液相色譜對(duì)于多數(shù)人來說都是很好上手的儀器了，但是就算是用過幾年、經(jīng)驗(yàn)豐富的分析員都會(huì)習(xí)慣于一些錯(cuò)誤的操作（師傅教錯(cuò)了？），經(jīng)常導(dǎo)致一些儀器故障。方便快捷的分析過程固然重要，但是為了多做樣品而忽略了一些必不可少的步驟，往往得不償失，哪些操作不能做？哪些懶兒不能偷？那些小概率的故障師傅沒教怎么辦？液相使用過程中有哪四大關(guān)鍵因素要注意？本文一一告訴你哦！
流動(dòng)相不過濾。。。
因?yàn)閴m?；蚱渌魏坞s質(zhì)微粒都會(huì)磨損柱塞、密封環(huán)、缸體和單向閥，因此應(yīng)預(yù)先除去流動(dòng)相中的任何固體微粒。流動(dòng)相在玻璃容器內(nèi)蒸餾，而常用的方法是濾過，可采用Millipore濾膜（0.2μm或0.45μm）等濾器。泵的入口都應(yīng)連接砂濾棒（或片）。輸液泵的濾器應(yīng)經(jīng)常清洗或更換。
使用后沒有及時(shí)清洗泵
流動(dòng)相不應(yīng)含有任何腐蝕性物質(zhì)，含有緩沖液的流動(dòng)相不應(yīng)保留在泵內(nèi)，尤其是在停泵過夜或更長時(shí)間的情況下。如果將含緩沖液的流動(dòng)相留在泵內(nèi)，由于蒸發(fā)或泄漏，甚至只是由于溶液的靜置，就可能析出鹽的微細(xì)晶體，這些晶體將和上述固體微粒一樣損壞密封環(huán)和柱塞等。因此，必須泵入純水將泵充分清洗后，再換成適合于色譜柱保存和有利于泵維護(hù)的溶劑（對(duì)于反相鍵合硅膠固定相，可以是甲醇或甲醇-水）。
流動(dòng)相走空。。。
泵工作時(shí)要留心防止溶劑瓶內(nèi)的流動(dòng)相被用完，否則空泵運(yùn)轉(zhuǎn)也會(huì)磨損柱塞、缸體或密封環(huán)，zui終產(chǎn)生漏液。
沒有流動(dòng)相流出，又無壓力指示怎么辦？
可能是泵內(nèi)有大量氣體，這時(shí)可打開泄壓閥，使泵在較大流量（如5ml/min）下運(yùn)轉(zhuǎn)，將氣泡排盡，也可用一個(gè)50ml針筒在泵出口處幫助抽出氣體。另一個(gè)可能原因是密封環(huán)磨損，需更換。
壓力和流量不穩(wěn)了？
原因可能是氣泡，需要排除；或者是單向閥內(nèi)有異物，可卸下單向閥，浸入丙酮內(nèi)超聲清洗。有時(shí)可能是砂濾棒內(nèi)有氣泡，或被鹽的微細(xì)晶粒或滋生的微生物部分堵塞，這時(shí)，可卸下砂濾棒浸入流動(dòng)相內(nèi)超聲除氣泡，或?qū)⑸盀V棒浸入稀酸（如4mol/L硝酸）內(nèi)迅速除去微生物，或?qū)Ⅺ}溶解，再立即清洗。
壓力為啥過高或過低？
可能是是管路被堵塞，需要清除和清洗。壓力降低的原因則可能是管路有泄漏。檢查堵塞或泄漏時(shí)應(yīng)逐段進(jìn)行。
在進(jìn)行梯度洗脫時(shí)，由于多種溶劑混合，而且組成不斷變化，因此帶來一些特殊問題，必須充分重視：
PS：（在液相色譜中對(duì)組分復(fù)雜的樣品采用梯度洗脫的方法。在同一個(gè)分析周期中，按一定程序不斷改變流動(dòng)相的濃度配比，稱為梯度洗脫。從而可以使一個(gè)復(fù)雜樣品中的性質(zhì)差異較大的組分能按各自適宜的容量因子k達(dá)到良好的分離目的。
梯度洗脫的優(yōu)點(diǎn)：1.縮短分析周期；2.提高分離能力；3.峰型得到改善，很少拖尾；4.增加靈敏度。但有時(shí)引起基線漂移。）
梯度洗脫的流動(dòng)相選擇不當(dāng)。。。
要注意溶劑的互溶性，不相混溶的溶劑不能用作梯度洗脫的流動(dòng)相。有些溶劑在一定比例內(nèi)混溶，超出范圍后就不互溶，使用時(shí)更要引起注意。當(dāng)有機(jī)溶劑和緩沖液混合時(shí)，還可能析出鹽的晶體，尤其使用磷酸鹽時(shí)需特別小心。
忽略的空白梯度洗脫。。。
梯度洗脫所用的溶劑純度要求更高，以保證良好的重現(xiàn)性。進(jìn)行樣品分析前必須進(jìn)行空白梯度洗脫，以辨認(rèn)溶劑雜質(zhì)峰，因?yàn)槿跞軇┲械碾s質(zhì)富集在色譜柱頭后會(huì)被強(qiáng)溶劑洗脫下來。用于梯度洗脫的溶劑需徹底脫氣，以防止混合時(shí)產(chǎn)生氣泡。
忽略了溶劑混合所帶來的粘度變化。。。
混合溶劑的粘度常隨組成而變化，因而在梯度洗脫時(shí)常出現(xiàn)壓力的變化。例如甲醇和水粘度都較小，當(dāng)二者以相近比例混合時(shí)粘度增大很多，此時(shí)的柱壓大約是甲醇或水為流動(dòng)相時(shí)的兩倍。因此要注意防止梯度洗脫過程中壓力超過輸液泵或色譜柱能承受的zui大壓力。
關(guān)于六通閥的正確使用和維護(hù)：
①樣品溶液進(jìn)樣前必須用0.45μm濾膜過濾，以減少微粒對(duì)進(jìn)樣閥的磨損。
②轉(zhuǎn)動(dòng)閥芯時(shí)不能太慢，更不能停留在中間位置，否則流動(dòng)相受阻，使泵內(nèi)壓力劇增，甚至超過泵的zui大壓力；再轉(zhuǎn)到進(jìn)樣位時(shí)，過高的壓力將使柱頭損壞。
③為防止緩沖鹽和樣品殘留在進(jìn)樣閥中，每次分析結(jié)束后應(yīng)沖洗進(jìn)樣閥。通?？捎盟疀_洗，或先用能溶解樣品的溶劑沖洗，再用水沖洗。
關(guān)于色譜柱的使用和維護(hù):
色譜柱的正確使用和維護(hù)十分重要，稍有不慎就會(huì)降低柱效、縮短使用壽命甚至損壞。在色譜操作過程中，需要注意下列問題，以維護(hù)色譜柱。
調(diào)節(jié)流速太快。。。
避免壓力和溫度的急劇變化及任何機(jī)械震動(dòng)。溫度的突然變化或者使色譜柱從高處掉下都會(huì)影響柱內(nèi)的填充狀況；柱壓的突然升高或降低也會(huì)沖動(dòng)柱內(nèi)填料，因此在調(diào)節(jié)流速時(shí)應(yīng)該緩慢進(jìn)行，在閥進(jìn)樣時(shí)閥的轉(zhuǎn)動(dòng)不能過緩（如前所述）。
反沖色譜柱。。。
一般說來色譜柱不能反沖，只有生產(chǎn)者指明該柱可以反沖時(shí)，才可以反沖除去留在柱頭的雜質(zhì)。否則反沖會(huì)迅速降低柱效。
預(yù)柱和保護(hù)柱
選擇使用適宜的流動(dòng)相（尤其是pH），以避免固定相被破壞。有時(shí)可以在進(jìn)樣器前面連接一預(yù)柱，分析柱是鍵合硅膠時(shí)，預(yù)柱為硅膠，可使流動(dòng)相在進(jìn)入分析柱之前預(yù)先被硅膠“飽和”，避免分析柱中的硅膠基質(zhì)被溶解。
避免將基質(zhì)復(fù)雜的樣品尤其是生物樣品直接注入柱內(nèi)，需要對(duì)樣品進(jìn)行預(yù)處理或者在進(jìn)樣器和色譜柱之間連接一保護(hù)柱。保護(hù)柱一般是填有相似固定相的短柱。保護(hù)柱可以而且應(yīng)該經(jīng)常更換。
【來自前輩的經(jīng)驗(yàn)】小概率故障如何排除？
【1】泵壓跳動(dòng)，跳動(dòng)范圍10bar左右。。。。。。
解決方法：
1、原先小白頭有點(diǎn)臟，更換后尚未解決；
2、將主動(dòng)閥上的閥芯取出后，發(fā)現(xiàn)有類似氣泡存在，浸入甲醇-水溶液超聲5min，以試著去除氣泡，重新將其安裝后再觀察，仍未解決；
3、更換新的閥芯，將其安裝后，不再有跳動(dòng)，觀察一段時(shí)間后比較平穩(wěn)，成功解決。
【2】發(fā)生故障：
①plug homing over pressure。
② 灌注及設(shè)流速時(shí)均無壓力也不見液體流出。
③檢測(cè)器光閘不能復(fù)位④進(jìn)完大濃度樣品后，進(jìn)空白相應(yīng)位置也出峰。
可能原因：
①在線過濾器堵了。
②泵頭下單向閥堵了。
③有可能是檢測(cè)池臟了，也有可能是光路有點(diǎn)堵，再不行可能是燈壽命到了。
④小抹布臟了，需要換。
解決方法：
①在線過濾器卸下來，置燒杯，加純化水煮沸5-10分鐘后甲醇超一下一般就可以了，如果還堵的話就拿稀硝酸泡，還不行的話就換新的了，這本身是個(gè)消耗品。
②把泵頭下單向閥卸下來，兩個(gè)都有可能堵，剛卸下來時(shí)豎著在耳邊搖一搖是聽不到聲音的。簡單的拿洗耳球把單向閥吹吹就行了（注意方向），吹了沒反應(yīng)可以拿溶劑超聲，但不可水煮，一般超至在耳邊搖能聽見聲音就不影響實(shí)驗(yàn)。
③先用溶劑把檢測(cè)池沖沖，用啥試具體樣品而定；若沖了還不行，把檢測(cè)池卸下，看燈能量，若能量還可以（有個(gè)幾千），可能得清洗光路了。di一次清洗的話建議還是叫工程師來，因?yàn)榇謇淼牟考跈z測(cè)器的zui下方，有一個(gè)黑色片片，中間有一條縫，而且那一塊的螺絲都是八角的，卸起來很麻煩。
④把5個(gè)樣品盤都拿出來，可以看見里面有一個(gè)黑色突起（看不清用手電筒），平時(shí)進(jìn)樣針就是從那個(gè)地方吸樣的。手伸進(jìn)去就可以卸下來，里面有一個(gè)小白圈圈（用多了自然就黑了），換一個(gè)新的就行了，買儀器時(shí)一般配有10個(gè)。
液相色譜在使用過程中主要有四大關(guān)鍵因素需要注意：
1.液相色譜儀本身：
對(duì)于儀器本身一般不會(huì)有問題，特別是剛買回來的新儀器。對(duì)于儀器本身zui重要的就是儀器的校驗(yàn)，剛買回來的儀器一般都是由賣家先對(duì)儀器做系統(tǒng)的確認(rèn)工作（包括IQ、PQ、OQ），確認(rèn)順利通過后，再請(qǐng)國家或省級(jí)儀器檢定局的來校驗(yàn)，檢定合格后就可以放心使用了，除此之外，一些做得好的公司每半年會(huì)對(duì)儀器進(jìn)行一次的內(nèi)部校驗(yàn)，目的就是為了保證儀器的正?？蛇\(yùn)行狀態(tài)。
2.色譜條件：
色譜條件一般包括流動(dòng)相、色譜柱、檢測(cè)波長、流速及進(jìn)樣量。流動(dòng)相就涉及到配制流動(dòng)相所用到的水和試劑試液，水一般要求用超純水或其他水的電阻率不大于18.2兆歐級(jí)別，試劑試液要求用色譜級(jí)別的，原因?yàn)榉乐顾驮噭┰囈褐械碾s質(zhì)對(duì)色譜結(jié)果的干擾。色譜柱會(huì)因不同的品種而有不同的要求，但每根色譜柱都有它的清洗要求，這個(gè)在色譜柱說明書上都可以找到，一定要根據(jù)上面的要求進(jìn)行，否則會(huì)造成色譜柱效下降和色譜柱的使用壽命縮短，檢測(cè)波長也會(huì)因品種的不同有不同的要求，這里需要指出的是要注意觀察檢測(cè)器氘燈能量的變化，比如基線波動(dòng)大，活性成分的響應(yīng)值突然變小等，都有可能是氘燈的能量不足所引起的，氘燈一般建議使用800小時(shí)，但實(shí)際上使用時(shí)間不止，可根據(jù)實(shí)際情況更換。流速也因品種的不同而不同，一般為1.0ml/min，流速是不可隨意改動(dòng)的，特別是作為QC人員，但是作為研發(fā)人員，有時(shí)為了摸索條件或進(jìn)行方法耐用性驗(yàn)證，會(huì)對(duì)流速進(jìn)行改變以評(píng)價(jià)方法的適用性。對(duì)于進(jìn)樣量因不同的品種也有不同規(guī)定，進(jìn)樣量這塊現(xiàn)在都使用自動(dòng)進(jìn)樣，所以進(jìn)樣精密度都很好，不需強(qiáng)調(diào)什么。
3.操作人員：
首先，作為液相操作人員，一定要認(rèn)真學(xué)習(xí)夜想的說明書，掌握液相硬件和軟件的操作，掌握日常的維護(hù)保養(yǎng)，掌握zui基礎(chǔ)故障的排除和維修。一般液相的操作規(guī)程也是有操作人員起草的，所以只要嚴(yán)格按照操作要求進(jìn)行操作，一般不會(huì)出現(xiàn)問題，當(dāng)然啫喱需要特別指出的是對(duì)于液相的日常維護(hù)保養(yǎng)很重要，比如流動(dòng)相的過濾、脫氣、泵密封墊的清洗、系統(tǒng)管路的清洗、溶劑過濾頭的清洗等，倘若不堅(jiān)持，很容易導(dǎo)致色譜柱堵塞、系統(tǒng)壓力過高、色譜峰異常等不必要的故障，浪費(fèi)時(shí)間。其次，操作人員在配制液相分析用樣品溶液時(shí)，由同一個(gè)人單獨(dú)完成，以免不必要的偶然誤差。
4.液相安裝環(huán)境：
液相色譜儀應(yīng)盡量安裝于水平、遠(yuǎn)離振動(dòng)、電磁干擾的屋內(nèi)的臺(tái)面上，有條件的話盡量將液相數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)分隔開，一個(gè)是防止色譜基線噪音偏大，基線不穩(wěn)等，一個(gè)是為減少對(duì)人體的危害。
高效液相色譜儀的正確使用與維護(hù)！
中國微生物菌種查詢網(wǎng) 高效液相色譜儀(HPLC)是分析實(shí)驗(yàn)室常用的測(cè)試儀器之一，其應(yīng)用越來越廣泛。此種儀器在使用過程中，難免會(huì)出現(xiàn)各種各樣的問題，并將直接影響到所測(cè)數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性和儀器的正常工作。操作者如果能了解故障的成因，即可清楚預(yù)防和排除這些故障的方法，就可正確地使用儀器并最大限度地發(fā)揮儀器的性能。今天我們要從以下幾個(gè)方面和您分享下在使用高效液相色譜儀中需注意的幾個(gè)問題。
一、使用試管的問題
1、試管的潔凈問題。高效液相色譜分析法是一個(gè)很靈敏的分析方法，如果因使用不潔凈的試管，便會(huì)影響試驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。例如，在用甲醇作溶劑來溶解樣品時(shí)，所用的小試管是用橡膠塞來做蓋子的，因此，在每次進(jìn)樣時(shí)，都有一個(gè)保留時(shí)間固定的干擾峰存在，后經(jīng)證實(shí)，此干擾峰是由甲醇浸泡橡膠塞而溶下的組分所產(chǎn)生，換用玻璃試管后，干擾峰消除。
2、塑料試管的溶解問題。近年來，一次性塑料試管給試驗(yàn)人員帶來了極大的方便，但是，在使用過程中一定要注意有機(jī)溶劑對(duì)試管的溶解現(xiàn)象，在利用此種試管提取樣品時(shí)，有些有機(jī)溶劑(如lvfang等)對(duì)管壁有溶解現(xiàn)象，這些被溶解下來的物質(zhì)有時(shí)也能在檢測(cè)器上產(chǎn)生信號(hào)，從而干擾樣品的測(cè)定。這時(shí)，可用相同的實(shí)驗(yàn)條件先行試驗(yàn)一下，看看不含被抽提物時(shí)，提取液在檢測(cè)器上能否產(chǎn)生干擾信號(hào)，如確有干擾信號(hào)存在，就只能換用耐有機(jī)溶劑的玻璃試管了。
3、被測(cè)樣品在試管壁上的吸附問題。這個(gè)問題也應(yīng)引起注意，否則也會(huì)影響測(cè)試結(jié)果的準(zhǔn)確性，在治療藥物監(jiān)測(cè)(Therapeutic Drug Monitoring,TDM)中，有些被測(cè)藥物如阿米替林，丙咪嗪等易吸附在玻璃試管的管壁上，因此，操作中宜采用聚丙烯管，為防止提取中吸附現(xiàn)象的發(fā)生，可采用0.5%的已二胺已烷液做為提取劑，可有效地防止吸附。
二、操作進(jìn)樣閥的問題
目前，在分析型高效液相色譜儀中常用的進(jìn)樣閥是7725型進(jìn)樣閥，其內(nèi)部的六通閥結(jié)構(gòu)使進(jìn)樣操作非常方便，但是，如果使用不當(dāng)，也會(huì)帶來問題。例如，在高效液相色譜法的試驗(yàn)過程中，有時(shí)會(huì)有異常色譜峰的出現(xiàn)以及重現(xiàn)性不好的問題，這主要是由于操作方法不當(dāng)所引起，要想解決此類問題，需從以下幾個(gè)方面入手。
1、進(jìn)樣量的控制。用進(jìn)樣閥來進(jìn)樣時(shí)，閥內(nèi)的樣品環(huán)是定量的，(一般分析型進(jìn)樣閥的樣品環(huán)體積為20ul)，由于進(jìn)樣時(shí)，注射到進(jìn)樣閥內(nèi)的樣品溶液在樣品環(huán)的管路中有徑向的速度梯度(即管軸處比管壁處的液流速度快)。因此，要想使樣品環(huán)中充滿樣品溶液，從而使用進(jìn)樣閥來準(zhǔn)確地定量，則必須使進(jìn)樣量大于樣品環(huán)體積的2倍。如果用注射器來控制進(jìn)樣量，則最大只能注射樣品環(huán)體積1/2的量，這樣才能防止部分樣品由溢流管溢出從而導(dǎo)致定量分析的誤差。
2、進(jìn)樣閥的清潔問題。如果樣品環(huán)中有上次進(jìn)樣時(shí)樣品的殘留，必然會(huì)污染下次注射進(jìn)的樣品，為防止這種現(xiàn)象的發(fā)生，應(yīng)按下列步驟操作：
a.進(jìn)樣閥有2個(gè)位置，INJECT和LOAD。首先在LOAD位置時(shí)，以注射器將流動(dòng)相注入進(jìn)樣閥內(nèi)清洗幾次，每次用量大約40ul；
b.然后將進(jìn)樣閥板手扳至INJECT位置時(shí)，再以流動(dòng)相清洗幾次，每次用量還是40ul；c.最后，再將樣品注射到進(jìn)樣閥里。
按照上述的步驟操作，可以避免由進(jìn)樣閥引起的污染，從而使干擾峰消除并提高分析結(jié)果的準(zhǔn)確性。
3、進(jìn)樣閥溢流管的堵塞。有時(shí)，進(jìn)樣閥的溢流管會(huì)發(fā)生堵塞現(xiàn)象，向進(jìn)樣閥內(nèi)注射樣品時(shí)，注射針推不動(dòng)。此故障是由于溢流管的堵塞所致。堵塞的原因多半是由于溶解樣品的流動(dòng)相用的是鹽溶液，而其中的鹽在溢流管的排空端口處結(jié)晶所致。此時(shí)，可用小燒杯盛少量蒸餾水對(duì)溢流管口稍加浸泡，端口處鹽的結(jié)晶就能被溶解掉，故障排除。如能在每次進(jìn)樣完成之后，用蒸餾水反復(fù)沖洗至溢流管中的鹽分全部沖出，則可避免此故障的發(fā)生。
三、流動(dòng)相(MOBLLE PHASE)的問題
甲醇和乙腈在高效液相色譜分析法中常常被用來配制流動(dòng)相。高效液相色譜法中常用的試劑zuihao是高等級(jí)的專用試劑，如色譜純?cè)噭?。在要求不太?yán)格時(shí)，優(yōu)級(jí)純甚至分析純的試劑也能用。高效液相色譜分析法中常用的是紫外檢測(cè)器，因此，從降低基線噪音和提高分析靈敏度上來考慮，應(yīng)該使用紫外吸收小且雜質(zhì)含量少的色譜純?cè)噭?/span>
1、流動(dòng)相的過濾。配制好的流動(dòng)相在使用前一定要先用0.5um孔徑的微孔濾膜來過濾。這是因?yàn)槿芤褐泻泻芏嗳庋垭y以發(fā)現(xiàn)的微小顆粒，如果不把它們?yōu)V除掉，就會(huì)堵塞泵口、柱頭上的過濾器，這樣就堵塞了流動(dòng)相的正常通道，使色譜柱的阻力增加，柱壓升高，柱效下降。碰到這種情況時(shí)，要換用經(jīng)過濾的流動(dòng)相，并將堵塞的濾器拆下來浸泡在20%的硝酸水溶液中以超聲波清洗機(jī)清洗20分鐘，以除去濾片上的堵塞物。
2、流動(dòng)相的脫氣。流動(dòng)相在使用前必須脫氣，以盡可能的除去溶解在流動(dòng)相中的氣體，否則，這些氣體會(huì)使柱填料的性能降低，還能夠?qū)z測(cè)器的信號(hào)產(chǎn)生很大的干擾。脫氣有多種方法，如超聲脫氣、真空脫氣、氮?dú)饷摎獾取Ｕ婵彰摎夥ê偷獨(dú)饬髅摎夥ㄊ悄壳皕uichangyong的脫氣法。水和甲醇混合后會(huì)產(chǎn)生大量的氣泡，如果不脫氣就使用，氣泡就會(huì)進(jìn)入色譜柱和檢測(cè)器，并將影響分析工作的正常進(jìn)行。
四、色譜柱的使用和保養(yǎng)
色譜柱是高效液相色譜儀最主要的部件，被測(cè)物質(zhì)能否被很好的分離和測(cè)定，色譜柱的性能起著決定性的作用。因此，在日常工作中，應(yīng)特別注意色譜柱的正確使用和維修保養(yǎng)，以延長色譜柱的使用壽命。
1、使用預(yù)柱和保護(hù)柱。預(yù)柱(pre-column)安裝于泵和進(jìn)樣器之間，它給色譜柱中的流動(dòng)相提供了完全的平衡，并防止了對(duì)柱填料有破壞作用的組分或污染物進(jìn)入色譜柱。保護(hù)柱(guard column)可以阻擋能夠牢固地吸附于色譜柱上的組分進(jìn)入色譜柱，保護(hù)柱應(yīng)與色譜柱的填料相同。預(yù)柱和保護(hù)柱可以經(jīng)常更換，而不需要經(jīng)常更換色譜柱，這就延長了色譜柱的使用壽命。
2、防止氣體進(jìn)入色譜柱。有些色譜柱(如凝膠柱)是不允許氣泡進(jìn)入的，否則將會(huì)使柱效降低甚至形成微小的難以驅(qū)除的氣室。因此，為了防止氣泡進(jìn)入色譜柱，一定要使用經(jīng)過脫氣的流動(dòng)相，并且要嚴(yán)格按照下列步驟來安裝色譜柱。a.拆卸下色譜柱入口處的密封螺絲，觀察是否有溶劑滲出；b.如有溶劑滲出，即可將色譜柱接到管路上，以避免氣泡的進(jìn)入；c.如無溶劑滲出時(shí)，表明色譜柱的此端已經(jīng)進(jìn)去空氣了，此時(shí)，可將色譜柱的出口端接到進(jìn)樣閥上，以流動(dòng)相來反方向沖洗色譜柱，以便將柱內(nèi)的空氣排除。zuihao以0.2ml/min的小流量來沖色譜柱，如果溶劑的流速太快或者是壓力突然的上升都將會(huì)導(dǎo)致柱性能的降低；d.如果流出的溶劑里不含有氣泡，說明柱內(nèi)的氣體已經(jīng)被排出了，再將色譜柱以正確的方向接好，這樣氣泡就進(jìn)不到色譜柱里面了。
3、色譜柱的清洗。為了不使被測(cè)物質(zhì)和雜質(zhì)停留在色譜柱中，在每次的樣品分析工作完成之后，都應(yīng)及時(shí)地清洗色譜柱。首先要用對(duì)被測(cè)樣品洗脫能力強(qiáng)的溶劑來洗脫色譜柱，以分析工作中常用的反相色譜分析法為例，因其先流出的物質(zhì)是極性大的物質(zhì)，此時(shí)應(yīng)用100%的甲醇或使用異丙純、siqingfunan等極性稍弱的溶劑將吸附在柱內(nèi)的極性小的物質(zhì)洗脫下來，洗脫液的用量一般為柱體積的20倍即可。如果流動(dòng)相是緩沖溶液，則應(yīng)先用蒸餾水來沖洗色譜柱，以沖掉柱內(nèi)的鹽，然后再用合適的溶劑來沖洗。
凝膠濾過色譜法(Gel Filtration Chromatography)中所使用的凝膠柱常用緩沖溶液做流動(dòng)相，用完之后當(dāng)然要用蒸餾水來沖洗。如果是連續(xù)操作，可以將緩沖溶液置于柱內(nèi)過夜，但zuihao是維持小流速(＜0.5ml/min)以防止緩沖鹽的析出，如果流動(dòng)相中含有鹵化物，即使是停一夜，也必須要用蒸餾水將色譜柱沖洗干凈，以防止它們對(duì)柱體的腐蝕。
4、色譜柱的存放。如果色譜柱暫時(shí)不用，存放時(shí)要注意以下幾點(diǎn)：
a.幾天之內(nèi)的短期放置，應(yīng)先用溶劑沖洗好色譜柱(如凝膠柱則用蒸餾水來沖洗)，再把色譜柱的兩頭用密封螺絲密封好即可。
b.如果色譜柱長期不用，僅用上述方法來處理就不行了，這時(shí)應(yīng)使用色譜柱使用說明書中所指明的溶劑來充滿色譜柱，反相柱一般使用甲醇，正相柱則可用正已烷或庚烷，而凝膠柱則不能用水了，因柱內(nèi)如果有微生物的生長則會(huì)使柱效降低，此時(shí)應(yīng)用0.05%的NaNs水溶液(防腐劑)來沖洗色譜柱，再將色譜柱封嚴(yán)。色譜柱長期放置時(shí)，一定要將色譜柱的兩端封嚴(yán)，以防止由于溶劑揮發(fā)而造成的柱填料干縮現(xiàn)象，因這可導(dǎo)致柱效的嚴(yán)重降低。
c.色譜柱應(yīng)貯存在室溫下，如果放置于0℃以下的環(huán)境里，柱內(nèi)就會(huì)結(jié)冰，這也將導(dǎo)致柱效的降低。
五、色譜峰的雙峰問題
長期使用后的色譜柱，如果有雜質(zhì)進(jìn)入，就會(huì)使色譜柱入口處的固定相“板結(jié)”并在流動(dòng)相所產(chǎn)生的高壓作用下，形成柱頭的塌陷，被分析的樣品組分的正常色譜峰就變成了雙峰，這時(shí)可按下述方法來修復(fù)色譜柱。首先將柱頭的緊固螺母旋下，這時(shí)就會(huì)發(fā)現(xiàn)柱頭內(nèi)的固定相已被壓縮進(jìn)去了，嚴(yán)重時(shí)可縮進(jìn)10mm以上。在這種情況下，我們可用針尖將流動(dòng)相表層板結(jié)變黃的部分摳掉，并以相同的固定相將此塌陷區(qū)填平、壓實(shí)，再將色譜柱的緊固螺絲上緊，修復(fù)工作即告結(jié)束。用經(jīng)過修復(fù)后的色譜柱再做樣品時(shí)，色譜峰就恢復(fù)正常了。
以上從幾個(gè)方面簡介了色譜儀的正確使用及故障排除方法。在日常工作中，如果能對(duì)這些事項(xiàng)認(rèn)真對(duì)待，做到有問題及時(shí)解決，則會(huì)大大延長儀器的正常使用期限，并使儀器的性能得到最大限度的發(fā)揮。
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