日立液相色譜只要求樣品能制成溶液，不受樣品揮發(fā)性的限制，流動相可選擇的范圍寬，固定相的種類繁多，因而可以分離熱不穩(wěn)定和非揮發(fā)性的、離解的和非離解的以及各種分子量范圍的物質(zhì)。
日立液相色譜成為解決生化分析問題有前途的方法。由于液相色譜儀具有高分辨率、高靈敏度、速度快、色譜柱可反復利用，流出組分易收集等優(yōu)點，因而被廣泛應用到生物化學、食品分析、醫(yī)藥研究、環(huán)境分析、無機分析等各種領域。日立液相色譜與結構儀器的聯(lián)用是一個重要的發(fā)展方向。
日立液相色譜常用的脫氣方法有以下幾種：
1、吹氦脫氣法使用在液體中比空氣溶解度低的氦氣，在0、1Mpa壓力下，以約60ml/min流速通入流動相10-15min以驅除溶解的氣體。此法使用于所有的溶劑，脫氣效果較好，但在國內(nèi)因氦氣價格較貴，本法使用較少；
2、加熱回流法此法的脫氣效果較好；
3、抽真空脫氣法此時可使用微型真空泵，降壓至0、05-0、07MPa即可除區(qū)溶解的氣體。顯然使用水泵連接抽濾瓶和G4微孔玻璃漏斗可一起完成過濾機械雜質(zhì)和脫氣的雙重任務。由于抽真空會引起混合溶劑組成的變化，故此法適用于單一溶劑體系脫氣。對多元溶劑體系應預先脫氣后再進行混合，以保證混合后的比例不變。
4、超聲波脫氣法它是目前實驗室使用廣泛的脫氣方法，將配制好的流動相連同容器一起放入超聲波水漕中脫氣10-20min即可。該方法操作簡便，基本能滿足日常分析的要求。
5、在線真空脫氣法把真空脫氣裝置串聯(lián)到儲液系統(tǒng)中，并結合膜過濾器，實現(xiàn)了流動相在進入輸液泵前的連續(xù)真空脫氣。此法的脫氣效果明顯優(yōu)于上述幾種方法，并適用于多元溶劑體系。
在日立液相色譜系統(tǒng)開始工作前，可以用注射器連接恒流泵的排空閥，抽入流動相，將流路中的空氣驅趕干凈。在注入樣品前注意排出樣品注射器中的空氣。
任何顆粒物進進液相色譜儀后都會在柱子進口端被篩板擋住，zui后的結果是將柱子堵塞，表現(xiàn)出的特征是系統(tǒng)壓力增加并使色譜峰變形。因此，要采取各種預防 措施，包括操縱步驟和商品儀器自身的各種過濾設計，努力防止或減少顆粒物進進液相色譜儀中，從而延長儀器和色譜柱的使用壽命，并進步數(shù)據(jù)的可靠性。
在液相色譜儀中，顆粒物的主要來源有三個途徑：活動相、被測樣品和儀器系統(tǒng)部件的磨損物。
1、被測樣品
使用針筒式過濾器不可能100%得到通過過濾器的被測樣品，總會或多或少的丟失。丟失來自這樣幾方面：過濾器濾膜的吸附、過濾器濾出的顆粒物上的吸附、針筒式濾膜過濾器與針筒連接處的滲漏等。
2、活動相
無論是液相色譜儀HPLC級的水還是在實驗室使用超純水凈化系統(tǒng)制備的水，zui后一步也是通過0.2μm微孔濾 膜。任何一種緩沖液中加進了固體物，必然活動相過濾將。少量雜質(zhì)顆粒存在于活動相中必然成為殘渣。
解決辦法：2. 1.活動相制備僅采用HPLC級液體時不需要過濾，反之所有活動相組成在使用前必須過濾。
2.2在連接儲液瓶和泵的輸液管的末端進口采用下沉式過濾器（常見材質(zhì)有熔融玻璃砂芯濾板和微孔金屬的兩種）也是很重要的。這個過濾器的規(guī)格為≥10μm的微孔物質(zhì)，所以它不能取代活動相過濾步驟，但是它能除往系統(tǒng)中的塵土并保證儲液瓶、輸液管使用的可靠性。
2.3.推薦在HPLC系統(tǒng)中采用一個0.45 或0.5μm的在線多孔過濾器，接在自動進樣器和柱子之間，即使已使用了保護柱。這個在線過濾器將成為擋板代替柱頭的濾板，而且如采用一個玻璃砂芯濾板， 既便宜，更換又方便（幾分鐘就可更換）。若采用在線過濾，液相色譜儀檢測每批樣品開始前記錄下壓力值，當壓力上升一定值，例如25%或增加 500psi，應該更換玻璃砂芯濾板了，更換以后沖洗幾分鐘系統(tǒng)將恢復到原來的壓力值。
3、儀器系統(tǒng)部件的磨損物
zui后，在液相色譜儀HPLC系統(tǒng)中顆粒物的另一個主要來源是輸液泵密封墊和進樣閥旋轉軸的磨損。關于輸液泵密封墊的磨損更換有兩種不同建議。
3.1、在一般實驗室中輸液泵密封墊通常使用壽命為六個月到一年，因此建議半年或一年更換這些密封墊?！ ?/span>
3.2、原裝密封墊的密封效果，更換以后輕易引起活動相滲漏。所以，只要不漏液就不要輕易更換密封墊。
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