做液相色譜的同學(xué)基本都會(huì)碰到分叉峰，很多時(shí)候，這都意味著硬件或者方法某些地方可能出現(xiàn)問(wèn)題。今天我們就一起看看導(dǎo)致峰分叉的原因，以及如何解決這個(gè)問(wèn)題。
首先，我們需要判斷這到底是一個(gè)峰，還是兩個(gè)峰?
A圖主峰前面有一個(gè)肩峰
這到底是峰形不好，還是另外一個(gè)化合物沒分開呢?
判斷方法：降低該成分在樣品中的濃度
B圖是降低該成分濃度后進(jìn)樣后得到的色譜圖，如果這是一個(gè)峰那肩峰也應(yīng)該響應(yīng)變小，但是這個(gè)例子里，肩峰沒有變小這應(yīng)該是另外一個(gè)化合物。這時(shí)候，我們就要考慮如何改變方法，將這兩個(gè)東西分開。
如果所有峰的峰形都不好
一般來(lái)說(shuō)，一個(gè)樣品都會(huì)出多個(gè)峰，絕大多數(shù)時(shí)候在每個(gè)峰上面都出現(xiàn)肩峰比如像下面這樣:
這種情況一般都是管路連接、液相色譜柱頭塌陷或者柱頭的篩板被堵導(dǎo)致的。
如何解決液相色譜柱頭篩板被堵的問(wèn)題呢？
01反沖
柱出口放空，沖20-30ml流動(dòng)相。雖然液相色譜柱上都有表明使用方向，但是對(duì)于硅膠基質(zhì)的色譜柱基本都可以反沖。
將柱頭污染物如泵密封圈的碎屑，樣品中的污染等沖走，就能解決問(wèn)題。
02更換或清洗篩板
現(xiàn)在估計(jì)做這個(gè)事情的人不多，但是如果有廢的液相色譜柱，想練練也未嘗不可。將篩板取下來(lái)，用超聲波清洗器清洗，晾干后安裝；如果清洗后依然沒有效果則需要更換新的篩板。
當(dāng)然，還是要提倡大家注意樣品上機(jī)之前的前處理和及時(shí)更換磨損的泵密封圈。有條件的還是用保護(hù)柱，大不了就換保護(hù)柱，也比換色譜柱成本更低。
液相色譜儀根據(jù)固定相是液體或是固體，又分為液-液色譜及液-固色譜?，F(xiàn)代液相色譜儀由高壓輸液泵、進(jìn)樣系統(tǒng)、溫度控制系統(tǒng)、色譜柱、檢測(cè)器、信號(hào)記錄系統(tǒng)等部分組成。與經(jīng)典液相柱色譜裝置比較，具有高效、快速、靈敏等特點(diǎn)。
1、 泵。
泵是液相色譜儀的心臟。處于良好工作狀態(tài)的泵，基線平穩(wěn)，保留時(shí)間重現(xiàn)性好，梯度洗脫時(shí)壓力變化緩慢而且平穩(wěn)。
1)選擇優(yōu)質(zhì)的溶劑和試劑，在進(jìn)入儀器前用 0.45um 膜過(guò)濾，并進(jìn)行脫氣處理。
2)泵開始使用時(shí)，一定要用合適的流動(dòng)相徹底清洗干凈。
3)定期檢查并更換在線過(guò)濾片及有關(guān)的墊圈，經(jīng)常清洗進(jìn)液處的微孔濾頭。
4)改變流動(dòng)相時(shí)，應(yīng)注意沉淀的產(chǎn)生，以防止泵堵塞。
2、色譜柱。
色譜柱是化合物分離的關(guān)鍵。保養(yǎng)良好的色譜柱具有很高的塔板數(shù)，基線平穩(wěn)。
1)色譜柱比較嬌氣不能夠碰撞、彎曲或強(qiáng)烈震蕩;安裝時(shí)要保證閥件或管路的清潔。
2)流動(dòng)相在使用前必須進(jìn)行脫氣處理，盡量不使用或少使用高粘度的流動(dòng)相。
3)在滿足靈敏度的前提下，盡可能的使用小進(jìn)樣量。如果樣品比較臟，要進(jìn)行凈化或提純處理。
4)分析結(jié)束后要清洗掉進(jìn)樣閥中殘留的樣品，并用流動(dòng)相或適當(dāng)?shù)娜軇┣逑瓷V柱。
5)如長(zhǎng)期不用，用適當(dāng)?shù)挠袡C(jī)溶劑保存并封閉或定期補(bǔ)充合適的流動(dòng)相。
3 、檢測(cè)器
分析完成后，馬上關(guān)閉檢測(cè)器。
4 、進(jìn)樣器
分析結(jié)束后反復(fù)沖洗進(jìn)樣口，防止樣品的交叉污染或堵塞。
液相色譜儀由高壓液體泵、檢測(cè)器及液相色譜柱等三部分組成，其中液相色譜柱的正確安裝和使用，是液相色譜工作的關(guān)鍵；也是液相色譜工作者獲得正確可靠的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的必經(jīng)之路?！ ?i>液相色譜柱的安裝： 1、液相色譜柱的結(jié)構(gòu)： a、空柱由柱接頭、柱管及濾片組裝而成?！ ≈宇^采用低死體積結(jié)構(gòu)，柱接頭是兩端螺紋組件，一端是為7/16英寸外螺紋，另一端是3／16英寸的內(nèi)螺紋(國(guó)內(nèi)外已規(guī)范化)。7／16英寸外螺紋與1／4英寸柱管(Φ6.35mm)連接，中間放置壓壞用于密封。3／16英寸的內(nèi)螺紋與1／16英寸(Φ1.57mm)的連接管連接，中間也放置壓環(huán)用于柱接頭的密封。為了盡量減少柱外死體積，在安裝色譜柱時(shí)，用Φ1.57mm連接管通過(guò)空心螺釘壓環(huán)后要盡量插到底，然后再擰緊空心螺釘。壓環(huán)被空心螺釘擠壓變形后緊箍在連接管上(連接管通過(guò)壓環(huán)后露出的管長(zhǎng)度應(yīng)嚴(yán)格控制在2．5mm長(zhǎng)或其他固定尺寸)?！ ≡趦啥酥宇^內(nèi)，柱管兩端各放置一片不銹鋼濾片(或?yàn)V網(wǎng))，用于封堵柱填料不被流動(dòng)相沖出柱外而流失?？罩鹘M件均為316#不銹鋼材質(zhì)，能耐受一般的溶劑作用。但由于含氯化物的溶劑對(duì)其有一定的腐蝕性，故使用時(shí)要注意，柱及連接管內(nèi)不能長(zhǎng)時(shí)間存留此類溶劑，以避免腐蝕。 b、柱填料： 液相色譜柱的分離作用是在填料與流動(dòng)相之間進(jìn)行的，柱子的分類是依據(jù)填料類型而定?！ ≌嘀憾嘁怨枘z為柱填料。根據(jù)外型可分為無(wú)定型和球型兩種，其顆粒直徑在3—10 ?m的范圍內(nèi)。另一類正相填料是硅膠表面鍵合—CN，-NH2等官能團(tuán)即所謂的鍵合相硅膠?！ 》聪嘀褐饕且怨枘z為基質(zhì)，在其表面鍵合十八烷基官能團(tuán)(ODS)的非極性填料。也有無(wú)定型和球型之分?！ 〕Ｓ玫钠渌姆聪嗵盍线€有鍵合C8、C4、C2、苯基等，其顆粒粒徑在3—10 ?m之間。液相色譜柱的安裝
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