說到混合型液相色譜柱,它是一種能夠發(fā)生多種相互作用模式的色譜柱,作為色譜分離的核心,在目前的液相色譜分析中發(fā)揮著重要的作用?;旌夏J降纳V柱也是種類繁多,有雙重混合模式的,也有三重混合模式的。雙重混合模式包括:反相+陽(yáng)離子交換,反相+陰離子交換,反相+HILIC等。三重混合模式包括:反相+陽(yáng)離子交換+陰離子交換,HILIC+陽(yáng)離子交換+陰離子交換等。
混合模式色譜柱由于其多種優(yōu)點(diǎn),實(shí)驗(yàn)人員在分離復(fù)雜樣品時(shí),越來越多的被使用到實(shí)驗(yàn)中,賽默飛擁有的三重混合模式Trinity系列色譜柱在單次運(yùn)行中可同時(shí)分離離子和疏水性分析物,消除了更換色譜柱,使用離子對(duì)或使用多種色譜填料的需要。
來來來
我們來隆重介紹一下Acclaim Trinity系列色譜柱。Acclaim Trinity系列均為三重混合模式的色譜柱。又分為P和Q兩個(gè)系列,均采用納米微球-硅膠雜化技術(shù),一個(gè)顆粒上集成了三種分離模式。P系列色譜柱可以同時(shí)分離陽(yáng)離子、陰離子和非極性化合物。Q系列先賣個(gè)關(guān)子~
圖1. 納米微球-硅膠雜化技術(shù)
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新型Nanopolymer Silica Hybrid(NSH)技術(shù)在對(duì)以下物質(zhì)分離時(shí)可以獲得無(wú)可比擬的色譜性能:
01 | 原料藥和反離子 |
02 | 藥物反離子的篩選 |
03 | 酸性和堿性原料藥及各自反離子的混合物 |
04 | 酸性、堿性和中性原料藥的混合物 |
圖2. Trinity P1柱和Trinity P2柱對(duì)比
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使用與維護(hù)
當(dāng)次使用新的色譜柱時(shí),在進(jìn)行任何進(jìn)樣之前,應(yīng)采用流動(dòng)相進(jìn)行徹底沖洗(例如,在推薦的流速,大約使用 20 柱體積)。
當(dāng)切換到新的流動(dòng)相時(shí), 確保新的流動(dòng)相與色譜柱中以前的流動(dòng)相相容,以避免由于沉淀造成色譜柱堵塞。在進(jìn)行任何進(jìn)樣(例如 20 個(gè)柱體積)之前,應(yīng)完全調(diào)節(jié)色譜柱。
使用色譜柱前,需要把系統(tǒng)里置換為含有鹽的水相和有機(jī)相。保證色譜柱一直在帶有緩沖鹽的體系下使用,是對(duì)色譜柱較好的維護(hù)。
色譜柱清洗
對(duì)于磷酸鹽緩沖液中使用的 3.0 mm 內(nèi)徑色譜柱:
1
在 0.3 mL/min 流速時(shí),使用 5 個(gè)柱體積的 20 mM 磷酸鈉(或鉀)緩沖液, pH 值 6 / 乙腈 v/v 50/50 清洗色譜柱。
2
在 0.3 mL/min 流速時(shí),使用 20 個(gè)柱體積的 100 mM 磷酸鈉(或鉀)緩沖液, pH 值 6 / 乙腈 v/v 90/10 清洗色譜柱(以強(qiáng)力清除滯留的離子物)。
3
在 0.3 mL/min 流速時(shí),使用 5 個(gè)柱體積的 10 mM 磷酸鈉(或鉀)緩沖液, pH 值 6 / 乙腈 v/v 50/50 清洗色譜柱。
4
在 0.3 mL/min 流速時(shí),使用 20 個(gè)柱體積的 10 mM 磷酸鈉(或鉀)緩沖液, pH 值 6.4 / 乙腈 v/v 20/80 清洗色譜柱(以強(qiáng)力清除滯留的疏水污染物)。
5
使用至少 20 個(gè)柱體積流動(dòng)相平衡色譜柱。
典型應(yīng)用
圖3. Trinity P1柱分析氯酸鹽和高氯酸鹽
圖4.Trinity P1同時(shí)分離藥物反離子
圖5.Trinity P2柱分析藥物相關(guān)陰離子和陽(yáng)離子
您在日常的實(shí)驗(yàn)過程中用的色譜柱有沒有壽命過短的問題?不但實(shí)驗(yàn)成本攀升,實(shí)驗(yàn)效果都沒法保證。我們今天就邀請(qǐng)?jiān)滦窨萍嫉墓こ處焷頌槟獯鹩嘘P(guān)色譜柱使用壽命的相關(guān)問題,助您的柱子“益壽延年”!
為什么檢測(cè)該項(xiàng)目使用不同品牌的色譜柱,壽命均在100針左右?
1)有可能的原因是樣品組分吸附在色譜柱的前段??赡苁怯捎跇悠吩诹鲃?dòng)相中的溶解度低而沉淀出來的,也有可能是強(qiáng)吸附,或是樣品本身與填料表面發(fā)生微弱的不可預(yù)知的化學(xué)反應(yīng)。樣品溶液本身的pH值在色譜柱的耐受臨界值附近,而且進(jìn)樣體積較大(內(nèi)徑4.6mm,上樣體積在50ul以上)對(duì)柱頭端的填料影響比較大,通常這樣的情況伴隨柱壓升高。
解決方法:選擇合適的樣品前處理技術(shù),去除掉強(qiáng)保留物質(zhì)。使用保護(hù)柱,盡量選擇與分析柱同種填料,同種鍵合方法的保護(hù)柱。如果使用不同品牌的填料、裝填工藝的保護(hù)柱,在分離能力和保護(hù)分析柱方面可能得不到好的效果。也不要使用更大粒徑的保護(hù)柱,更大粒徑或者裝填較差的保護(hù)柱會(huì)因?yàn)樗姆逭箤捵饔枚鴮?dǎo)致分離能力下降。
2)鍵合相脫落變性。色譜條件多方作用導(dǎo)致壽命短,這是目前的色譜技術(shù)不能解決的,一般情況下小基團(tuán)鍵合相更容易被水解而脫落。流動(dòng)相中鹽濃度越高,越容易引起水解。這種情況下,就只能重新開發(fā)色譜條件。
為什么該品牌的色譜柱一直很好,就這一支壽命異常短?
確定一下使用頻率、沖洗頻率、流動(dòng)相的更換頻率、流動(dòng)相的試劑品牌、純度等是否和之前一樣,如果有更換,那壽命有差異是正常現(xiàn)象。如果都與之前相當(dāng),那需要檢查這支色譜柱是否受過劇烈震蕩,比如:不小心摔過,或者運(yùn)輸過程中受過劇烈震蕩,建議與廠家的技術(shù)人員溝通。
為什么使用該品牌的支色譜柱用于方法建立時(shí)壽命長(zhǎng),方法建立后,開始進(jìn)行方法驗(yàn)證時(shí),卻覺得壽命短?
這種情況的發(fā)生,很大的原因是,前期建立方法時(shí),并不是連續(xù)做項(xiàng)目,而是不停地更換流動(dòng)相。這就意味著色譜柱的沖洗頻率比較高,而更換的流動(dòng)相的清潔度也是比較好的。建立方法的時(shí)候很難連續(xù)進(jìn)樣多次,有時(shí)候甚至一周才做一次項(xiàng)目,這樣就會(huì)產(chǎn)生支柱子使用時(shí)間更久的錯(cuò)覺。而方法建立后,做方法驗(yàn)證,流動(dòng)相固定下來,就會(huì)一次性配置較大體積的流動(dòng)相,這樣流動(dòng)相較易變質(zhì),有時(shí)肉眼不能直接分辨。而且會(huì)連續(xù)多次過夜進(jìn)樣,這樣對(duì)色譜柱的沖洗也不是很及時(shí)。這些都是可能導(dǎo)致色譜柱壽命變短的因素。