、準備好工具和所需部件。工具包括扳手、超聲清洗器、密封圈安靜工具、新密封圈。用水-甲醇沖洗泵，拆開進出口管道，在泵頭和單向閥上標出液流方向。
第二、將柱塞桿縮至小，松開泵頭的收緊螺釘，小心托住泵頭。操作時要注意處處以平衡的動作慢慢退出泵頭，切不可搖動或上下左右擺動泵頭。
第三、從密封圈孔中輕輕拔出舊密封圈，注意不要化泵頭內壁，要毫不猶豫地隨即扔掉舊密封圈。
第四、將泵頭和新密封圈分別放入甲醇中超聲清洗，同時用無纖維紙擦洗柱塞桿。察看柱塞桿上有無劃痕，如有劃痕應換新柱塞桿然后再安裝密封圈，
第五、安裝新密封圈。這一步要用專門的安裝工具，切不可粗心大意，避免損壞密封圈。
第六、重新裝上泵頭。先在柱塞桿上滴幾滴甲醇以濕潤，滑動泵頭到位。千萬不能搖動或擺動，以防柱塞桿在這一步操作時折斷。平衡地上緊固定螺絲，接上進液管道。
后、打脫氣甲醇到泵腔中，不斷用紙巾從泵出口處吸去流出的液體，等到無氣泡一處再接上輸出管道，打開放空閥，繼續(xù)抽20mL甲醇趕走氣泡后，換成需要使用的流動相。
液相色譜儀檢測器阻塞的現象有：系統(tǒng)壓力增高，松開檢測器進口的接頭壓力降至正常水平。檢測器部分有三處易發(fā)生阻塞，即進口管路、流通池和出口管路。因組設造成壓力顯著增高，雖然用一般的凈化方法去掉阻塞可能不奏效，但值得一試。如用注射器回抽池中的溶劑受到很大阻力，說明阻塞相當嚴重。若是檢測儀器廠商標明池能耐高壓，可用泵反沖，這樣?？扇サ糇枞麎毫?，注意壓力不要超過6MPa~7MPa。標準池一般耐壓在3~5MPa左右，不可用此法。 用以上方法試驗不能成功疏通檢測器通道阻塞時，可將流通池從檢測器中拆下來，將進口管路卸下，用泵方向沖洗。然后再沖洗出口管路。如果進出口管路都是通暢的，那么就是流通池本身阻塞?！ ∵M口管路是最易發(fā)生堵塞的地方，用小徑的管路可以擋住進入檢測器的微粒。但有下列情形者在進口處可發(fā)生堵塞： 1、自己填裝的柱在出口處留下填料微粒； 2、修復柱時逆向反沖時間不夠就接到檢測器上； 3、逆向反沖時原柱頭密封性能不好，填料漏出?！ ∪绻氯h(huán)發(fā)生，應在柱和檢測器之間裝一個沒有死體積的在線過濾器。拆下進口管路反接到泵上反沖，可以疏通堵塞。 對一些頑固性阻塞而又不能從池上拆開的管路，可以從管路進口處切掉大約1~2cm長的管子。當然這是一種無可奈何的選擇，因為每次操作后會使得管子變短，還涉及到換刃環(huán)接頭等，還可能會因為切口不平整、密封不嚴等造成滲漏。 若用以上方法都不能疏通疏通進口管路，應考慮更換新管子或請廠商修理。出口管路阻塞，也可參照上述方法進行處理。
液相色譜柱由柱管、壓帽、卡套（密封環(huán)）、篩板（濾片）、接頭、螺絲（封頭）與柱填料等組成。
柱管：
多用不銹鋼制成，若果使用時柱壓不高于70 kg/cm2時，也可采用厚壁玻璃或石英管，管內壁要求有很高的光潔度。用于柱填料的裝填。
壓帽：
即色譜柱兩端套合于柱管端外壁的塑性圓柱帽，中部有小孔，多為聚四氟乙烯制成，用于固定篩板。
密封環(huán)：
位于接頭螺旋環(huán)內壁的彈性環(huán)，多為聚四氟乙烯制成，用于色譜柱兩端壓帽與柱外壁的密封。
色譜柱使用前注意事項。
色譜柱在使用前，最hao進行柱的性能測試，并將結果保存起來，作為今后評價柱性能變化的參考。
在做柱性能測試時要按照色譜柱出廠報告中的條件進行(出廠測試所使用的條件是最jia條件)，只有這樣，測得的結果才有可比性。
但要注意：
柱性能可能由于所使用的樣品、流動相、柱溫等條件的差異而有所不同。
1、樣品的前處理
a、最hao使用流動相溶解樣品。
b、使用預處理柱除去樣品中的強極性或與柱填料產生不可逆吸附的雜質。
c、使用0.45μm或0.22?m的過濾膜過濾除去微粒雜質。
2、流動相的配制
液相色譜是樣品組分在柱填料與流動相之間質量交換而達到分離的目的，因此要求流動相具備以下的特點：
a、流動相對樣品具有一定的溶解能力，保證樣品組分不會沉淀在柱中(或長時間保留在柱中)。
b、流動相與樣品不產生化學反應
c、流動相的黏度要盡量小，以便得到好的分離效果；降低柱壓降，延長泵的使用壽命(可運用提高溫度的方法降低流動相的黏度)。
d、流動相的物化性質要與使用的檢測器相適應。如使用UV檢測器，最hao使用對紫外吸收較低的溶劑配制。
e、流動相沸點不要太低，否則容易產生氣泡，導致實驗無法進行。
f、在流動相配制好后，一定要進行脫氣。
除去溶解在流動相中的微量氣體既有利于檢測，還可以防止流動相中的微量氧與樣品發(fā)生作用。
3、流動相流速的選擇
因柱效是柱中流動相線性流速的函數，使用不同的流速可得到不同的柱效。
對于一根特定的色譜柱，要追求最jia柱效，最hao使用最jia流速。
對內徑為4.6mm的色譜柱，流速一般選擇1ml／min，對于內徑為4.0mm柱，流速0.8ml／min為佳。
當選用最jia流速時，分析時間可能延長。
可采用改變流動相的洗滌強度的方法以縮短分析時間(如使用反相柱時，可適當增加甲醇或乙腈的含量)。
注意：
a．含水流動相最hao在實驗前配制，尤其是夏天使用緩沖溶液作為流動相不要過夜。最hao加入die氮化鈉，防止細菌生長。
b．流動相要求使用0.45 μm或0.22m濾膜過濾，除去微粒雜質。
c．使用HPLC級溶劑配制流動相，使用合適的流動相可延長色譜柱的使用壽命，提高柱性能。
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