核酸的定量是便攜分光光度計(jì)使用頻率高的功能?？梢远咳苡诰彌_液的寡核苷酸，單鏈、雙鏈DNA，以及RNA。核酸的高吸收峰的吸收波長260 nm。每種核酸的分子構(gòu)成不一，因此其換算系數(shù)不同。定量不同類型的核酸，事先要選擇對應(yīng)的系數(shù)。如:1OD 的吸光值分別相當(dāng)于50μg/ml的dsDNA，37μg/ml的ssDNA，40μg/ml的RNA，30μg/ml的Olig。測試后的吸光值經(jīng)過上述系數(shù)的換算，從而得出相應(yīng)的樣品濃度。測試前，選擇正確的程序，輸入原液和稀釋液的體積，爾后測試空白液和樣品液。然而，實(shí)驗(yàn)并非一帆風(fēng)順。讀數(shù)不穩(wěn)定可能是實(shí)驗(yàn)者頭痛的問題。靈敏度越高的儀器，表現(xiàn)出的吸光值漂移越大。
事實(shí)上，分光光度計(jì)的設(shè)計(jì)原理和工作原理，允許吸光值在一定范圍內(nèi)變化，即儀器有一定的準(zhǔn)確度和度。如Eppendorf Biophotometer的準(zhǔn)確度≤1.0%(1A)。這樣多次測試的結(jié)果在均值1.0%左右之間變動，都是正常的。另外，還需考慮核酸本身物化性質(zhì)和溶解核酸的緩沖液的pH值，離子濃度等:在測試時(shí)，離子濃度太高，也會導(dǎo)致讀數(shù)漂移如TE，可大大穩(wěn)定讀數(shù)。樣品的稀釋濃度同樣是不可忽視的因素:由于樣品中不可避免存在一些細(xì)小的顆粒，尤其是核酸樣品。這些小顆粒的存在干擾測試效果。為了減少顆粒對測試結(jié)果的影響，要求核酸吸光值至少大于0.1A，吸光值在0.1-1.。在此范圍內(nèi)混合液不能存在氣泡，空白液無懸浮物，否則讀數(shù)漂移劇烈;必須使用相同的比色杯測試空白液和樣品，否則濃度差異太大;換算系數(shù)和樣品濃度單位選擇一致;不能采用窗口磨損的比色杯;樣品的體積必須達(dá)到比色杯要求的小體積等多個操作事項(xiàng)。
除了核酸濃度，分光光度計(jì)同時(shí)顯示幾個非常重要的比值表示樣品的純度，如A260/A280的比值，用于評估樣品的純度，因?yàn)榈鞍椎奈辗迨?80nm。純凈的樣品，比值大于1.8(DNA)或者2.0(RNA)。如果比值低于1.8 或者2.0，表示存在蛋白質(zhì)或者酚類物質(zhì)的影響。A230表示樣品中存在一些污染物，如碳水化合物，多肽，苯酚等，較純凈的核酸A260/A230的比值大于2.0。A320檢測溶液的混濁度和其他干擾因子。純樣品，A320一般是0。
紫外可見分光光度計(jì)屬于光學(xué)儀器的一種，可廣泛應(yīng)用于醫(yī)療衛(wèi)生、化學(xué)化工、環(huán)保、地質(zhì)、機(jī)械、冶金、石油、食品、生物、材料、計(jì)量科學(xué)、農(nóng)業(yè)、林業(yè)、漁業(yè)等領(lǐng)域中的科研、教學(xué)等各個方面，用來進(jìn)行定性分析、純度檢查、結(jié)構(gòu)分析、絡(luò)合物組成及穩(wěn)定常數(shù)的測定、反應(yīng)動力學(xué)研究等?！ 〕醮问褂米贤?span title="可見分光光度計(jì)" target="_blank">可見分光光度計(jì)必須要知道的事：
1、一般來說，一定要詳細(xì)閱讀儀器安全操作手冊，否則嚴(yán)禁操作儀器。準(zhǔn)備操作儀器前，需要先查看一下指針儀器在斷電的情況下，表面指針是否指向零刻度。如若不是，理應(yīng)先調(diào)零然后才能連接電源。在使用的過程中，操作員應(yīng)該盡量避免對鏡燈的觸碰，放大器使用過后，一定需要把檔位歸置到零?！ ?、在操作紫外可見分光光度計(jì)時(shí)，操作人員需要留意一下機(jī)器的干燥劑，因?yàn)檫@是非常重要的。通常情況下，干燥劑有效時(shí)，儀器的工作是不會出現(xiàn)任何問題的?？墒钱?dāng)干燥劑失效之后，所出現(xiàn)的問題是非常嚴(yán)重的。除了儀器上面顯數(shù)不準(zhǔn)之外，很容易使反射鏡變得污穢，從而使得光線率不準(zhǔn)確。因此，日常使用儀器時(shí)，一定要注意干燥是否有效。當(dāng)發(fā)現(xiàn)失效后，要及時(shí)進(jìn)行更換。
原子熒光光度計(jì)利用惰性氣體氬氣作載氣，將氣態(tài)氫化物和過量氫氣與載氣混合后，導(dǎo)入加熱的原子化裝置，氫氣和氬氣在特制火焰裝置中燃燒加熱，氫化物受熱以后迅速分解，被測元素離解為基態(tài)原子蒸氣，其基態(tài)原子的量比單純加熱砷、銻、鉍、錫、硒、碲、鉛、鍺等元素生成的基態(tài)原子高幾個數(shù)量級。
利用原子熒光譜線的波長和強(qiáng)度進(jìn)行物質(zhì)的定性與定量分析的方法。原子蒸氣吸收特征波長的輻射之后，原子激發(fā)到高能級，激發(fā)態(tài)原子接著以輻射方式去活化，由高能級躍遷到較低能級的過程中所發(fā)射的光稱為原子熒光。當(dāng)激發(fā)光源停止照射之后，發(fā)射熒光的過程隨即停止?！≡訜晒饪煞譃?3類：即共振熒光、非共振熒光和敏化熒光，其中以共振原子熒光zui強(qiáng)，在分析中應(yīng)用zui廣。共振熒光是所發(fā)射的熒光和吸收的輻射波長相同。只有當(dāng)基態(tài)是單一態(tài)，不存在中間能級，才能產(chǎn)生共振熒光。非共振熒光是激發(fā)態(tài)原子發(fā)射的熒光波長和吸收的輻射波長不相同。非共振熒光又可分為直躍線熒光、階躍線熒光和反斯托克斯熒光。直躍線熒光是激發(fā)態(tài)原子由高能級躍遷到高于基態(tài)的亞穩(wěn)能級所產(chǎn)生的熒光。階躍線熒光是激發(fā)態(tài)原子先以非輻射方式去活化損失部分能量，回到較低的激發(fā)態(tài)，再以輻射方式去活化躍遷到基態(tài)所發(fā)射的熒光。直躍線和階躍線熒光的波長都是比吸收輻射的波長要長。反斯托克斯熒光的特點(diǎn)是熒光波長比吸收光輻射的波長要短。敏化原子熒光是激發(fā)態(tài)原子通過碰撞將激發(fā)能轉(zhuǎn)移給另一個原子使其激發(fā)，后者再以輻射方式去活化而發(fā)射的熒光。
根據(jù)熒光譜線的波長可以進(jìn)行定性分析。在一定實(shí)驗(yàn)條件下，熒光強(qiáng)度與被測元素的濃度成正比。據(jù)此可以進(jìn)行定量分析。 原子熒光光譜儀分為色散型和非色散型兩類。兩類儀器的結(jié)構(gòu)基本相似，差別在于非色散儀器不用單色器。色散型儀器由輻射光源、單色器、原子化器、檢測器、顯示和記錄裝置組成。輻射光源用來激發(fā)原子使其產(chǎn)生原子熒光?？捎眠B續(xù)光源或銳線光源，常用的連續(xù)光源是氙弧燈，可用的銳線光源有高強(qiáng)度空心陰極燈、無極放電燈及可控溫度梯度原子光譜燈和激光。單色器用來選擇所需要的熒光譜線，排除其他光譜線的干擾。原子化器用來將被測元素轉(zhuǎn)化為原子蒸氣，有火焰、電熱、和電感耦合等離子焰原子化器。檢測器用來檢測光信號，并轉(zhuǎn)換為電信號，常用的檢測器是光電倍增管。顯示和記錄裝置用來顯示和記錄測量結(jié)果，可用電表、數(shù)字表、記錄儀等?！≡訜晒夤庾V分析法具有設(shè)備簡單、靈敏度高、光譜干擾少、工作曲線線性范圍寬、可以進(jìn)行多元素測定等優(yōu)點(diǎn)。在地質(zhì)、冶金、石油、生物醫(yī)學(xué)、地球化學(xué)、材料和環(huán)境科學(xué)等各個領(lǐng)域內(nèi)獲得了廣泛的應(yīng)用。
原子熒光光度計(jì)的日常保養(yǎng)
● 嚴(yán)格遵循開、關(guān)機(jī)程序。
● 觀察管路的密閉性能，如果管路漏液應(yīng)及時(shí)停止轉(zhuǎn)泵，查清漏源再次連接好管路，應(yīng)及時(shí)清除漏液避免液體腐蝕儀器表面。
● 為了自身健康和環(huán)境請你及時(shí)處理廢液。
● 測試完成以后，用去離子水清洗泵管和注射針管，并及時(shí)取下蠕動泵泵管卡，避免泵管長時(shí)間壓制變形而影響其壽命。變形后可用10%鹽酸浸泡48小時(shí)，用去離子水清洗干凈備用。
● 泵管使用一段時(shí)間后，應(yīng)隨時(shí)向泵管與泵頭間的空隙滴加隨機(jī)提供的硅油，以保護(hù)泵管。
● 儀器的表面清潔 儀器的外殼表面經(jīng)過了噴漆、及噴塑工藝的處理，在使用過程中請不要將溶液遺灑在外殼上， 否則會在外殼上留下斑痕， 如果不小心將溶液遺灑在外殼上請立即用濕毛巾擦拭干凈，杜絕使用有機(jī)溶液擦拭。
● 氣液分離器和加熱石英管為石英玻璃件，應(yīng)避免碰撞以免破碎，使用過程中可用10%鹽酸浸泡24小時(shí)來清除雜質(zhì)，用去離子水清洗干凈晾干備用。
● 儀器長期不用時(shí)，需每隔1個月預(yù)熱儀器半小時(shí)左右(在測量狀態(tài)下預(yù)熱才有用)，有助于延長燈及儀器的壽命。
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