依據(jù)Beer定律，物質(zhì)在一定波優(yōu)點(diǎn)的吸光度與濃度成正比，這是定量計(jì)算的根據(jù)。但是很多溶劑自身在紫外區(qū)有吸收峰或末端吸收，選用溶劑時(shí)應(yīng)思索溶劑自身吸收的干擾。選擇溶劑時(shí)，被測組分的丈量波長必需大于溶劑的截止波長。

常用的定量剖析辦法有規(guī)范曲線法、規(guī)范對照法、吸光系數(shù)法及差示分光法等，以下引見前三種辦法。

1）規(guī)范曲線法

規(guī)范曲線法又稱工作曲線法或校正曲線法。規(guī)范曲線法較簡單，在儀器剖析中應(yīng)用普遍，對儀器的精度請求不高，合適剖析大批量的同類試樣，但不合適剖析組成復(fù)雜的樣品。關(guān)于同一臺(tái)儀器，在肯定的工作狀態(tài)和測定條件下，吸光度A與溶液濃度c之間呈線性關(guān)系。      

①測定辦法

首先配制一系列不同濃度的對照品溶液(或稱規(guī)范溶液)，在相同條件下分別測定吸光度。以濃度為橫坐標(biāo)，相應(yīng)的吸光度為縱坐標(biāo)，繪制規(guī)范曲線(如上圖)，或依據(jù)二者的數(shù)值樹立回歸方程得A=bc+a。在相同的條件下測定試液的吸光度，從規(guī)范曲線或回歸方程中求出被測組分的濃度。

②采用規(guī)范曲線法應(yīng)留意的問題

(1)制備一條規(guī)范曲線至少需求5~7個(gè)點(diǎn)，并不得隨意延長

(2)待測溶液濃度應(yīng)在規(guī)范曲線線性范圍內(nèi)。

(3)待測溶液和對照品溶液必需在相同條件下停止測定。

依據(jù)Beer定律，理想的規(guī)范曲線應(yīng)該是一條經(jīng)過原點(diǎn)的直線。實(shí)踐上，常有規(guī)范曲線不

經(jīng)過原點(diǎn)的現(xiàn)象。其緣由主要有幾方面，如空白溶液的選擇不當(dāng)，顯色反響的靈活度不夠，吸收池的光學(xué)性能不分歧等，應(yīng)采取恰當(dāng)措施加以改善。

2）規(guī)范對照法

假如繪制的規(guī)范曲線是經(jīng)過原點(diǎn)的，測定試樣時(shí)也可采用一種簡化的辦法，即規(guī)范對照法。

在相同條件下配制規(guī)范溶液（s）和樣品溶液（x），在選定波優(yōu)點(diǎn)，分別測其吸光度，依據(jù)Beer定律A=Ecl,因規(guī)范溶液和樣品溶液是同種物質(zhì)、同臺(tái)儀器及同一波善于厚度相同的吸收池中測定，故l和E均相等，因而Cx=Ax Cs/As。

應(yīng)用規(guī)范對照法的前提是繪制規(guī)范曲線需過原點(diǎn)，且普通請求規(guī)范溶液與樣品溶液的濃度盡量接近，否則會(huì)惹起較大的誤差。

3）吸收系數(shù)法

依據(jù)Beer定律，若已知厚度l和吸光系數(shù)或百分吸收系數(shù)，即可依據(jù)供試品溶液測得的A值求出被測組分的濃度。C=A/El

許多化合物的吸收系數(shù)或百分吸收系數(shù)能夠從有關(guān)手冊或文獻(xiàn)中查到。也能夠?qū)⒐┰嚻啡芤旱奈舛葥Q算成樣品的百分吸收系數(shù)或摩爾吸收系數(shù)，然后與純品的吸收系數(shù)相比計(jì)算出樣品中被測組分含量。

假如查不到被測物質(zhì)的吸收系數(shù)，或測定條件與手冊、文獻(xiàn)中不盡相同，則不能采用吸收系數(shù)法停止測定。

二、三種辦法的比擬

1）規(guī)范曲線法請求：

①A與c是一條直線或近似一條直線關(guān)系

②丈量過程中，請求儀器的工作狀態(tài)及丈量條件堅(jiān)持分歧。

③樣品濃度cx應(yīng)落在線性范圍內(nèi)

④規(guī)范溶液與試樣組成類似

2）規(guī)范對照法請求：

①A與c是一條過原點(diǎn)或近似過原點(diǎn)的直線關(guān)系:A=a+bc 請求a=0

②丈量過程中，請求儀器的工作狀態(tài)及丈量條件堅(jiān)持分歧。

③樣品濃度cx應(yīng)落在線性范圍內(nèi),c樣與c標(biāo)盡量接近

④規(guī)范溶液與試樣組成類似。

3）吸光系數(shù)法請求：

①A與C是一條過原點(diǎn)或近似過原點(diǎn)的直線關(guān)系

②要丈量或能查到百分吸收系數(shù)或吸收系數(shù)

③請求單色光，對儀器請求高