液相色譜柱都是按照嚴格的標準生產(chǎn)和測試的，如能按照以下信息使用和維護色譜柱，不但能得到更佳的檢測結(jié)果，更能夠延長色譜柱的使用壽命。
色譜柱的安裝：
1、首先應(yīng)確認柱和儀器的接頭以及管路是否匹配。為減少死體積，進樣閥、柱子、檢測器之間的連接管路內(nèi)徑盡可能使用內(nèi)徑較小的管線，同時控制進樣器、色譜柱和檢測器之間連接管線的長度。安裝色譜柱之前，確認流路系統(tǒng)中的溶劑是否正常。對分析較復(fù)雜的樣品建議安裝保護柱。
2、為了使色譜柱與儀器系統(tǒng)達較好的連接效果，應(yīng)盡量使用與色譜柱接口相匹配的螺帽和錐形接頭，如原來的接頭長期匹配其他類型的色譜柱，建議在連接新色譜柱前應(yīng)檢查匹配情況，避免造成色譜柱的損壞或因色譜柱不匹配造成的漏液。
3、使用PEEK材料的通用接頭，只需用手擰緊不需要特定扳手，使用壓力為5000psi；使用溫度不得超過100℃。
流動相平衡：
1、在進行樣品檢測前，至少使用20倍柱體積流動相使色譜柱充分平衡。流動相一定要使用色譜級別的溶劑。如使用水相的緩沖液應(yīng)當(dāng)天配制以保持新鮮避免細菌產(chǎn)生。
2、流動相使用前需用微孔濾膜過濾,消除流動相中顆粒對色譜系統(tǒng)和色譜柱的損壞。緩沖液與其他流動相混合后應(yīng)重新過濾避免溶解度變化造成產(chǎn)生新的沉淀。不應(yīng)使用純水作為流動相沖洗C18色譜柱，以免柱性能損壞（添加5％的有機溶劑沖洗色譜柱，同時可以達到對緩沖鹽清洗的作用。還可以使色譜柱更容易平衡）。
3、流動相需脫氣后使用，可避免因氣泡導(dǎo)致的泵和檢測器的工作不正常。如果測試時使用的流動相與色譜柱保存使用的流動相有較大區(qū)別，應(yīng)該使用過度分布的形式進行平衡。避免由于流動相的突然變化造成柱壓增加過大或流動相緩沖鹽結(jié)晶造成對色譜柱和儀器系統(tǒng)的損壞。正相色譜柱比反相色譜柱需要更長的平衡時間。
樣品制備與操作：
1、樣品應(yīng)當(dāng)盡可能溶解在能與流動相相互溶的溶劑中。除特殊指明外，如使用強溶劑溶解樣品柱子的分辨率將可能降低。
2、樣品溶液在進樣前應(yīng)使用針頭式過濾器對樣品預(yù)先過濾。頻繁改變流動相組成，會加速降低柱效。
3、色譜柱由高壓勻漿法裝填，能承受較高壓力。為獲得較好分離效果，使用時請不要超過200kgf，而且避免壓力突然上升或變化，否則會造成硅膠填料的破壞，減少色譜柱的使用壽命。除特殊要求外較高操作溫度不要超過60℃。
保存色譜柱：
1、如果流動相含有酸或無機鹽，應(yīng)當(dāng)先用去離子水（20倍柱體積）沖洗干凈。然后用用100％乙腈或甲醇保存色譜柱。最后用柱子的接頭密封，并放在穩(wěn)定的環(huán)境中存放。
2、應(yīng)避免色譜柱受到直接的機械沖擊或摔落，避免造成色譜柱性能的降低。
色譜柱的再生：
1、用相當(dāng)于20倍柱體積的溶劑按下列順序沖洗柱子，建議按柱子的箭頭方向沖洗，盡可能不反沖：沖洗時使用的的參考溶劑順序是水、甲醇、氯仿、異丙醇、甲醇。
在日常分析工作中，色譜柱的正確使用和維護十分重要，色譜柱使用是否得當(dāng)，直接影響色譜柱的壽命，稍有不慎就會降低柱效、縮短使用壽命甚至損壞。
在色譜操作過程中，需要注意下列問題，以維護色譜柱。
1、柱子在裝卸、更換時，動作要輕，接頭擰緊要適度。必須防止較強的機械振動，以免柱床產(chǎn)生空隙。
2、如果儀器用來做常規(guī)分析，樣品種類不多，但分析次數(shù)比較多，則不妨為每一類常規(guī)分析配置一根專用柱，這樣有助于延長柱子的壽命。
3、避免壓力和溫度的急劇變化及任何機械震動。溫度的突然變化或者使色譜柱從高處掉下都會影響柱內(nèi)的填充狀況;柱壓的突然升高或降低也會對柱內(nèi)填料產(chǎn)生沖擊力，因此在調(diào)節(jié)流速時應(yīng)該緩慢進行，手動進樣時，進樣閥的轉(zhuǎn)動不能過緩。
4、應(yīng)逐漸改變?nèi)軇┑慕M成，特別是反相色譜中，不應(yīng)直接從有機溶劑改變?yōu)槿渴撬?，反之亦然?/p>
5、使用柱溫箱時，應(yīng)注意在流動相進入色譜柱后才能開啟柱溫箱升溫。
6、一般說來色譜柱不能反沖，只有生產(chǎn)者指明該柱可以反沖時，才可以反沖除去留在柱頭的雜質(zhì)。否則反沖會迅速降低柱效。
7、選擇使用適宜的流動相，以避免固定相被破壞。有時可以在進樣器前面連接一個預(yù)柱，分析柱是鍵合硅膠時，預(yù)柱為硅膠，可使流動相在進入分析柱之前預(yù)先被硅膠“飽和”，避免分析柱中的硅膠基質(zhì)被溶解。
8、避免將基質(zhì)復(fù)雜的樣品尤其是生物樣品直接注人柱內(nèi)，需要對樣品進行預(yù)處理或者在進樣器和色譜柱之間連接一個保護柱。保護柱一般是填有相似固定相的短柱。保護柱可以而且應(yīng)該經(jīng)常更換。
9、經(jīng)常用強溶劑沖洗色譜柱，清除保留在柱內(nèi)的雜質(zhì)。在進行清洗時，對流路系統(tǒng)中流動相的置換應(yīng)以相混溶的溶劑逐漸過渡，每種流動相的體積應(yīng)是柱體積的20倍左右。
10、保存色譜柱時應(yīng)將柱內(nèi)充滿色譜級的乙腈或甲醇，柱接頭要擰緊，防止溶劑揮發(fā)干燥。絕對禁止將緩沖溶液留在柱內(nèi)靜置一個晚上或更長時間。
11、色譜柱使用過程中，如果壓力升高，一種可能是燒結(jié)濾片被堵塞，這時應(yīng)更換濾片或?qū)⑵淙〕鲞M行清洗；另一種可能是大分子進人柱內(nèi)，使柱頭被污染；如果柱效降低或色譜峰變形，則可能柱頭出現(xiàn)塌陷，死體積增大。
12、在完成分離分析工作之后，不應(yīng)立即停機，需及時對色譜分析系統(tǒng)進行沖洗，一般30分鐘以上，以除去色譜柱內(nèi)的雜質(zhì)。
在液相色譜分離系統(tǒng)中，色譜填料選擇的正確與否會直接影響到專業(yè)的液相色譜柱分離物質(zhì)效果的好壞。由于液相色譜填料具有相當(dāng)寬的選擇范圍，所以我們在購買液相色譜柱之前有必要對不同液相色譜填料進行一個簡單的認識和了解。
第一、正相色譜硅膠基質(zhì)填料。
正相色譜柱的固定相是由硅膠和其他具有極性官能團組成的鍵合相填料。其物質(zhì)分離特點是極性較弱組合最先被色譜柱沖洗出來。而且正相色譜所使用的流動相其極性要低于固定相，流動相通常使用正乙烷和二氯甲烷等。
第二、反相色譜硅膠基質(zhì)填料。
反向色譜柱的填料是以硅膠材料為主要物質(zhì)，并與極性相對較弱的官能團組成的鍵合相。其物質(zhì)分離特點是極性較強組合最先被色譜柱沖洗出來，而極性弱的組分則會更強的保留在柱子上。反向色譜的流動相的極性相對較強，常配制有機緩沖液作為流動相。目前較為常用的反相色譜填料有C4（B）、C8（MOS）以及C18（ODS）等。
第三、聚合物填料。
這種聚合物的填料一般是由聚甲基丙酸酯或者聚苯乙烯-二乙烯基苯組成。其特點是這種色譜柱的酸堿度適用范圍相對較廣，且疏水性很強，但它的柱效相對于硅膠基質(zhì)的填料要低一些。一般將這種大孔的基質(zhì)填料用于蛋白質(zhì)的分離。
第四、其他無機填料。
如石墨化碳對于酸堿度和溫度沒用嚴格的限制范圍，一般可對一些幾何導(dǎo)構(gòu)體進行分離。此外還有氧化鋁以及氧化鋯等無機填料的應(yīng)用。
總而言之，如果我們能夠全面系統(tǒng)的了解一下液相色譜柱填料的分類及特點，那么我們在選擇購買一流的色譜柱時就可以在一個相對較小的范圍內(nèi)順利找到自己所需要的產(chǎn)品。這樣我們就可以在節(jié)省選擇購買時間的同時，也能快速買到令自己滿意的色譜柱。
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