做液相色譜的同學(xué)基本都會碰到分叉峰,很多時候,這都意味著硬件或者方法某些地方可能出現(xiàn)問題。今天我們就一起看看導(dǎo)致峰分叉的原因,以及如何解決這個問題。
首先,我們需要判斷這到底是一個峰,還是兩個峰?
A圖主峰前面有一個肩峰
這到底是峰形不好,還是另外一個化合物沒分開呢?
判斷方法:降低該成分在樣品中的濃度
B圖是降低該成分濃度后進樣后得到的色譜圖,如果這是一個峰那肩峰也應(yīng)該響應(yīng)變小,但是這個例子里,肩峰沒有變小這應(yīng)該是另外一個化合物。這時候,我們就要考慮如何改變方法,將這兩個東西分開。
如果所有峰的峰形都不好
一般來說,一個樣品都會出多個峰,絕大多數(shù)時候在每個峰上面都出現(xiàn)肩峰比如像下面這樣:
這種情況一般都是管路連接、液相色譜柱頭塌陷或者柱頭的篩板被堵導(dǎo)致的。
如何解決液相色譜柱頭篩板被堵的問題呢?
01反沖
柱出口放空,沖20-30ml流動相。雖然液相色譜柱上都有表明使用方向,但是對于硅膠基質(zhì)的色譜柱基本都可以反沖。
將柱頭污染物如泵密封圈的碎屑,樣品中的污染等沖走,就能解決問題。
02更換或清洗篩板
現(xiàn)在估計做這個事情的人不多,但是如果有廢的液相色譜柱,想練練也未嘗不可。將篩板取下來,用超聲波清洗器清洗,晾干后安裝;如果清洗后依然沒有效果則需要更換新的篩板。
當(dāng)然,還是要提倡大家注意樣品上機之前的前處理和及時更換磨損的泵密封圈。有條件的還是用保護柱,大不了就換保護柱,也比換色譜柱成本更低。
貯液裝置、高壓輸液泵、過濾器、脫氣裝置等
1. 貯液器:貯液器用于存放溶劑。溶劑必須很純,貯液器材料要耐腐蝕,對溶劑呈惰性。貯液器應(yīng)配有溶劑過濾器,以防止活動相中的顆粒進進泵內(nèi)。溶劑過濾器一般用耐腐蝕的鎳合金制成,空隙大小一般為2mm。
2. 脫氣裝置:脫氣的目的是為了防止活動相從高壓柱內(nèi)流出時,開釋出氣泡進進檢測器而使噪聲劇增,甚至不能正常檢測。
3. 高壓輸液泵 高壓輸液泵是高效液相色譜儀的重要部件,是驅(qū)動溶劑和樣品通過色譜柱和檢測系統(tǒng)的高壓源,其性能好壞直接影響分析結(jié)果的可靠性。
對高壓泵的基本要求是:
①流量穩(wěn)定;②輸出壓力高,最高輸出壓力為50Mpa;③流量范圍寬,可在0.01~10ml/min范圍任選。④耐酸、堿、緩沖液腐蝕。⑤壓力波動小。
2. 梯度洗脫裝置 梯度洗脫是利用兩種或兩種以上的溶劑,按照一定時間程序連續(xù)或階段地改變配比濃度,以達到改變活動相極性、離子強度或pH值,從而進步洗脫能力,改善分離的一種有效方法。當(dāng)一個樣品混合物的容量因子是范圍很寬,用等度洗脫時間太長,且后出的峰形扁平不便檢測時,用梯度洗脫可以改善峰形、并縮短分離時間。HPLC的梯度洗脫與GC的程序升溫相似,可以縮短分析時間,進步分離效果。使所有的峰都處于較佳分離狀態(tài),而且峰形尖而窄。
二. 進樣器
進樣器一般要求密封性好,死體積小,重復(fù)性好,保證中心進樣,進樣時對色譜系統(tǒng)的壓力和流量波動小,并便于實現(xiàn)自動化。
高壓進樣閥是目前廣泛采用的一種方式。閥的種類很多,有六通閥、四通閥,雙路閥等。以六通進樣閥較為常用。
三.分離系統(tǒng)
色譜分離系統(tǒng)包括色譜柱、固定相和活動相。色譜柱是其核心部分,柱應(yīng)具備耐高壓、耐腐蝕、抗氧化、密封不漏液和柱內(nèi)死體積小、柱效高、柱容量大、分析速度快、柱壽命長的要求。通常采用優(yōu)質(zhì)不銹鋼管制成。
色譜柱按內(nèi)徑不同可分為常規(guī)柱、快速柱和微量柱三類。
常規(guī)分析柱柱長一般為10~25cm,內(nèi)徑4 ~ 5mm,固定相顆粒直徑為 5 ~ 10 mm。為了保護分析柱不受污染,一般在分析柱前加一短柱,約數(shù)厘米長,稱為保護柱。
(微量分析柱內(nèi)徑小于l mm,凝膠色譜往內(nèi)徑3~12 mm,制備往內(nèi)徑較大,可達25 mm以上。)
四. 檢測系統(tǒng)
檢測器的作用是將柱流出物中樣品組成和含量的變化轉(zhuǎn)化為可供檢測的信號,常用檢測器有紫外吸收、熒光、示差折光、化學(xué)發(fā)光等。
液相色譜儀如何選購
杭州森尼歐科學(xué)儀器有限公司專業(yè)提供二手液相色譜儀。不管是新儀器還是二手液相色譜儀,如何選擇液相色譜儀,都有一定的方法,此篇文章希望能幫助您更好地了解和使用液相色譜儀
一.主要技術(shù)指標(biāo)優(yōu)異:
首先是如何看指標(biāo)。液相色譜儀的指標(biāo)很多,有泵的、檢測器的、色譜柱等等。我們認為要看主要技術(shù)指標(biāo),根據(jù)國家標(biāo)準(zhǔn),儀器的主要指標(biāo)有噪音,漂移,zui小檢測濃度,定性定量重復(fù)性等。這些指標(biāo)都要放在系統(tǒng),回路里去看,去比較。就是需要把各單元裝置都要聯(lián)接好,如接好色譜柱,進樣閥,并且要通上流動相。因為您在分析中也都是聯(lián)接好以后才可以進行分析的,而不是單單用個檢測器或是泵的。
然后在這個基礎(chǔ)上,我們再去比較這些主要指標(biāo)。
1.噪音
是指由儀器的電器元件、溫度波動、電壓的線性脈沖以及其他非溶質(zhì)作用產(chǎn)生的高頻噪聲和基線的無規(guī)則波動。噪音的大小直接關(guān)系到儀器的檢測靈敏度,噪音越大,檢測的靈敏度就越低。對于檢測低含量的樣品就要求儀器的噪音越小越好,否則噪音過大將會導(dǎo)致基線不穩(wěn),甚至影響分析結(jié)果。
2.zui小檢測濃度(zui小檢測限)
是反映儀器靈敏度的重要參數(shù)。CL=2×Nd×C/H(CL :zui小檢測濃度 Nd:噪音C:樣品濃度zui小檢測濃度H:樣品峰高)由上式可見,zui小檢測濃度是和噪音成正比的,噪音越大,zui小檢測濃度就越大,靈敏度就越低。某些廠家回避了這個指標(biāo),說明他們不愿在zui小檢測濃度的基礎(chǔ)上去比較噪音。
3.漂移
是指儀器穩(wěn)定后一段時間內(nèi)基線漂離原點的距離,通常用來衡量儀器穩(wěn)定快慢。高品質(zhì)的儀器能在較短的時間內(nèi)達到穩(wěn)定,從而在一定程度上提高了分析效率。
4.定性定量重復(fù)性
主要是考核儀器穩(wěn)定性的指標(biāo),這對于分析樣品來說是非常重要的。好的儀器其穩(wěn)定性應(yīng)該是十分的,這就要求多次進樣保留時間及含量的一致性,這樣做出來的結(jié)果才能使人信服。
二.系統(tǒng)的,整體開發(fā)
這里指的是儀器的整體開發(fā),是一個完整的系統(tǒng)。目前市場上有這個現(xiàn)象,說我的泵是進口的,或者是檢測器怎么好,用了什么很多的進口件組裝等等。其實這是個誤區(qū)。液相色譜是個復(fù)雜的系統(tǒng),不是整體開發(fā)的,各項指標(biāo)之間、軟件和硬件、硬件和硬件等都不匹配,整體水平不會高到哪里去,而且在售后服務(wù)方面對用戶也是不負責(zé)任的。
整體開發(fā)的主要優(yōu)點有:各項技術(shù)指標(biāo)統(tǒng)一、儀器各單元的通信協(xié)調(diào)、能夠建立一個整體的數(shù)字化評價系統(tǒng)、體現(xiàn)了企業(yè)的科技及開發(fā)實力。
國外知名的儀器生產(chǎn)廠家的產(chǎn)品也是整體開發(fā)的,所以能夠保證儀器的整體水平。
三.操作方便:
操作方便性無論是對新手還是成熟的用戶都是很重要的。操作越簡單,有利于提高分析效率,也為以后分析方法的拓展提供有力的幫助。
四.穩(wěn)定可靠,故障率低.
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