超微量分光光度計如何使用，有哪些注意事項?
一：超微量分光光度計是精密光學(xué)儀器，出廠前經(jīng)過精細(xì)的裝配和調(diào)試，如果能對儀器進(jìn)行恰當(dāng)?shù)木S護(hù)和保養(yǎng)，不僅能保證儀器的可靠性和穩(wěn)定性，也可以延長儀器使用壽命。
二：超微量分光光度計常用于定量溶于緩沖液的寡核苷酸，單鏈、雙鏈DNA，以及RNA。核酸的高吸收峰的吸收波長260 nm。每種核酸的分子構(gòu)成不一，因此其換算系數(shù)不同。定量不同類型的核酸，事先要選擇對應(yīng)的系數(shù)。如：1OD 的吸光值分別相當(dāng)于50μg/ml的dsDNA，37μg/ml的ssDNA，40μg/ml的RNA，30μg/ml的Olig。測試后的吸光值經(jīng)過上述系數(shù)的換算，從而得出相應(yīng)的樣品濃度。
三：超微量分光光度計的工作原理是利用分光光度法對物質(zhì)進(jìn)行定量定性分析的儀器，常用于核酸，蛋白定量以及細(xì)菌生長濃度的定量。無論在物理學(xué)、化學(xué)、生物學(xué)、醫(yī)學(xué)、材料學(xué)、環(huán)境科學(xué)等科學(xué)研究領(lǐng)域 ,還是在化工、醫(yī)藥、環(huán)境檢測、冶金等現(xiàn)代生產(chǎn)與管理部門 ,紫外可見分光光度計督有廣泛而重要的應(yīng)用。
四：超微量分光光度計是精密光學(xué)儀器，正確安裝、使用和保養(yǎng)對保持儀器良好的性能和保證測試的準(zhǔn)確度有重要作用。下面分享一些超微量分光光度計不可不知的保養(yǎng)常識。
(1)儀器工作環(huán)境的要求
分光光度計對工作環(huán)境的要求如下。
?、賰x器應(yīng)安放在干燥的房間內(nèi)，使用溫度為5～35℃.相對濕度不超過85%。
?、趦x器應(yīng)放置在堅固平穩(wěn)的工作臺上，且避免強(qiáng)烈的振動或持續(xù)的振動。
?、凼覂?nèi)照明不宜太強(qiáng)，且應(yīng)避免直射日光的照射。
?、茈娚炔灰酥苯酉騼x器吹風(fēng)，以防止光源燈因發(fā)光不穩(wěn)定而影響儀器的正常使用。
?、荼M量遠(yuǎn)離高強(qiáng)度的磁場、電場及發(fā)生高頻波的電器設(shè)備。
?、薰┙o儀器的電源電壓為AC 220V±22V，頻率為50Hz±1Hz，并必須裝有良好的接地線。推薦使用功率為1000w以上的電子交流穩(wěn)壓器或交流恒壓穩(wěn)壓器，以加強(qiáng)儀器的抗干擾性能。
⑦避免在有硫化氫等腐蝕性氣體的場所使用。
(2)儀器的日常維護(hù)和保養(yǎng)
?、俟庠础９庠吹膲勖邢?，為了延長光源使用壽命，在不使用儀器時不要開光源燈，應(yīng)盡量減少開關(guān)次數(shù)。在短時問的工作間隔內(nèi)可以不關(guān)燈。剛關(guān)閉的光源燈不能立即重新開啟。儀器連續(xù)使用時間不應(yīng)超過3h。若需長時間使用，間歇30min。如果光源燈亮度明顯減弱或不穩(wěn)定，應(yīng)及時更換新燈。更換后要調(diào)節(jié)好燈絲位置，不要用手直接接觸窗口或燈泡，避免油污沾附。若不小心接觸過，要用無水乙醇擦拭。
?、趩紊?。單色器是儀器的核心部分，裝在密封盒內(nèi)，不能拆開。選擇波長應(yīng)平衡地轉(zhuǎn)動，不可用力過猛。為防止色散元件受潮生霉，必須定期更換單色器盒干燥劑(硅膠)。若發(fā)現(xiàn)干燥劑變色，應(yīng)立即更換。
?、畚粘?。必須正確使用吸收池，應(yīng)特別注意保護(hù)吸收池的兩個光學(xué)面。
④檢測器。光電轉(zhuǎn)換元件不能長時間曝光，且應(yīng)避免強(qiáng)光照射或受潮積塵。
?、莓?dāng)儀器停止工作時，必須切斷電源。
?、逓榱吮苊鈨x器積灰和沾污，在停止工作時，應(yīng)蓋上防塵罩。
?、邇x器若暫時不用要定期通電，每次不少于20～30min，以保持整機(jī)呈干燥狀態(tài)，并且維持電子元器件的性能。
分光光度計作為一種精密儀器，在運行工作過程中由于工作環(huán)境，操作方法等種種原因，其技術(shù)狀況必然會發(fā)生某些變化， 可能影響設(shè)備的性能，甚至誘發(fā)設(shè)備故障及事故。因此，分析工作者必須了解分光光度計的基本原理和使用說明，并能及時發(fā)現(xiàn)和排除這些隱患，對已產(chǎn)生的故障及 時維修才能保證儀器設(shè)備的正常運行。
1)若大幅度改變測試波長，需稍等片刻，等燈熱平衡后，重新校正“0”和“100%”點。然后再測量。
2)指針式儀器在未接通電源時，電表的指針必須位于零刻度上。若不是這種情況，需進(jìn)行機(jī)械調(diào)零。
3)比色皿使用完畢后，請立即用蒸餾水沖洗干凈，并用干凈柔軟的紗布將水跡擦去，以防止表面光潔度被破壞，影響比色皿的透光率。
4)操作人員不應(yīng)輕易動燈泡及反光鏡燈，以免影響光效率。
5)1900型等分光光度計，由于其光電接收裝置為光電倍增管，它本身的特點是放大倍數(shù)大，因而可以用于檢測微弱光 電信號，而不能用來檢測強(qiáng)光。否則容易產(chǎn)生信號漂移，靈敏度下降。針對其上述特點，在維修、使用此類儀器時應(yīng)注意不讓光電倍增管長時間暴露于光下，因此在 預(yù)熱時，應(yīng)打開比色皿蓋或使用擋光桿，避免長時間照射使其性能漂移而導(dǎo)致工作不穩(wěn)。
6)放大器靈敏度換擋后，必須重新調(diào)零。
7)比色杯的配套性問題。比色杯必須配套使用，否則將使測試結(jié)果失去意義。在進(jìn)行每次測試前均應(yīng)進(jìn)行比較。具體方法 如下;分別向被測的兩只杯子里注入同樣的溶液，把儀器置于某一波長處，石英比色杯;220nm、700nm裝蒸餾水，玻璃比色杯：700nm處裝蒸餾水， 將某一個池的透射比值調(diào)至100%，測量其他各池的透射比值，記錄其示值之差及通光方向，如透射比之差在±0.5%的范圍內(nèi)則可以配套使用，若超出此范圍 應(yīng)考慮其對測試結(jié)果的影響。
分光光度計分操作中容易出現(xiàn)的幾個典型故障及其排除方法：
1)儀器不能調(diào)零。可能原因：
a)光門不能完全關(guān)閉。解決方法：修復(fù)光門部件，使其完全關(guān)閉。
b)透過率“100%”旋到底了。解決方法：重新調(diào)整“100%”旋鈕。
c)儀器嚴(yán)重受潮。解決方法：可打開光電管暗盒，用電吹風(fēng)吹上一會兒使其干燥，并更換干燥劑。
d)電路故障。解決方法：送修理部門，檢修電路。
2)分光光度計不能調(diào)“100%”?？赡茉颍?/span>
a)光能量不夠。解決方法：增加靈敏度倍率檔位，或更換光源燈(盡管燈還亮)。
b)比色皿架未落位。解決方法：調(diào)整比色皿架使其落位。
c)光電轉(zhuǎn)換部分老化。解決方法：更換部件。
d)電路故障。解決方法：調(diào)修電路。
3) 分光光度計測量過程中,“100%”點經(jīng)常變動?？赡茉颍?/span>
a)比色皿在比色皿架中放置的位置不一致，或其表面有液滴。解決方法：用擦鏡紙擦干凈比色皿表面，然后將其安放在比色槽的左邊，上面用定位夾定位。
b)電路故障(電壓、光電接收、放大電路)。解決方法：送修。
4)分光光度計數(shù)顯不穩(wěn)?？赡茉颍?/span>
a)預(yù)熱時間不夠。解決方法：延長預(yù)熱時間至30分鐘左右(部分儀器由于老化等原因，長時間處于工作狀態(tài)時，也會工作不穩(wěn))。
b)光電管內(nèi)的干燥劑失效，使微電流放大器受潮。解決方法：烘烤電路，并更換或烘烤干燥劑。
c)環(huán)境振動過大、光源附近空氣流速大、外界強(qiáng)光照射等。解決方法：改善工作環(huán)境。
d)光電管、電路等其它原因。解決方法：送修。
五、提高分光光度計透射比檢定及使用精度的幾種方法
在分光光度計的使用或檢定中,透射比(吸光度)的準(zhǔn)確度是衡量儀器工作性能的一項重要指標(biāo),它的準(zhǔn)確程度直接關(guān)系到所測數(shù)據(jù)的可信性及科學(xué)性。所以提高此項指標(biāo)的使用及檢定準(zhǔn)確度顯得尤為重要。
分光光度計日常維護(hù)
分析儀器工作者要懂得儀器的日常維護(hù)和對主要技術(shù)指標(biāo)的簡易測試方法，自己經(jīng)常對儀器進(jìn)行維護(hù)和測試，以保證儀器工作在zui佳狀態(tài)。
一、溫度和濕度是影響儀器性能的重要因素。他們可以引起機(jī)械部件的銹蝕，使金屬鏡面的光潔度下降，引起儀器機(jī)械部分的誤差或性能下降；造成光學(xué)部件如光 柵、反射鏡、聚焦鏡等的鋁膜銹蝕，產(chǎn)生光能不足、雜散光、噪聲等，甚至儀器停止工作，從而影響儀器壽命。維護(hù)保養(yǎng)時應(yīng)定期加以校正。應(yīng)具備四季恒濕的儀器 室，配置恒溫設(shè)備，特別是地處南方地區(qū)的實驗室。
二、環(huán)境中的塵埃和腐蝕性氣體亦可以影響機(jī)械系統(tǒng)的靈活性、降低各種限位開關(guān)、按鍵、光電偶合器的可靠性，也是造成必須學(xué)部件鋁膜銹蝕的原因之一。因此必須定期清潔，保障環(huán)境和儀器室內(nèi)衛(wèi)生條件，防塵。
三、分光光度計使用一定周期后，內(nèi)部會積累一定量的塵埃，由維修工程師或在工程師指導(dǎo)下定期開啟儀器外罩對內(nèi)部進(jìn)行除塵工作，同時將各發(fā)熱元件的散熱器重 新緊固，對光學(xué)盒的密封窗口進(jìn)行清潔，必要時對光路進(jìn)行校準(zhǔn)，對機(jī)械部分進(jìn)行清潔和必要的潤滑，zui后，恢復(fù)原狀，再進(jìn)行一些必要的檢測、調(diào)校與記錄。
分光光度計注意事項
1．該儀器應(yīng)放在干燥的房間內(nèi)，使用時放置在堅固平穩(wěn)的工作臺上，室內(nèi)照明不宜太強(qiáng)。熱天時不能用電扇直接向儀器吹風(fēng)，防止燈泡燈絲發(fā)亮不穩(wěn)定。
2．使用本儀器前，使用者應(yīng)該首先了解本儀器的結(jié)構(gòu)和工作原理，以及各個操縱旋鈕之功能。在未按通電源之前，應(yīng)該對儀器的安全性能進(jìn)行檢查，電源接線應(yīng)牢固，通電也要良好，各個調(diào)節(jié)旋鈕的起始位置應(yīng)該正確，然后再按通電源開關(guān)。
3．在儀器尚未接通電源時，電表指針必須于“0”刻線上，若不是這種情況，則可以用電表上的校正螺絲進(jìn)行調(diào)節(jié)。
摘要：目前，國際上通常按紫外可見分光光度計的儀器結(jié)構(gòu)將其分為單光束、雙光束和雙波長三類。
（一）單光束分光光度計
常用的單光束可見分光光度計有721型、722型、723型、724型、727型等。常用的紫外可見分光光度計有751G型、752型、753型、754型、756M型等。國外的Du70型、Pu8700型也是單光束分光光度計* 單光束是指從光源今發(fā)出的光，經(jīng)過單色器等—系列光學(xué)元件，通過吸收池，zui后照在檢測器上時，始終為一束光。它只官一束單色光（光束只能交替通過參比溶液、樣品溶液），一只比色皿，一只光電轉(zhuǎn)換器。工作時，一條光路，先通過多比溶液，再通過試樣溶液進(jìn)行光強(qiáng)度的測旦。
單光束分光光度計的特點是結(jié)構(gòu)簡單、價格低，主要適用于做定量分析，測量結(jié)果受電源的波動影響較大，容易給測量結(jié)果帶來較大的誤差。所以，它們在位灼上受到限制。一般來講，要求較高的制藥行業(yè)、質(zhì)量檢驗行加等不適宜使用單光束紫外可見分光光度訃。
（二）雙光束分光光度計
常見的雙光束紫外可見分光光度汁主要有710型、730型、7MMc型、760cRT型、 TYt880型、TY8500型、TU—1901型、TU—l咖型、UVL2t0型、UV/見—1型、UY21叨型、t乃L763型、t正/—2450型、t八/—3101型、U—3400型、Lambda9血型、Lilnbda9型、CaV5型、CgY6咖型、Cav500型等。
雙光束分光光度汁就是有兩束單色光的紫外可見分光光度計。其光路設(shè)計基本上與單光束分光光度計相似。區(qū)別是在單色器與吸收弛之間加了一個切光器，其作用是以一定的頻率把一個光束交替分為強(qiáng)度相等的兩柬光，使一路通過參比溶液，另一路通過樣品溶液。然后由檢測器交替接收參比信號和樣品信號。接收的光信號轉(zhuǎn)變成電信號后，由前置放大器放大，并進(jìn)一步解調(diào)、放大、補(bǔ)償?shù)?，zui后由顯示系統(tǒng)顯示。其光路系統(tǒng).
（三）雙波長分光光度計
雙波長分光光度計采用兩個單色器，可以同時得到兩柬波長不同的單色光，其光路. 光源發(fā)出的光被兩個單色器分別分離出波長為4：和4z的單色光，通過切光器，將兩束光以一定的時間間隔交替照射到裝有樣品試液的同一個吸收池，由檢測器顯示出試液在波長4?和42的透射比或吸光度。雙波長分光光度計不僅能測量高濃度試樣、多組分混合試樣，而義測定混濁樣品時比單波長測定更靈敏、更有選擇性。雙波長測定時，兩個波長的光通過同一吸收池，pJ以消除因吸收他的參數(shù)不同、位置不同、污垢以及制備參比溶液等帶來的誤差，從而可以顯著地提高測定的準(zhǔn)確度。
449717568
