全世界的用戶對二氧化碳培養(yǎng)箱都有兩條最基本的要求，一是要求二氧化碳培養(yǎng)箱能夠對溫度、二氧化碳濃度和濕度提供比較精確穩(wěn)定的控制，以便于其研究工作的進展；二是要求二氧化碳培養(yǎng)箱能夠對培養(yǎng)箱內的微生物污染進行有效的防范，并且能夠定期消除污染，以保護研究成果，防止樣品損失。所以，選購二氧化碳培養(yǎng)箱的老師最關心的當然就是其高可靠性、對污染的防范和控制及使用方便。
一、溫度控制
1. 加熱方式：
氣套式加熱和水套式加熱，兩種加熱系統(tǒng)都是精確和可靠的，同時它們都有著各自的優(yōu)點和缺點。
水套式加熱是通過一個獨立的水套層包圍內部的箱體來維持溫度恒定的，其優(yōu)點：水是一種很好的絕熱物質，當遇到斷電的時候，水套式系統(tǒng)就可以比較長時間的保持培養(yǎng)箱內的溫度準確性和穩(wěn)定性（維持溫度恒定的時間是氣套式系統(tǒng)的3～4倍），有利于實驗環(huán)境不太穩(wěn)定（如有用電限制，或者經常停電）并需要保持長時間穩(wěn)定的培養(yǎng)條件的用戶選用。
氣套式加熱是通過遍布箱體氣套層內的加熱器直接對內箱體進行加熱的，又叫六面直接加熱。氣套式與水套式相比，具有加熱快，溫度的恢復比水套式培養(yǎng)箱迅速的特點，特別有利于短期培養(yǎng)以及需要箱門頻繁開關的培養(yǎng)。此外，對于使用者來說氣套式設計比水套式更簡單化（水套式需要對水箱進行加水、清空和清洗，并要經常監(jiān)控水箱運作的情況）。
2. 溫控系統(tǒng)：
保持培養(yǎng)箱內恒定的溫度是維持細胞健康生長的重要因素，因此精確可靠的溫控系統(tǒng)是培養(yǎng)箱不可或缺的重要部分。為了使培養(yǎng)箱更加穩(wěn)定的工作，我們推薦用戶選用具備相互獨立三重溫度控制功能的二氧化碳培養(yǎng)箱，即箱內溫度控制、超溫報警控制和環(huán)境溫度監(jiān)控。
我們知道培養(yǎng)箱的最低工作溫度一般是高于室溫5℃，如果沒有緩慢加熱模式就非常容易在夏天高溫天氣（如室溫30℃左右時）產生箱內溫度過高；HF90的獨立超溫報警功能能夠快速準確的在培養(yǎng)箱內溫度高于培養(yǎng)溫度1℃時，切斷培養(yǎng)箱的主加熱系統(tǒng)，同時聲光報警；HF90的環(huán)境溫度監(jiān)控可以根據環(huán)境溫度的變化自 動調節(jié)培養(yǎng)箱外門輔助加熱系統(tǒng)的功率，達到精確控制箱體內溫度的目的。
3. 溫度均一性：
二氧化碳培養(yǎng)箱箱體內的溫度均一性也是用戶需要考慮的主要因素，一般在箱體內配備了風扇以及風道的培養(yǎng)箱的均一度要好很多，同時此裝置還有助于箱內溫度、CO2濃度和相對濕度的迅速恢復。
當然，風扇/風道的優(yōu)化也是同等重要的，HF90二氧化碳培養(yǎng)箱獨特設計的大直徑風扇和循環(huán)風道能夠保證箱體內溫度和二氧化碳濃度的均一性。大直徑風扇相比其他品牌培養(yǎng)箱的風扇，能夠在低轉速（低風速）時產生大的空氣循環(huán)流量，在達到均一性目的的同時，降低風速、減少箱內震動。降低風速、減少震動同時也就大大提高了箱內細胞培養(yǎng)的成功率。
二、二氧化碳濃度控制
1. 兩種控制系統(tǒng)：
紅外傳感器（IR）或熱導傳感器（TCD）進行測量。兩種傳感器都是準確的，但都各有優(yōu)缺點。熱導傳感器監(jiān)控CO2濃度的工作原理是基于對內腔空氣熱導率的連續(xù)測量，輸入CO2氣體的低熱導率會使腔內空氣的熱導率發(fā)生變化，這樣就會產生一個與CO2濃度直接成正比的電信號。紅外傳感器（IR）它是通過一個光學傳感器來檢測CO2水平的。IR系統(tǒng)包括一個紅外發(fā)射器和一個傳感器，當箱體內的CO2吸收了發(fā)射器發(fā)射的部分紅外線之后，傳感器就可以檢測出紅外線的減少量，而被吸收紅外線的量正好對應于箱體內CO2的水平，從而可以得出箱體內CO2的濃度。由于IR系統(tǒng)是通過紅外線減少來確定箱內CO2濃度，而箱體內顆粒物能夠反射或部分吸收紅外線，使得IR系統(tǒng)對箱體內顆粒物的多少比較敏感，因此IR傳感器應用在含HEPA高效空氣過濾器的培養(yǎng)箱內比較合適。
2. CO2測量系統(tǒng)自動校準功能：
無論哪種CO2測量系統(tǒng)在使用一段時間后都會產生漂移，而產生漂移后直接會導致箱體內二氧化碳濃度不能穩(wěn)定在我們的設定值，致使培養(yǎng)失敗，所以我們在這里強烈建議用戶在選購培養(yǎng)箱時必須要選擇帶有CO2測量系統(tǒng)自動校準功能的培養(yǎng)箱。
3. CO2濃度均一性：此點與溫度均一性的要求類似，在此就不做贅述。
三、相對濕度
箱內濕度對于培養(yǎng)工作來說是一項非常重要然而又經常被忽略的因素。維持足夠的濕度水平并且要有足夠快的濕度恢復速度（如在開關門后）才能保證不會由于過度干燥而導致培養(yǎng)失敗。目前大多數(shù)的二氧化碳培養(yǎng)箱是通過增濕盤的蒸發(fā)作用產生濕氣的（其產生的相對濕度水平可達95%左右，但開門后濕度恢復速度很慢）。我們在此建議用戶在選購二氧化碳培養(yǎng)箱的時候盡量選擇濕度蒸發(fā)面積大的培養(yǎng)箱，因為我們知道濕度蒸發(fā)面積越大，越容易達到最大相對飽和濕度并且開關門后的濕度恢復的時間越短。
四、防污染設計和消毒滅菌系統(tǒng)
污染是導致細胞培養(yǎng)失敗的一個主要因素，因而，二氧化碳培養(yǎng)箱的制造商們設計了多種不同的裝置去減少和防止污染的發(fā)生，其主要途徑都是盡量減少微生物可以生長的區(qū)域和表面，并結合自動排除污染裝置來有效防止污染的產生。例如，鑒于CO2培養(yǎng)箱在使用過程中有時會伴有霉菌生長，為確保培養(yǎng)箱免受污染并且保證儀器箱體內的生物清潔性，相繼問世了多種消毒滅菌方式，如帶有紫外消毒功能的CO2培養(yǎng)箱；還有的設計生產了HEPA過濾器能過濾培養(yǎng)箱內空氣，可過濾除去99.97%的0.3微米以上的顆粒；此外，還開發(fā)設計了能使箱內達到高溫濕熱的環(huán)境從而殺死污染微生物，達到消毒滅菌目的的培養(yǎng)箱。這些裝置對于細胞培養(yǎng)來說是必不可少，但選擇何種清潔裝置呢？首先，我們考慮的當然是各種方式的滅菌能力，紫外消毒能力是與紫外燈距離目標的距離的二次方成反比，距離越遠，消毒能力越差，所以紫外消毒方式有其局限性，難以達到徹底滅菌的要求；
HEPA過濾器由于受到過濾膜孔徑的影響，無法去除病毒和一些微小細菌，也有其局限性；相比較而言，高溫消毒是目前比較有效消毒滅菌的方法，高溫消毒又分為兩類，一是傳統(tǒng)的高溫干熱消毒，另一種是先進的高溫濕熱滅菌。
接下來我們重點說一下高溫干熱和高溫濕熱兩種方法的優(yōu)劣。高溫濕熱由于蒸汽潛熱大，穿透力強，容易使蛋白質變性或凝固，因此該法的滅菌效率比干熱滅菌法高。其原因有三：
?、俚鞍踪|凝固所需的溫度與其含水量有關，含水量愈大，發(fā)生凝固所需的溫度愈低。濕熱滅菌的菌體蛋白質吸收水分，所以較同一溫度的干熱空氣中易于凝固。
?、跐駸釡缇^程中蒸汽放出大量潛熱，加速提高濕度。因而濕熱滅菌比干熱所需溫度低，如在同一溫度下，則濕熱滅菌所需時間比干熱短。
?、蹪駸岬拇┩噶Ρ雀蔁岽?，使其深部也能達到滅菌溫度，故濕熱比干熱收效好一些。
所以高溫消毒并不是簡單的看消毒溫度，主要是看是否濕熱消毒。另外，從使用角度看，濕熱消毒一般控制在90℃就能達到很徹底的消毒效果，整個消毒過程中培養(yǎng) 箱內的所有附件都不用取出，可以全部進行消毒；而干熱消毒為了達到較好的效果，溫度一般都在100℃以上，在這種溫度下消毒培養(yǎng)箱內的傳感器、HEPA過 濾器等都要在消毒過程中取出，等消毒結束再裝上，這樣即麻煩，附件又不能同時消毒，而且增加二次污染的幾率，再者要達到100℃以上的高溫，培養(yǎng)箱的加熱 系統(tǒng)的電熱絲必然要加粗，這會導致培養(yǎng)箱的溫度控制難度增加，均一性變差。所以我們建議用戶在選購二氧化碳培養(yǎng)箱時選擇含高溫濕熱滅菌方式的培養(yǎng)箱。
五、其它因素
二氧化碳培養(yǎng)箱的容積也是一個不可忽略的因素，買小了不夠用，大了又浪費又占地方。二氧化碳培養(yǎng)箱的可選容積非常廣，而且每種類型又有不同的容積可選。此時，就需要您在選購前對所需培養(yǎng)箱容積的范圍有一個比較準確的了解，并在此基礎上多預留一點空間，以保證不時之需。
標簽: 二氧化碳培養(yǎng)箱 二氧化碳培養(yǎng)箱標簽： 二氧化碳培養(yǎng)箱的選擇方法_二氧化碳培養(yǎng)箱組合標題： 二氧化碳培養(yǎng)箱培養(yǎng)細胞的經驗之談二氧化碳培養(yǎng)箱是進行細胞培養(yǎng)的必要設備，那么在培養(yǎng)細胞時有哪些經驗是我們可以借鑒的呢？下面讓我們一起來看一下。
1、啟蒙老師的重要性
一般進實驗室都有師兄師姐帶著做，他們就是你做細胞的啟蒙老師。他們的操作手法、細節(jié)、理論講解就成了你操作的準則，如營養(yǎng)液、細胞瓶的擺放位置；滅菌處理程序；開蓋手法；細胞吹打手法等等。要學會他們的正確操作，在第一次的時候就要重視。
2、像養(yǎng)孩子一樣養(yǎng)細胞
細胞真的很脆弱，可以每天都去看看它，以防止出現(xiàn)培養(yǎng)箱缺水、缺二氧化碳、停電、溫度不夠等異?，F(xiàn)象，也好及時解決這些意外，避免重復實驗帶來的更大痛苦。
3、好細胞要及時保種
細胞要分批傳代，這樣即使有一批出了問題，還有一批備用的。像后者一般人可能不容易做到。有一次細胞污染了，全軍覆沒。當時可后悔沒有保種。
4、每種細胞都有自己的特性
細胞跟人一樣，不同的細胞，培養(yǎng)特性是不一樣的。培養(yǎng)過程中要細細體會。不同細胞株使用不同的培養(yǎng)基和血清。
如平滑肌細胞很活躍，喜歡熱鬧，2~3 天就好多人口，而且不太愛吃喝，真是可以養(yǎng)的孩子了。內皮細胞和平滑肌細胞性格相近，不過它很不講衛(wèi)生，也很邋遢，里面有很多分泌屋，要經常換洗才行。RAW264.7 細胞也很開朗，而且很能吃，要經常喂它，頭疼的是細胞很容易活化，培養(yǎng)它的瓶子和環(huán)境沒有內毒素才好。
5、培養(yǎng)前的工作準備充分
包括耗材的處理、試劑的配置，無菌檢驗等等。
玻璃器皿的清洗。對于玻璃器皿（細胞瓶、裝營養(yǎng)液的瓶子、小青霉素瓶等）要先用洗衣粉刷干凈（注意死角），然后沖干凈。用酸液浸泡 24 h 以上，之后用清水沖洗 10 遍，除去殘留酸液。瓶子之類，沖洗過程要使勁搖晃。然后在雙蒸水浸泡 24 h。晾干后包扎，160℃ 干烤 2 h 待用。
試劑配置。細胞培養(yǎng)用的液體一般使用雙蒸以上的水即可。并注意 pH 值的調節(jié)。
無菌檢驗。主要采用過濾除菌：如胰酶、抗生素、G-418 溶液、各類培養(yǎng)基、丙酮酸鈉、谷氨酰胺等。有些可以采用高壓滅菌：如 PBS、D-Hank's等。
6、試劑分裝保存
包括營養(yǎng)液、胰酶、血清等。
血清特別重要。血清必須貯存于 –20℃，如果一次無法用完一瓶，可將 40～50ml 分裝于無菌酸處理瓶中，甚至置青霉素瓶保存。一般廠商提供的血清為無菌，不需再無菌過濾。若發(fā)現(xiàn)血清有許多懸浮物，則可將血清加入培養(yǎng)基內一起過濾，勿直接過濾血清。（一般情況下不影響細胞培養(yǎng)）
瓶裝血清一定要逐步解凍: 4℃ 冰箱全溶后再分裝，在溶解過程中須規(guī)則搖晃均勻(小心勿造成氣泡)，使溫度與成分均一，減少沉淀的發(fā)生。勿直接由 –20℃ 直接至 37℃ 解凍，因溫度改變太大，容易造成蛋白質凝結而發(fā)生沉淀。
熱滅活是指 56℃，30 分鐘加熱已完全解凍之血清。水浴鍋升到 56℃后，將血清放入，待溫度升高到 56℃ 后計時，一般 5 分鐘左右規(guī)則搖晃均勻一次。此熱處理之目的是使血清中之補體成份去活化。除非必須，一般不要作此熱處理，因為會造成沉淀物之顯著增多，且會影響血清之品質。注意更換新血清（包括不同批次）對細胞的影響。
7、無菌意識要強
實驗進行前，超凈臺以紫外燈照射 30 分鐘滅菌，以 70 % ethanol 擦拭無菌操作抬面，并開啟超凈工作臺風扇運轉數(shù)分鐘后，才開始實驗操作。
每次操作只處理一株細胞株，以避免失誤混淆或細胞間污染。實驗完畢后，將實驗物品帶出工作臺，以 70 % ethanol 擦拭無菌操作抬面。
無菌操作工作區(qū)域應保持清潔及寬敞，必要物品，例如支架、吸管等公用物品可以暫時放置，其它個人實驗用品用完應立即拿出。實驗用品以 70% 乙醇擦拭后才帶入無菌操作臺內。實驗操作應在中央無菌區(qū)域，一般勿在邊緣區(qū)域操作。
小心取用無菌之實驗物品，避免造成污染。勿碰觸吸管尖頭部或是容器瓶口，亦不要在打開之容器正上方操作實驗。容器打開后，以手夾住瓶蓋并握住瓶身，傾斜約 45° 角取用，盡量勿將瓶蓋蓋口朝上放置桌面。
8、選擇正確的培養(yǎng)基
不同的細胞可能培養(yǎng)基不同，甚至不同的文獻可能對相同的細胞培養(yǎng)基成分也是可能不同的。如我當時培養(yǎng)神經干細胞，有文獻就選用 neurobase 培養(yǎng)基，而我的實驗目的主要是做抗氧化和氧化方面的，而這種培養(yǎng)基中含有抗氧化劑成分，此時，我就不得不選擇另外一種不含抗氧化劑的培養(yǎng)基。
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