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高效液相色譜質(zhì)譜儀日常維護計劃 液相色譜如何操作

時間:2020-07-11    來源:儀多多儀器網(wǎng)    作者:儀多多商城     

  正確的維護和保養(yǎng)高效液相色譜質(zhì)譜儀,能夠提高儀器使用壽命,使儀器穩(wěn)定的工作得到穩(wěn)定可靠的數(shù)據(jù)。

液相色譜儀部分:

一、

流動相的制備要求:

高效液相級色譜醇,二次蒸餾水,緩沖鹽一定要過濾;

流動相脫氣至關(guān)重要(可采用抽濾,超聲波脫氣等方法。

二、

高壓恒流泵的維護和保養(yǎng)

1.高壓恒流泵為整個色譜系統(tǒng)提供穩(wěn)定均衡的流動相流速,保證系統(tǒng)的穩(wěn)定運行和系統(tǒng)的重現(xiàn)性。高壓輸液泵由步進電機和柱塞等組成,高壓力長時間的運行回逐漸磨損泵的內(nèi)部結(jié)構(gòu)。在升高流速的時候應(yīng)梯度勢升高,每次升高0.2mL/min當壓力穩(wěn)定時再升高,如此反復直到升高到所需流速。

2.特殊情況下可拆下濾頭抽取以判斷其中是否堵塞;亦可用注射器吸取流動相通過吸濾頭打出以判斷其是否堵塞。若有堵塞情況可用異丙醇超聲波清洗;清洗不成功則需要更換

3.在儀器使用完了以后,要及時清晰管路沖洗泵,保證泵的良好運轉(zhuǎn)環(huán)境,保證泵的正常使用壽命。

YL9900 液相色譜質(zhì)譜儀 LC/MS

三、

色譜柱的維護和保養(yǎng)

1.所使用的流動相均應(yīng)為HPLC級或相當于該級別的,在配置過程中所有非HPLC級的試劑或溶液均經(jīng)0.45um薄膜過濾。而且流動相使用前都經(jīng)過超聲儀超聲脫氣后才使用。

2.所使用的水必須是經(jīng)過蒸餾純化后再經(jīng)過0.45um水膜過濾后使用,所有試液均新用新配。并且在進樣的樣品都必須經(jīng)過0.45um薄膜針筒過濾后進樣。

3.所使用到的最大流速為1.0mL/min,所以流速提升過程應(yīng)是梯度提升,不存在流速的突升突降。

4.儀器檢測完,均使用水:甲醇=90:10清洗了管路和色譜柱1小時以上,使用水:甲醇=90:10保存管路和色譜柱40分鐘以上。

四、

工作站的維護

出現(xiàn)死機可重啟計算機;不正常運行時,首先可更換電腦測試其硬件故障;或在本機上重新插拔接口、重新安裝軟件。

液相質(zhì)譜儀質(zhì)譜部分:

七、死機處理的9個步驟

1.Analyst軟件中Hardware configure重新deactive,再active。

2.用CTRL-ALT-DEL,Windows任務(wù)管理器結(jié)束任務(wù),關(guān)掉Analyst軟件,然后重新打開Analyst。

3.關(guān)掉Analyst軟件,Stop Service后重新打開Analyst軟件。

4.重新啟動控制儀器的電腦,HPLC重新啟動,再active。

5.StopService后進入Scu21.exe中,clear GPIB Bus。

6.StopService后進入Scu21.exe中,Reset System controller。

7.同時按下電源旁邊的兩個按扭reset。

8.重新開關(guān)儀器總電源。

9.StopService后進入Scu21.exe中。

※說明:一步不行,再使用下一步,不一定7步都需要做完

 

------ 責任編輯:瑞利祥合--分析儀器采購顧問

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【導讀】在高效液相色譜儀分析過程中,緩沖液是不可或缺的,因為要用它來調(diào)節(jié)流動相的pH值,緩沖鹽使用不當,后果可是吃不了兜著走。比如說,液相色譜儀的色譜柱壓升高、



    在高效液相色譜儀分析過程中,緩沖液是不可或缺的,因為要用它來調(diào)節(jié)流動相的pH值,緩沖鹽使用不當,后果可是吃不了兜著走。比如說,液相色譜儀色譜柱壓升高、柱效下降、保留時間異常等等不良影響:
    1、柱壓升高;
    原因:緩沖鹽使用不當導致緩沖鹽析出,堵塞塞板和鍵合相顆粒之間的孔隙,阻礙流動相傳質(zhì),引起柱壓升高。
    2、相同化合物的保留時間發(fā)生變化;
    原因:如果沒有沖洗干凈就進行進樣,色譜柱內(nèi)含有的鹽會使化合物的保留時間發(fā)生變化.
    3、柱效下降;
    原因:
    i、有些緩沖鹽會滲入到鍵合相的深處,損害硅膠基體,導致色譜柱鍵合相流失,柱床變松,柱效下降;
    ii、凝結(jié)在鍵合相表面,使C18碳鏈難以舒展,對物質(zhì)的保留能力下降,導致柱效下降。因此液相色譜儀用過緩沖鹽后需要對色譜柱進行沖洗,水中緩沖鹽濃度較大時應(yīng)特別引起注意。





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  液相色譜是一類分離與分析技術(shù),其特點是以液體作為流動相,固定相可以有多種形式,如紙、薄板和填充床等。在色譜技術(shù)發(fā)展的過程中,為了區(qū)分各種方法,根據(jù)固定相的形式產(chǎn)生了各自的命名,如紙色譜、薄層色譜和柱液相色譜。一般來說,選擇一臺品質(zhì)優(yōu)良的液相色譜系統(tǒng)應(yīng)從以下幾個方面考慮:
 
  一.主要技術(shù)指標優(yōu)異:
 
  首先是如何看指標。液相色譜儀的指標很多,有泵的、檢測器的、色譜柱等等。我們認為要看主要技術(shù)指標,根據(jù)國家標準,儀器的主要指標有噪音,漂移,小檢測濃度,定性定量重復性等。這些指標都要放在系統(tǒng),回路里去看,去比較。就是需要把各單元裝置都要聯(lián)接好,如接好色譜柱,進樣閥,并且要通上流動相。因為您在分析中也都是聯(lián)接好以后才可以進行分析的,而不是單單用個檢測器或是泵的。然后在這個基礎(chǔ)上,再去比較這些主要指標。
 
  1.噪音
 
  是指由儀器的電器元件、溫度波動、電壓的線性脈沖以及其他非溶質(zhì)作用產(chǎn)生的高頻噪聲和基線的無規(guī)則波動。噪音的大小直接關(guān)系到儀器的檢測靈敏度,噪音越大,檢測的靈敏度就越低。對于檢測低含量的樣品就要求儀器的噪音越小越好,否則噪音過大將會導致基線不穩(wěn),甚至影響分析結(jié)果。
 
  2.小檢測濃度(小檢測限)
 
  是反映儀器靈敏度的重要參數(shù)。CL=2×Nd×C/H(CL :小檢測濃度 Nd:噪音 C:樣品濃度小檢測濃度 H:樣品峰高)由上式可見,小檢測濃度是和噪音成正比的,噪音越大,小檢測濃度就越大,靈敏度就越低。某些廠家回避了這個指標,說明他們不愿在小檢測濃度的基礎(chǔ)上去比較噪音。
 
  3.漂移
 
  是指儀器穩(wěn)定后一段時間內(nèi)基線漂離原點的距離,通常用來衡量儀器穩(wěn)定快慢。高品質(zhì)的儀器能在較短的時間內(nèi)達到穩(wěn)定,從而在一定程度上提高了分析效率。
 
  4.定性定量重復性
 
  主要是考核儀器穩(wěn)定性的指標,這對于分析樣品來說是非常重要的。好的儀器其穩(wěn)定性應(yīng)該是十分的,這就要求多次進樣保留時間及含量的一致性,這樣做出來的結(jié)果才能使人信服。
 
  有的朋友會認為這些指標好像都是檢測器的。對的,但是就前面所說條件是要放在整個回路和系統(tǒng)里去看去比較。例如:泵的脈動會直接影響噪音指標,泵的流量準確度、度指標,以及密封性不好也會影響相關(guān)指標。所以要系統(tǒng)地看指標。例如:某些公司在公布的指標中,噪音和漂移指標寫的條件是空池或有的干脆不寫。這個指標只考核了UV檢測器光學和電氣的特性,與實際情況相差甚遠,并沒有考驗泵的壓力脈動,液流回路的阻尼和UV檢測器流通池的性能。所以我們認為從以上的主要指標中可以反應(yīng)出儀器的一些真實水平。
 
  二.操作方便:
 
  操作方便性無論是對新手還是成熟的用戶都是很重要的。操作越簡單,有利于提高分析效率,也為以后分析方法的拓展提供有力的幫助。上海伍豐科學儀器有限公司的WS-100工作站軟件實現(xiàn)了真正的智能化操作。它摒棄了以往工作站軟件只能起到數(shù)據(jù)處理的理念,在國內(nèi)推出了集控制與后處理于一身的軟件,在操作使用上給用戶帶來了極大的方便。
 
  三.系統(tǒng)的整體開發(fā):
 
  這里指的是儀器的整體開發(fā),是一個完整的系統(tǒng)。目前市場上有這個現(xiàn)象,說我的泵是進口的,或者是檢測器怎么好,用了什么很多的進口件組裝等等。其實這是個誤區(qū)。液相色譜是個復雜的系統(tǒng),不是整體開發(fā)的,各項指標之間、軟件和硬件、硬件和硬件等都不匹配,整體水平不會高到哪里去,而且在售后服務(wù)方面對用戶也是不負責任的。
 
  整體開發(fā)的主要優(yōu)點有:各項技術(shù)指標統(tǒng)一、儀器各單元的通信協(xié)調(diào)、能夠建立一個整體的數(shù)字化評價系統(tǒng)、體現(xiàn)了企業(yè)的科技及開發(fā)實力。國外知名的儀器生產(chǎn)廠家的產(chǎn)品也是整體開發(fā)的,所以能夠保證儀器的整體水平。
 
  四.穩(wěn)定可靠,故障率低
 
  1、色譜柱的使用說明:
 
  (1)、色譜柱使用前注意事項:
 
  色譜柱的儲存液無特殊說明,均為評價報告所示的流動相。在使用前,一定要注意色譜柱的儲存液與要分析樣品的流動相是否互溶。在反相色譜中,如用高濃度的鹽或緩沖液作洗脫劑,應(yīng)先用10%左右的低濃度的有機相洗脫劑過渡一下,否則緩沖液中的鹽在高濃度的有機相中很容易析出,堵塞色譜柱。
 
  (2)、流動相:
 
  流動相中所使用的各種有機溶劑要盡可能使用色譜純,配流動相的水好是超純水或全玻璃器皿的雙蒸水。如果將所配得流動相再經(jīng)過0.45μm的濾膜過濾一次則更好,尤其是含鹽的流動相。另外,裝流動相的容器和色譜系統(tǒng)中的在線過濾器等裝置應(yīng)該定期清洗或更換。
 
  以常規(guī)硅膠為基質(zhì)的鍵合相填料通常的PH值適用范圍是2.0-8.0,BDS C18適合于堿性化合物,PH值適用范圍為2.0-10.0。當必須要在PH值適用范圍的邊界條件下使用色譜柱時,每次使用結(jié)束后立即用適合于色譜柱儲存并與所使用的流動相互溶的溶劑清洗,并完全置換掉原來所使用的流動相。
 
  (3)、樣品:
 
  樣品也要盡可能清潔,可選用樣品過濾器或樣品預處理柱(SPE)對樣品進行預處理;若樣品不便處理,要使用保護柱。在用正相色譜法分析樣品時,所有的溶劑和樣品應(yīng)嚴格脫水。
 
  2、色譜柱的保存
 
  (1)、反相色譜柱每天實驗后的保養(yǎng):
 
  使用緩沖液或含鹽的流動相,實驗完成后應(yīng)用10%的甲醇/水沖洗30分鐘,洗掉色譜柱中的鹽,再用甲醇沖洗30分鐘。注意:不能用純水沖洗柱子,應(yīng)該在水中加入10%的甲醇,防止將填料沖塌陷。
 
  (2)、長期保存色譜柱:
 
  如色譜柱要長時間保存,必須存于合適的溶劑下。對于反相柱可以儲存于純甲醇或乙腈中,正相柱可以儲存于嚴格脫水后的純正己烷中,離子交換柱可以儲存于水(含防腐劑疊氮化鈉或柳硫汞)中,并將購買新色譜柱時附送的堵頭堵上。儲存的溫度好是室溫。
 
  3、色譜柱的再生
 
  因為色譜柱是消耗品,隨著使用時間或進樣次數(shù)的增加,會出現(xiàn)色譜峰高降低,峰寬加大或出現(xiàn)肩峰的現(xiàn)象,一般來說可能是柱效下降。
 
  (1)、反相柱的再生:依次采用20-30倍的色譜柱體積的甲醇:水=10:90 (V/V),乙腈,異丙醇作為流動相沖洗色譜柱,完成后再以相反順序沖洗色譜柱。
 
  (2)、正相柱的再生:依次以20-30倍色譜柱的體積的正己烷、異丙醇、二氯甲烷、甲醇作為流動相沖洗色譜柱,然后再以相反的順序沖洗色譜柱。要注意上述溶劑必須嚴格脫水。
 
  4、色譜柱在使用過程中易出現(xiàn)的問題和解決辦法
 
  色譜柱在使用中常見的問題就是柱壓升高,如果柱壓是在長時間使用過程中緩慢增加,屬于正常現(xiàn)象。但柱壓在使用過程中突然升高(系統(tǒng)管路堵塞及壓力傳感器故障除外),可能的原因有如下幾點:
 
  (1)、色譜柱頭的過濾篩板堵塞或污染;
 
  (2)、色譜柱頭的填料被樣品污染;
 
  (3)、色譜柱內(nèi)緩沖液中的鹽遇到高濃度的甲醇或其他有機溶劑,形成結(jié)晶析出;
 
  (4)、流動相PH值過大或過小使固定相結(jié)構(gòu)破壞或溶解。
 
  解決辦法如下:
 
  (1)、如確定是色譜柱頭的過濾篩板被污染,可以將色譜柱反方向用甲醇沖洗至正常壓力,或者卸下色譜柱頭,將其放在10%的稀硝酸內(nèi)超聲清洗10分鐘,后再用純水超聲10分鐘,重新裝入色譜柱。
 
  (2)、如確定色譜柱頭的填料被污染,將柱頭螺絲卸下,挖出柱內(nèi)前段被污染的填料,用相同的柱填料重新填入,仔細修復后,重新安裝上柱頭螺絲。
 
  (3)、如確定定是鹽結(jié)晶,用10%的甲醇/水沖洗色譜柱使柱內(nèi)鹽全部溶解,再換高濃度甲醇。
 
  (4)、如果因PH值使用不當,很難恢復。
 


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