實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)服務(wù)所使用的熒光化學(xué)材料可分為兩大類,即熒光染料和熒光探針。熒光染料以SYBR GreenⅠ為主要代表,是非特異性熒光化學(xué)材料。熒光探針包括TaqMan、分子信標(biāo)、熒光標(biāo)記引物、雜交探針等,屬于特異性熒光材料。測(cè)吸光值一定要使用平底的培養(yǎng)板。要注意材質(zhì), 標(biāo)示Tissue Culture (TC) Treated是養(yǎng)細(xì)胞用的。U型或V型板,一般在某些特殊要求時(shí)才使用。如在免疫學(xué)方面,當(dāng)做兩種不同淋巴細(xì)胞混合培養(yǎng)時(shí),需要二者相互接觸刺激,這時(shí)一般會(huì)選用U型板,因?yàn)榧?xì)胞會(huì)由于重力的作用而聚集在很小的范圍內(nèi)內(nèi)。由于被釋放的熒光基團(tuán)數(shù)目和PCR產(chǎn)物數(shù)量是相對(duì)應(yīng)關(guān)系,且熒光強(qiáng)度同被釋放的熒光基團(tuán)的數(shù)目也是正比關(guān)系,因此該可對(duì)模板進(jìn)行準(zhǔn)確定量。TaqMan探針特異性好、準(zhǔn)確性高、假陽(yáng)性低、重復(fù)性比較好。但是需要設(shè)計(jì)特異性的探針,因此成本較高。
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胰蛋白酶Trypsin (Parenzyme) 為蛋白酶的一種,是從牛、羊、豬的胰臟提取的一種絲氨酸蛋白水解酶。在脊椎動(dòng)物中,作為消化酶而起作用。在胰臟是胰蛋白酶的前體胰蛋白酶原被合成后,作為胰液的成分而分泌,受腸激酶,或胰蛋白酶的限制分解成為活化胰蛋白酶,是肽鏈內(nèi)切酶,它能把多肽鏈中賴氨酸和精氨酸殘基中的羧基側(cè)切斷。它不僅起消化酶的作用,而且還能限制分解糜蛋白酶原、羧肽酶原、磷脂酶原等其它酶的前體,起活化作用。是特異性zui強(qiáng)的蛋白酶,在決定蛋白質(zhì)的氨基酸排列中,它成為不可缺少的工具。上用于膿胸、血胸、外科炎癥、潰瘍、創(chuàng)傷性損傷、瘺管等所產(chǎn)生的局部水腫、血腫及膿腫等。平底和圓底(U型和V型)培養(yǎng)板的區(qū)別和選擇不同形狀的培養(yǎng)板有不同用途。培養(yǎng)細(xì)胞,通常是選用平底的,這樣便于鏡下觀測(cè)、有明確的底面積、細(xì)胞培養(yǎng)液面高度相對(duì)一致。因此做MTT等實(shí)驗(yàn)時(shí),無(wú)論是貼壁和懸浮細(xì)胞,一般選用平底板。
Lysozyme (溶菌酶)又稱胞壁質(zhì)酶(muramidase)或N-胞壁質(zhì)聚糖水解酶(N-acetylmuramide glycanohydrlase),是一種能水解致病菌中黏多糖的堿性酶。主要通過(guò)細(xì)胞壁中的N-胞壁酸和N-葡糖之間的β-1,4糖苷鍵,使細(xì)胞壁不溶性黏多糖分解成可溶性糖肽,細(xì)胞壁破裂內(nèi)容物逸出而使溶解。溶菌酶還可與帶負(fù)電荷的蛋白直接結(jié)合,與DNA、RNA、脫輔基蛋白形成復(fù)鹽,使失活。因此,該酶具有、、抗等作用。
但在PCR擴(kuò)增中,模板變性后低溫退火,引物與探針同時(shí)與模板結(jié)合,在引物的介導(dǎo)下,沿模板向前延伸至探針結(jié)合處,發(fā)生鏈的置換,Taq DNA聚合酶的5′→3′外切酶活性將探針5′端連接的熒光發(fā)射基團(tuán)從探針上切割下來(lái),游離于反應(yīng)體系中,從而脫離3端熒光淬滅基團(tuán)的屏蔽,接受光刺激發(fā)出熒光信號(hào)。圓底培養(yǎng)板還會(huì)用于同位素?fù)饺氲膶?shí)驗(yàn),需要用細(xì)胞收集儀收集細(xì)胞的培養(yǎng),如混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)等。V型板常用做細(xì)胞殺傷、免疫學(xué)血凝集實(shí)驗(yàn)。細(xì)胞殺傷這種實(shí)驗(yàn)也可用U型板替代(加入細(xì)胞后,低速離心)。Terasaki板和普通細(xì)胞培養(yǎng)板的區(qū)別Terasaki plate主要是用于晶體學(xué)研究,產(chǎn)品設(shè)計(jì)便于對(duì)晶體的觀察與結(jié)構(gòu)分析。分子信標(biāo)是一種呈發(fā)夾結(jié)構(gòu)的莖環(huán)狀雙標(biāo)記寡核苷酸探針,環(huán)部與靶DNA序列互補(bǔ),為15~35 bp;莖部是由互相配對(duì)的堿基組成,但與靶DNA無(wú)序列同源性,約8 bp。在探針的5′端和3′端分別標(biāo)記熒光發(fā)射基團(tuán)和熒光淬滅基團(tuán)。當(dāng)溶液中的模板與分子信標(biāo)結(jié)合配對(duì)時(shí),分子信標(biāo)的構(gòu)象改變成鏈狀使得熒光發(fā)射基團(tuán)與淬滅基團(tuán)分開(kāi),當(dāng)熒光基團(tuán)被激發(fā)時(shí),就發(fā)出熒光信號(hào)。
1.人體工學(xué)設(shè)計(jì),輕盈光滑的柱塞動(dòng)作柔軟手感握柄均適用于左手和右手使用者。
2.移液器手柄有熱塑性彈性體涂層防止瓶身熱量轉(zhuǎn)移到移液管,確保在連續(xù)使用時(shí)的高精度。
3.軟觸式噴嘴,鎖定機(jī)制用于防意外的體積變化。
4.沒(méi)有任何特殊工具下的內(nèi)部清潔修理和校準(zhǔn)成為可能易于訪問(wèn)的校準(zhǔn)機(jī)制。
5.擱架安裝支架,便于存放和操作。
6.特殊的特氟隆密封結(jié)構(gòu)代替?zhèn)鹘y(tǒng)的型圈實(shí)現(xiàn)持久平穩(wěn)的操作。
7.大而清晰的4位數(shù)顯示為更多的音量選擇提供更小的增量電阻自由式點(diǎn)擊停止計(jì)數(shù)器移液時(shí)體積顯示始終可見(jiàn)。