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液相色譜儀色譜柱使用時(shí)需要注意哪些細(xì)節(jié) 液相色譜如何做好保養(yǎng)

時(shí)間:2020-07-12    來(lái)源:儀多多儀器網(wǎng)    作者:儀多多商城     
       在液相色譜儀的日常分離分析工作中,其色譜柱的正確使用和維護(hù)十分重要,色譜柱使用是否得當(dāng),直接影響色譜柱的壽命及液相色譜儀的使用效果,在色譜操作過(guò)程中,需要注意下列問(wèn)題,以維護(hù)儀器。
  1、柱子在裝卸、更換時(shí),動(dòng)作要輕,接頭擰緊要適度。必須防止較強(qiáng)的機(jī)械振動(dòng),以免柱床產(chǎn)生空隙。
  2、如果儀器用來(lái)做常規(guī)分析,樣品種類(lèi)有限,但分析次數(shù)多,則不妨為每一類(lèi)常規(guī)分析配置一根 柱,這樣有助于延長(zhǎng)柱子的壽命。
  3、避免壓力和溫度的急劇變化及任何機(jī)械震動(dòng)。溫度的突然變化或者使色譜柱從高處掉下都會(huì)影響柱內(nèi)的填充狀況;柱壓的突然升高或降低也會(huì)沖動(dòng)柱內(nèi)填料,因此在調(diào)節(jié)流速時(shí)應(yīng)該緩慢進(jìn)行,在閥進(jìn)樣時(shí)閥的轉(zhuǎn)動(dòng)不能過(guò)緩。
  4、應(yīng)逐漸改變?nèi)軇┑慕M成,特別是反相色譜中,不應(yīng)直接從有機(jī)溶劑改變?yōu)槿渴撬粗嗳弧?/div>
  5、如使用柱溫控制裝置時(shí),應(yīng)注意在通人流動(dòng)相后才能升溫。
  6、一般說(shuō)來(lái)色譜柱不能反沖,只有生產(chǎn)者指明該柱可以反沖時(shí),才可以反沖除去留在柱頭的雜質(zhì)。否則反沖會(huì)迅速降低柱效。
  7、選擇使用適宜的流動(dòng)相,以避免固定相被破壞。有時(shí)可以在進(jìn)樣器前面連接一個(gè)預(yù)柱,分析柱是鍵合硅膠時(shí),預(yù)柱為硅膠,可使流動(dòng)相在進(jìn)入分析柱之前預(yù)先被硅膠“飽和”,避免分析柱中的硅膠基質(zhì)被溶解。
  8、避免將基質(zhì)復(fù)雜的樣品尤其是生物樣品直接注人柱內(nèi),需要對(duì)樣品進(jìn)行預(yù)處理或者在進(jìn)樣器和色譜柱之間連接一個(gè)保護(hù)柱。保護(hù)柱一般是填有相似固定相的短柱。保護(hù)柱可以而且應(yīng)該經(jīng)常更換。
  9、保存液相色譜儀的色譜柱時(shí)應(yīng)將柱內(nèi)充滿乙腈或甲醇,柱接頭要擰緊,防止溶劑揮發(fā)干燥。禁止將緩沖溶液留在柱內(nèi)靜置過(guò)夜或更長(zhǎng)時(shí)間。

安捷倫液相色譜儀的日常維護(hù)及保養(yǎng)

1、手動(dòng)進(jìn)樣器:
平時(shí)應(yīng)該注意使用二次蒸餾水和甲醇在裝載狀態(tài)及進(jìn)樣分析狀態(tài)清洗;如果出現(xiàn)漏液現(xiàn)象,原因極可能為轉(zhuǎn)子密封墊磨損或污染,一般要申請(qǐng)維修或更換配件。
2、排液閥:
此處不能完全密封或漏液時(shí)一般是其中的墊片污染或磨損,可卸下后取出其墊片用異丙醇超聲波清洗或更換墊圈。
3、單向閥:
如遇到泵壓不穩(wěn)或流動(dòng)相不能抽取,則可能是單向閥出現(xiàn)問(wèn)題,卸下用異丙醇超聲波清洗,清洗時(shí)須按其安裝的方向放置在小燒杯中,切記不可與安裝方向倒置超洗!
4、工作站:
出現(xiàn)死機(jī)可重起計(jì)算機(jī);不正常運(yùn)行時(shí),首先可更換電腦測(cè)試其硬件故障;或在本機(jī)上重新插拔接口、重新安裝軟件。
5、過(guò)濾器:(安捷倫液相色譜儀)
當(dāng)色譜峰出現(xiàn)異常情況時(shí),有可能是此部件被污染, 拆下用異丙醇超洗或更換過(guò)濾墊片。
6、吸濾頭:
特殊情況下可拆下濾頭抽取以判斷其中是否堵塞;亦可用注射器吸取流動(dòng)相通過(guò)吸濾頭打出以判斷其是否堵塞。若有堵塞情況可用異丙醇超聲波清洗;清洗不成功則需要更換。
7、流動(dòng)相的抽作要求:
液相級(jí)色譜醇,二次蒸餾水,緩沖鹽一定要過(guò)濾;
流動(dòng)相脫氣至關(guān)重要(可采用抽濾,超聲波脫氣等方法)
8、流通池:
在色譜峰不正常時(shí)會(huì)可能是此部件補(bǔ)污染??刹鹦逗笕〕銎渲械膲|片用異丙醇超洗(可根據(jù)說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作或申請(qǐng)維修)。
9、泵頭:
泵頭漏液或出現(xiàn)其它故障一般要申請(qǐng)維修(如漏液,或更換柱塞桿及其密封墊等)
泵壓不穩(wěn):
1、泵頭有氣泡——流動(dòng)相脫氣/大流量沖洗泵/用注射器抽取流動(dòng)動(dòng)相
2、單向閥故障——清洗
若上述操作仍不能解決,可用異丙醇沖洗流動(dòng)(無(wú)色譜柱沖洗,由手動(dòng)進(jìn)樣器直接進(jìn)檢測(cè)器),流量為3-4ml/min,沖洗50分鐘左右,然后重新安裝色譜柱,更換流動(dòng)相平衡,如此再不能解決泵壓波動(dòng)故障,可申請(qǐng)更換配件。
10.漏液處理:(安捷倫液相色譜儀)
C18柱不能進(jìn)蛋白樣品、血樣,生物樣品。
要注意柱子的PH值范圍,不得注射強(qiáng)酸強(qiáng)堿的樣品,特別是堿性樣品。
長(zhǎng)時(shí)間不用儀器,應(yīng)該將柱子取上用堵頭封好保存,注意不能用純水保存柱子,而應(yīng)該用有機(jī)相(如甲醇)保存,因?yàn)榧兯组L(zhǎng)霉。
流路堵塞問(wèn)題:堵塞導(dǎo)致壓力太大,按預(yù)柱→混合器中的過(guò)濾器→管路過(guò)濾器→單向閥檢查,并清洗。清洗方法:①以民丙醇作溶劑沖洗②放在異丙醇中超聲波清洗③用10%稀硝酸清洗
11.緩沖鹽的使用:
流動(dòng)相含有鹽分時(shí),做完實(shí)驗(yàn)后一定要進(jìn)行流路沖洗;
首先用水沖洗,打開(kāi)排液閥用PURG鍵轉(zhuǎn)換出原有含鹽的流動(dòng)相,然后關(guān)閉排液閥打開(kāi)泵沖洗全部流路45分鐘以上,如此更換流動(dòng)相為水和甲醇混合液沖洗全部流路30分鐘(此步驟一般可省去,根據(jù)實(shí)驗(yàn)而論),zui后更換純甲醇沖洗全部流路45分鐘以上。
12.泵頭沖洗;
用備件中的針頭和針管分別用蒸餾水和純甲醇沖洗3-5ml。
如流動(dòng)相不含鹽,可對(duì)機(jī)器定期進(jìn)行簡(jiǎn)單的沖洗維護(hù),根據(jù)實(shí)驗(yàn)多少而定。
手動(dòng)進(jìn)樣器沖洗;
同樣用備件中的針管和專(zhuān)用沖洗針頭對(duì)手動(dòng)進(jìn)樣器的裝載狀態(tài)和進(jìn)樣狀態(tài)分別進(jìn)行沖洗3-4ml的蒸餾水,然后再?zèng)_洗3-4ml的純甲醇。確保每次做完實(shí)驗(yàn),所有流路中充滿純甲醇!

高效液相色譜儀操作步驟:

1). 過(guò)濾流動(dòng)相,根據(jù)需要選擇不同的濾膜.

2). 對(duì)抽濾后的流動(dòng)相進(jìn)行超聲脫氣10-20分鐘。

3). 打開(kāi)hplc工作站(包括計(jì)算機(jī)軟件和色譜儀),連接好流動(dòng)相管道,連接檢測(cè)系統(tǒng)。

4). 進(jìn)入hplc控制界面主菜單,點(diǎn)擊manual,進(jìn)入手動(dòng)菜單。

5). 有一段時(shí)間沒(méi)用,或者換了新的流動(dòng)相,需要先沖洗泵和進(jìn)樣閥。沖洗泵,直接在泵的出水口,用針頭抽取。沖洗進(jìn)樣閥,需要在manual菜單下,先點(diǎn)擊purge,再點(diǎn)擊start,沖洗時(shí)速度不要超過(guò)10 ml/min。

6). 調(diào)節(jié)流量,初次使用新的流動(dòng)相,可以先試一下壓力,流速越大,壓力越大,一般不要超過(guò)2000。點(diǎn)擊injure,選用合適的流速,點(diǎn)擊on,走基線,觀察基線的情況。

7). 設(shè)計(jì)走樣方法。點(diǎn)擊file,選取se-lect users and methods,可以選取現(xiàn)有的各種走樣方法。若需建立一個(gè)新的方法,點(diǎn)擊new method。選取需要的配件,包括進(jìn)樣閥,泵,檢測(cè)器等,根據(jù)需要而不同。選完后,點(diǎn)擊protocol。一個(gè)完整的走樣方法需要包括:a.進(jìn)樣前的穩(wěn)流,一般2-5分鐘;b.基線歸零;c.進(jìn)樣閥的loading-inject轉(zhuǎn)換;d.走樣時(shí)間,隨不同的樣品而不同。

8). 進(jìn)樣和進(jìn)樣后操作。選定走樣方法,點(diǎn)擊start。進(jìn)樣,所有的樣品均需過(guò)濾。方法走完后,點(diǎn)擊postrun,可記錄數(shù)據(jù)和做標(biāo)記等。全部樣品走完后,再用上面的方法走一段基線,洗掉剩余物。

9). 關(guān)機(jī)時(shí),先關(guān)計(jì)算機(jī),再關(guān)液相色譜。

10). 填寫(xiě)登記本,由負(fù)責(zé)人簽字。注意事項(xiàng):

11). 流動(dòng)相均需色譜純度,水用20m的去離子水。脫氣后的流動(dòng)相要小心振動(dòng)盡量不引起氣泡。12). 柱子是非常脆弱的,第一次做的方法,先不要讓液體過(guò)柱子。

13). 所有過(guò)柱子的液體均需嚴(yán)格的過(guò)濾。

14). 壓力不能太大,可以不要超過(guò)2000 psi。



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