分光光度計的基本原理是:物質(zhì)在光的照射下會產(chǎn)生對光吸收的效應(yīng),而且物質(zhì)對光的吸收是具有選擇性的。各種不同物質(zhì)都具有其各自的吸收光譜。
因此不同波長的單色光通過溶液時其光的能星就會被不同程度的吸收,光能量被吸收的程度和物質(zhì)的濃度有一定的比例關(guān)系,即符合比耳定律。
在使用可見分光光度計前先了解一下的操作規(guī)程沒有錯。
開機(jī)
1、開機(jī)前，檢查電源插座是否接上;
2、啟動電源開關(guān)，儀器顯示"723C"
3、儀器經(jīng)自測后，按"MODE"鍵后再按"2"鍵，儀器顯示"DATA"
基本使用方法
1、按"GO TO λ"鍵，輸入設(shè)定波長;
2、四個比色皿，其中R位置放置參比試樣，其余三個放入待測試樣。將比色皿放入樣品池內(nèi)的比色皿架中，蓋上樣品池蓋;
3、將參比試樣推入光路，按"ABS%"鍵，使儀器自動調(diào)零和置滿度;
4、然后將待測試樣推入光路，顯示試樣的吸光度值;
5、如果要想將待測試樣的數(shù)據(jù)打印出，只需按"START/STOP"鍵即可。
可見分光光度計的使用注意事項
每天使用結(jié)束后，應(yīng)仔細(xì)檢查樣品室內(nèi)是否有溶液溢出，若有溢出必須隨時用濾紙吸干;
儀器使用完畢，用防塵套罩住。
雙光束紫外-可見分光光度計（以下簡稱儀器），系指從單色器發(fā)出的單色光經(jīng)光束開關(guān)（斬光器）分成為樣品和參比兩條光束結(jié)構(gòu)的儀器。
它能消除光源不穩(wěn)和放大器增益變化的影響，并能自動記錄和掃描物質(zhì)的吸收光譜圖。
儀器在開機(jī)后通常會做一些自檢，但仍應(yīng)按本規(guī)程進(jìn)行檢定。儀器的波長范圍包括195~800nm，狹縫為0.1~5nm可調(diào)。
工作原理
紫外可見分光光度法是利用物質(zhì)分子對紫外可見光譜區(qū)的輻射的吸收來進(jìn)行分析的一種儀器分析方法。
這種分子吸收光譜產(chǎn)生于價電子能級的躍遷，它廣泛用于無機(jī)和有機(jī)物質(zhì)的定性和定量分析。
朗伯一一比耳定律（Lambet-Beer）是光吸收的基本定律，俗稱光吸收定律，是分光光度法定量分析的依據(jù)和基礎(chǔ)。
當(dāng)入射光波長一定時，溶液的吸光度是吸光物質(zhì)的濃度c及吸收介質(zhì)厚度（吸收光程）的函數(shù)。
其常用表達(dá)式如下（式中ε為系數(shù)）：
A=ε·c·l
紫外見分光光度計是基于紫外可見分光光度法的原理工作的常規(guī)分析儀器。根據(jù)光路設(shè)計的不同，紫外可見分光光度計可以分為單光束分光光度計、雙光束分光光度計和雙波長分光光度計。
制定依據(jù)
本規(guī)程主要參照國家計量檢定規(guī)程《JJG178-2007紫外、可見、近紅外分光光度計》、《JJF1641-2017紫外可見分光光度計型式評價大綱》及《中國藥典》2015年版四部指導(dǎo)通則“0401紫外-可見分光光度法”擬定。
項目及技術(shù)要求
波長準(zhǔn)確度≤±1.0nm（紫外光區(qū)），≤±2.0nm（500nm附近）；
波長重復(fù)性≤0.5nm。
基線平直度≤0.01吸光度。
0%線噪聲≤0.1%，100%線噪聲≤0.5%.
吸光度準(zhǔn)確度應(yīng)符合規(guī)定。
雜散光<0.8%。
光譜帶寬≤標(biāo)示帶寬±20%。
吸收池配對誤差≤0.5%。
檢測結(jié)果處理
自檢結(jié)果全部符合技術(shù)要求者，即為合格，可以使用。若檢測結(jié)果不符合規(guī)定，應(yīng)重新調(diào)試儀器再進(jìn)行自檢，符合規(guī)定后方可使用。
分光光度法是根據(jù)被測物質(zhì)分子對紫外、可見波段范圍單色輻射的吸收或反射強(qiáng)度來進(jìn)行物質(zhì)的定性、定量或結(jié)構(gòu)分析的一種方法。
可見分光光度計的維護(hù)：
1、保護(hù)光源：光源燈有一定的壽命，儀器不工作時不要開燈，若工作間歇時間短，可不關(guān)燈。 一旦停機(jī)，則要待燈冷卻后再重新啟動，并預(yù)熱15min。
燈泡發(fā)黑或亮度明顯減弱或不穩(wěn)定時，就及時更換。 經(jīng)經(jīng)紫外光照射后形成結(jié)痕可用無水乙醇去除。
2、保證合適的工作環(huán)境溫度和濕度是影響儀器性能的重要因素。
不適宜的溫度和濕度可引起機(jī)械部件的銹蝕，使金屬鏡面的光潔度下降，引起儀器機(jī)械部分的誤差或性能下降；造成光柵、反射鏡、聚焦鏡等光學(xué)部件的鋁膜銹蝕，產(chǎn)生光能不足、雜散光、噪聲等；甚至使儀器停止工作，從而影響儀器壽命。維護(hù)保養(yǎng)時應(yīng)定期加以校正溫度和濕度。
3、定期清潔，保障環(huán)境和儀器內(nèi)衛(wèi)生條件，防塵。
儀器使用一定時間后，內(nèi)部會積累一定量的塵埃，建議由維修工程師或在工程師指導(dǎo)下定期開啟儀器外罩對內(nèi)部進(jìn)行除塵工作，同時將各發(fā)熱元件的散熱器重新緊固，對光學(xué)盒的密封窗口進(jìn)行清潔，必要時對光路進(jìn)行校準(zhǔn)，對機(jī)械部分進(jìn)行清潔和必要的潤滑，最后恢復(fù)原狀，再進(jìn)行一些必要的檢測、調(diào)校和記錄。
4、正確使用比色皿拿比色皿時，手指只能捏住比色皿的毛玻璃面，不要碰比色皿的透光面，以免沾污。
清洗比色皿時，先用水沖洗，再用蒸餾水洗凈。若被比色皿被有機(jī)物沾污，可用鹽酸-乙醇混合洗滌液（1:2）浸泡片刻，再用水沖洗。
每次做完實驗應(yīng)立即洗凈比色皿。比色皿外壁的水用擦鏡紙或細(xì)軟的吸水紙吸干，以保護(hù)透光面。
可見分光光度計是一種結(jié)構(gòu)簡潔、使用方便的單光束分光光度計，基于樣品對單色光的選擇吸收特性可用于對樣品進(jìn)行定性和定量分析。
廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥衛(wèi)生、臨床檢測、生物化學(xué)、石油化工、環(huán)保監(jiān)測、食品生產(chǎn)和質(zhì)量控制等部門作定性、定量分析，還可作為大、專院校和中學(xué)相關(guān)課程的教學(xué)演示和實驗儀器。
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