高效液相色譜儀也叫高壓液相色譜、高速液相色譜、高分離度液相色譜等，它是在經(jīng)典液相色譜法的基礎上，于60年代后期引入了氣相色譜理論而迅速發(fā)展起來的。它與經(jīng)典液相色譜法的區(qū)別是填料顆粒小而均勻，小顆粒具有高柱效，但會引起高阻力，需用高壓輸送流動相，故又稱高壓液相色譜。又因分析速度快而稱為高速液相色譜。
由于液相色譜分析技術涉及的樣品種類繁多、樣品組成及其濃度復雜，樣品物理形態(tài)多變，對液相色譜儀的正常分析測定造成一些干擾因素，如果不注意儀器的維護和保養(yǎng)，會對日常的分析測定帶采不便，所以需要對儀器的使用以及維護要做一些了解才能熟練掌握這種分析技術。
高效液相色譜儀的操作過程：
1、翻開HPLC工作站（包含計算機軟件和色譜儀），銜接好活動相管道，銜接檢測體系。
2、對抽濾后的活動相進行超聲脫氣10-20分鐘。
3、過濾活動相，根據(jù)需求挑選不一樣的濾膜。
4進入HPLC操控界面主菜單，點擊manual，進入手動菜單。
5、有一段時刻沒用，或許換了新的活動相，需求先沖刷泵和進樣閥。沖刷泵，直接在泵的出水口，用針頭抽取。沖刷進樣閥，需求在manual菜單下，先點擊purge，再點擊start，沖刷時速度不要超越10ml/min。
6、調(diào)理流量，初度運用新的活動相，能夠先試一下壓力，流速越大，壓力越大，通常不要超越2000。點擊injure，選用適宜的流速，點擊on，走基線，調(diào)查基線的狀況。
7、規(guī)劃走樣辦法。點擊file，選擇select?users?and?methods，能夠選擇現(xiàn)有的各種走樣辦法。若需樹立一個新的辦法，點擊new?method。選擇需求的配件，包含進樣閥，泵，檢測器等，根據(jù)需求而不一樣。選完后，點擊protocol。一個完整的走樣辦法需求包含：a、進樣前的穩(wěn)流，通常2-5分鐘；b、基線歸零；c、進樣閥的loading-inject變換；d、走樣時刻，隨不一樣的樣品而不一樣。
8、進樣和進樣后操作。選定走樣辦法，點擊start。進樣，一切的樣品均需過濾。辦法走完后，點擊postrun，可記載數(shù)據(jù)和做符號等。悉數(shù)樣品走完后，再用上面的辦法走一段基線，洗掉剩余物。
9、關機時，先關計算機，再關液相色譜儀。
高效液相色譜儀可以完成二元高壓梯度洗脫，也可以拓展為制備系統(tǒng)，采用高壓混合器連接兩個高壓恒流泵，利用RS232通訊，即可實現(xiàn)梯度分析；
便于用戶自由選擇與搭配，混合器材主要由不銹鋼、生物惰性PEEK等構成，用途廣泛；
可廣泛應用于研究開發(fā)、醫(yī)藥檢驗、食品檢測、化工分析、環(huán)境監(jiān)測等眾多分析領域。
高效液相色譜儀分離原理：液-液分配(Liquid-liquid Partition Chromatography)及化學鍵合相色譜(Chemically Bonded Phase Chromatography) 流動相和固定相都是液體。
流動相與固定相之間應互不相溶（極性不同，避免固定液流失），有一個明顯的分界面。
當試樣進入色譜柱，溶質(zhì)在兩相間進行分配。達到平衡時，高效液相色譜儀報價，服從于高效液相色譜計算公式；
6種定量計算方法：歸一法、修正歸一法、帶比例因子的修正歸一法、內(nèi)標法、外標法，高效液相色譜儀適用范圍，以及指數(shù)計算法。
高效液相色譜儀特點：
1、梯度洗脫內(nèi)部軟件可自控制，編輯、存貯60個梯度方法，運行復雜的梯度程序；
2、泵形式：串聯(lián)雙柱塞 浮動式密封圈；泵頭自沖洗功能，泵無須手動排空即可輸液“自吸式單向閥”技術，可延長密封圈使用壽命；
3、光路系統(tǒng)采用精密定位結構和獨特的散熱技術，高效的光學系統(tǒng)和數(shù)字過濾；
4、程序化的溶劑類和壓縮因子，可自動補償；完整的預清洗功能，更于快速溶劑更換；
5、波長調(diào)節(jié)功能：既可由鍵盤面板控制也可由程序軟件設定，全封閉集成型光電檢測元件，無需任何機械部分調(diào)整即可選擇或改變波長；
6、光源運行時間在線監(jiān)測并顯示，方便用戶確定光源壽命；
7、三條流量校正曲線以及特有的多點參數(shù)校正，保障了極高的流量準確性；
8、梯度：高壓2-3元；梯度方式：高壓，梯度洗脫內(nèi)部軟件可自控制，可通過PC機及泵控制；
9、實時顯示樣品池和參比池能量，方便判斷光源和流通池狀態(tài)；
10、紫外檢測器具有自動波長定位調(diào)整，自動調(diào)零，多量程輸出選擇；
11、智能化高，可實現(xiàn)網(wǎng)絡化平臺監(jiān)控，提高了你的QC效益；
12、自動化，讓你從繁鎖的分析操作中解放出更多的時間。
1、流動相的抽濾要求
色譜純試劑，二次蒸餾水，緩沖鹽一定要過濾。
2、吸濾頭
特殊情況下可拆下濾頭抽取以判斷其中是否堵塞；亦可用注射器吸取流動相通過吸濾頭打出以判斷其是否堵塞。若有堵塞情況可用異丙醇超聲波清洗；清洗不成功則需要更換。
3、單向閥
如遇到泵壓不穩(wěn)或流動相不能抽取，則可能是單向閥出現(xiàn)問題，卸下用異丙醇超聲波清洗，清洗時須按其安裝的反相放置在小燒杯中，切記不可與安裝方向倒置超洗！
4、泵頭
泵頭漏液或出現(xiàn)其它故障一般要申請維修(如漏液，或更換柱塞桿及其密封墊等)。
5、過濾片
當色譜峰出現(xiàn)異常情況時，有可能是此部件被污染，拆下用異丙醇超洗或更換過濾墊片。
6、排液閥
此處不能完全密封或漏液時一般是其中的墊片污染或磨損，可卸下后取出其墊片用異丙醇超聲波清洗或更換墊圈。
7、手動進樣器
平時應注意用二次蒸餾水和甲醇在裝載狀態(tài)及進樣分析狀態(tài)清洗；如出現(xiàn)漏液現(xiàn)象，原因極可能為轉子密封墊磨損或污染，一般須申請維修或更換配件。
8、流通池
在色譜峰不正常時可能是此部件被污染可拆卸后取出其中的墊片用異丙醇超洗(可根據(jù)說明書進行操作或申請維修)。
9、工作站
出現(xiàn)死機可重啟計算機；不正常運行時，首先可更換電腦測試其硬件故障；或在本機上重新插撥接口、重新安裝軟件。
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