(zhì)均能流入底部，以保證樣品完全消化。消化時放出的氣體內(nèi)含SO2，具有強(qiáng)烈刺激性，因此自始自終應(yīng)打開抽水泵將氣體抽入自來水排出。整個消化過程均應(yīng)在通風(fēng)櫥中進(jìn)行。消化完全后，關(guān)閉火焰，使燒瓶冷卻至室溫。
（二）蒸餾和吸收
蒸餾和吸收是在微量凱氏定氮儀內(nèi)進(jìn)行的。凱氏定氮蒸餾裝置種類甚多，大體上都由蒸氣發(fā)生、氨的蒸餾和氨的吸收三部分組成。
1、儀器的洗滌
儀器安裝前，各部件需經(jīng)一般方法洗滌干凈，所用橡皮管、塞須浸在10%NaOH溶液中，煮約10min，水洗、水煮10min，再水洗數(shù)次，然后安裝并固定在一只鐵架臺上。
儀器使用前，微量全部管道都須經(jīng)水蒸氣洗滌，以除去管道內(nèi)可能殘留的氨，正在使用的儀器，每次測樣前，蒸氣洗滌5min即可。較長時間未使用的儀器，重復(fù)蒸氣洗滌，不得少于三次，并檢查儀器是否正常。仔細(xì)檢查各個連接處，保證不漏氣。
首先在蒸氣發(fā)生器中加約2/3體積蒸餾水，加入數(shù)滴硫酸使其保持酸性，以避免水中的氨被蒸出而影響結(jié)果，并放入少許沸石（或毛細(xì)管等），以防爆沸。沿小玻杯壁加入蒸餾水約20mL讓水經(jīng)插管流入反應(yīng)室，但玻杯內(nèi)的水不要放光，塞上棒狀玻塞，保持水封，防止漏氣。蒸氣發(fā)生后，立即關(guān)閉廢液排放管上的開關(guān)，使蒸氣只能進(jìn)入反應(yīng)室，導(dǎo)致反應(yīng)室內(nèi)的水迅速沸騰，蒸出蒸氣由反應(yīng)室上端口通過定氮球進(jìn)入冷凝管冷卻，在冷凝管下端放置一個錐形瓶接收冷凝水。從定氮球發(fā)燙開始計(jì)時，連續(xù)蒸煮5min，然后移開煤氣燈。沖洗完畢，夾緊蒸氣發(fā)生器與收集器之間的連接橡膠管，由于氣體冷卻壓力降低，反應(yīng)室內(nèi)廢液自動抽到反應(yīng)室外殼中，打開廢液排出口夾子放出廢液。如此清洗2～3次，再在冷凝管下?lián)Q放一個盛有硼酸-指示劑混合液的錐形瓶使冷凝管下口完全浸沒在溶液中，蒸餾1～2min，觀察錐形瓶內(nèi)的溶液是否變色。如不變色，表示蒸餾裝置內(nèi)部已洗干凈。移去錐形瓶，再蒸餾1～2min，用蒸餾水沖洗冷凝器下口，關(guān)閉煤氣燈，儀器即可供測樣品使用。
2、無機(jī)氮標(biāo)準(zhǔn)樣品的蒸餾吸收
由于定氮操作繁瑣，為了熟悉蒸餾和滴定的操作技術(shù)，初學(xué)者宜先用無機(jī)氮標(biāo)準(zhǔn)樣品進(jìn)行反復(fù)練習(xí)，再進(jìn)行有機(jī)氮未知樣品的測定。常用巳知濃度的標(biāo)準(zhǔn)硫酸銨測試三次。
取潔凈的100mL錐形瓶五只，依次加入2%硼酸溶液20mL，次甲基藍(lán)-甲基紅混合指示劑（呈紫紅色）3～4滴，蓋好瓶口待用。取其中一只錐形瓶承接在冷凝管下端，并使冷凝管的出口浸沒在溶液中。注意：在此操作之前必須先打開收集器活塞，以免錐形瓶內(nèi)液體倒吸。準(zhǔn)確吸取2mL硫酸銨標(biāo)準(zhǔn)液加到玻杯中，小心提起棒狀玻塞使硫酸銨溶液慢慢流入蒸餾瓶中，用少量蒸餾水沖洗小玻杯3次，一并放人蒸餾瓶中。然后用量筒向小玻杯中加入10 mL 30％NaOH溶液，使堿液慢慢流入蒸餾瓶中，在堿液尚未完全流入時，將棒狀玻塞蓋緊。向小玻杯中加約5mL蒸餾水，再慢慢打開玻塞，使一半水流入蒸餾瓶，一半留在小玻杯中作水封。關(guān)閉收集器活塞，加熱蒸氣發(fā)生器，進(jìn)行蒸餾。錐形瓶中的硼酸-指示劑混合液由于吸收了氨，由紫紅色變成綠色。自變色時起，再蒸餾3～5min，移動錐形瓶使瓶內(nèi)液面離開冷凝管下口約lcm，并用少量蒸餾水沖洗冷凝管下口，再繼續(xù)蒸餾1min，移開錐形瓶，蓋好，準(zhǔn)備滴定。
在一次蒸餾完畢后，移去煤氣燈，夾緊蒸氣發(fā)生器與收集器間的橡膠管，排除反應(yīng)完畢的廢液，用水沖洗小玻杯幾次，并將廢液排除。如此反復(fù)沖洗干凈后，即可進(jìn)行下一個樣品的蒸餾。按以上方法用標(biāo)準(zhǔn)硫酸銨再做兩次。另取2mL蒸餾水代替標(biāo)準(zhǔn)硫酸銨進(jìn)行空白測定二次。將各次蒸餾的錐形瓶一起滴定。
3、未知樣品及空白的蒸餾吸收
將消化好的蛋白樣品三支，空白對照液三支，依次作蒸餾吸收。
加5mL熱的蒸餾水至消化好的樣品或空白對照液中，通過小玻杯加到反應(yīng)室中，再用熱蒸餾水洗滌小玻杯3次，每次用水量約3mL，洗滌液一并倒入反應(yīng)室內(nèi)。其余操作按標(biāo)準(zhǔn)硫酸銨的蒸餾進(jìn)行。
由于消化液內(nèi)硫酸鉀濃度高而呈粘稠狀，不易從凱氏燒瓶內(nèi)倒出，必須加入熱蒸餾水5 mL稀釋之，如果有結(jié)晶析出，必須微熱溶解，趁熱加入玻杯，使其流入反應(yīng)室。此外，還應(yīng)當(dāng)注意趁儀器洗滌尚未完全冷卻時立即加入樣品或空白對照液，否則消化液通過冷卻的管道容易析出結(jié)晶，造成堵塞。
（三）凱氏定氮儀滴定
樣品和空白蒸餾完畢后，一起進(jìn)行滴定。
打開接受瓶蓋，用酸式微量滴定管以0.0100mol/L的標(biāo)準(zhǔn)鹽酸溶液進(jìn)行滴定。待滴至瓶內(nèi)溶液呈暗灰色時，用蒸餾水將錐形瓶內(nèi)壁四周淋洗一次。若振搖后復(fù)現(xiàn)綠色，應(yīng)再小心滴入標(biāo)準(zhǔn)鹽酸溶液半滴，振搖觀察瓶內(nèi)溶液顏色變化，暗灰色在一二分鐘內(nèi)不變，當(dāng)視為到達(dá)滴定終點(diǎn)。若呈粉紅色，表明已超越滴定終點(diǎn)，可在已滴定耗用的標(biāo)準(zhǔn)鹽酸溶液用量中減去0.02mL，每組樣品的定氮終點(diǎn)顏色必須完全一致?？瞻讓φ找航邮芷績?nèi)的溶液顏色不變或略有變化尚未出現(xiàn)綠色，可以不滴定。記錄每次滴定耗用標(biāo)準(zhǔn)鹽酸溶液毫升數(shù)，供計(jì)算用。

　　

 

凱氏定氮儀的使用問答

　　1、凱氏定氮儀在蒸餾時翻滾劇烈，會對操作者構(gòu)成危險嗎？

　　答：一般不會，凱氏定氮儀在蒸餾時翻滾劇烈，是水蒸氣大量進(jìn)入消化管液體翻滾，并非劇烈反應(yīng)造成；而且儀器有超壓保護(hù)裝置，可以保持管路內(nèi)部常壓，避免危險。

　　2、凱氏定氮儀工作中對水質(zhì)有什么要求？

　　答：凱氏定氮儀的蒸餾水桶內(nèi)要裝蒸餾水或純水，機(jī)器長期不用要將蒸餾器里水放掉。

　　3、凱氏定氮儀開機(jī)沒聲音是怎么回事？

　　答：凱氏定氮儀開機(jī)沒聲音，如果機(jī)器電源開關(guān)內(nèi)紅燈亮，說明是定氮儀內(nèi)保險管燒斷了，保險管位置在機(jī)器內(nèi)部靠近電源開關(guān)接口5公分處黑色殼子內(nèi)。

　　4、凱氏定氮儀開機(jī)后蒸餾器內(nèi)不加水怎么解決？

　　答：開機(jī)半分鐘后檢查蒸餾水桶是否漏氣，能被氣充鼓是正常；檢查蒸餾水桶內(nèi)水位是否超過三分之一，不夠補(bǔ)齊；檢查蒸餾水桶的位置，低于放置儀器的臺面，壓力不夠，加不上水；檢查蒸餾水桶進(jìn)氣、進(jìn)液管是否接錯，接錯桶內(nèi)會產(chǎn)生氣泡并發(fā)出聲響；檢查排水閥，應(yīng)呈關(guān)閉狀態(tài)。

　　5、凱氏定氮儀蒸鍋不加熱，不能產(chǎn)生蒸氣，為什么？

　　答：如果機(jī)器能正常加堿，不能加熱出蒸氣，判定加熱絲可能燒壞了，可拿萬用表量一下加熱絲正負(fù)極，不通可確定加熱絲損壞，換新加熱絲。

　　如果機(jī)器不能正常加堿，開機(jī)后又沒有任何聲音，判斷是保險絲燒斷了，保險管位置在機(jī)器內(nèi)部靠近電源開關(guān)接口5公分處黑色殼子內(nèi)。

　　6、凱氏定氮儀工作時聲音大，是否正常？

　　答：屬于正?，F(xiàn)象，這是機(jī)器內(nèi)部氣泵工作的聲音。

　　7、凱氏定氮儀工作中不能加堿、加堿沒有聲音，為什么？

　　答：檢查堿桶是否漏氣，被氣充鼓機(jī)器才能正常工作；儀器使用時間過長，堿管內(nèi)部會產(chǎn)生結(jié)晶，導(dǎo)致加液時流速降低，沒有聲音。

　　8、定氮儀在工作時，從頂部冒出類似煙的氣體，怎么回事？

　　答：檢查冷卻水進(jìn)水的水龍頭是否打開，冷卻水關(guān)閉或者水量小都會導(dǎo)致消化管出來的蒸氣不能被冷凝，從機(jī)器里冒出來的水蒸氣，看起來類似煙。

　　9、定氮儀使用中發(fā)現(xiàn)消化管進(jìn)滿水，怎么解決？

　　答：定氮儀使用中發(fā)生消化管進(jìn)滿水，是由于機(jī)器控制水位器導(dǎo)電性降低造成的，解決辦法：打開水位器取出探針用砂紙打磨，去掉氧化層；在蒸餾水桶里加入3-5克實(shí)驗(yàn)室用氯化鈉，搖勻溶解。

　　10、定氮儀使用中發(fā)生蒸餾器、水位器進(jìn)滿水，硼酸吸收液容器中進(jìn)水，怎么解決？

　　答：是機(jī)器控制水位器導(dǎo)電性降低造成的，解決辦法：打開水位器取出探針用砂紙打磨，去掉氧化層；在蒸餾水桶里加入3-5克實(shí)驗(yàn)室用氯化鈉，搖勻溶解。

　　11、定氮儀使用中消化管中白色管子發(fā)生倒吸，怎樣解決？

　　答:儀器停止工作（蒸餾器停止加熱），氣閥未能及時關(guān)閉，會產(chǎn)生倒吸現(xiàn)象，可在白色管子上扎一些小孔。氣閥損壞，不能關(guān)閉，也會倒吸。

　　12、定氮儀工作中隔3-5秒鐘會發(fā)出聲響，是否正常？

　　答：這種聲響屬于正?，F(xiàn)象，儀器工作狀態(tài)下，蒸餾器會不斷加熱產(chǎn)生水蒸汽而消耗水，儀器會自動打開水閥進(jìn)行補(bǔ)水，聲響就是水閥打開、關(guān)閉的聲音，屬于正?，F(xiàn)象。

標(biāo)簽: 凱氏定氮儀 凱氏定氮儀 凱氏定氮儀的使用問答_凱氏定氮儀 自動凱氏定氮儀的性能特點(diǎn)是怎樣的呢？

    定氮儀即凱式定氮儀，又叫蛋白質(zhì)測定儀，是依據(jù)經(jīng)典(凱氏定氮)方法設(shè)計(jì)的自動測氮蒸餾系統(tǒng)。

    目前國際國內(nèi)的凱式定氮儀的工作原理大同小異都是依據(jù)凱式定氮法測氮的，主要區(qū)別就是他們的自動化程度和工藝的先進(jìn)程度了；

    自動凱氏定氮儀的性能

    自動凱氏定氮儀采用國際通用的凱氏定氮法對含氮樣品進(jìn)行自動定氮。

    全智能化軟件設(shè)計(jì)，讓實(shí)驗(yàn)人員在幾分鐘內(nèi)輕松的完成樣品的蒸餾。

    完備的安全系統(tǒng)充分體現(xiàn)了人性化智慧。

    對所需試劑自動定量加液，全過程無人值守，各種狀態(tài)智能檢測。

    蒸餾、冷凝自動清洗系統(tǒng)使測量精度進(jìn)一步提高。

    為儀器配備多語言版本，符合您的語言習(xí)慣，并專門為中國用戶定制中文對話界面。

    界面友好，顯示信息豐富，使用戶能夠輕而易舉的掌握儀器的使用。

    自動凱氏定氮儀特點(diǎn)：

    手動自動雙模式任意切換

    堿液自動定量加注

    硼酸吸收液自動定量加注

    自動、手動兩種方式添加稀釋液滿足實(shí)驗(yàn)需要

    可任意設(shè)置蒸餾時間，蒸餾結(jié)束自動報警

    自動清洗控制系統(tǒng)，實(shí)現(xiàn)智能化的蒸餾器清洗,使測量精度更高

    完美的安全防護(hù)系統(tǒng)，可實(shí)現(xiàn)對蒸餾器及管路的超溫超壓的測量和保護(hù)

    定氮管周邊設(shè)施智能化設(shè)計(jì)，包含了對于安全的防護(hù)設(shè)計(jì)以及不在位提示功能

    智能化的冷卻水控制系統(tǒng)可實(shí)現(xiàn)對冷卻水的控制及檢測

    緊急停止操作功能應(yīng)對不時之需

    故障自動檢測及聲光報警系統(tǒng)智能化設(shè)計(jì)

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