超微量分光光度計如何使用,有哪些注意事項?
一:超微量分光光度計是精密光學(xué)儀器,出廠前經(jīng)過精細的裝配和調(diào)試,如果能對儀器進行恰當(dāng)?shù)木S護和保養(yǎng),不僅能保證儀器的可靠性和穩(wěn)定性,也可以延長儀器使用壽命。
二:超微量分光光度計常用于定量溶于緩沖液的寡核苷酸,單鏈、雙鏈DNA,以及RNA。核酸的高吸收峰的吸收波長260 nm。每種核酸的分子構(gòu)成不一,因此其換算系數(shù)不同。定量不同類型的核酸,事先要選擇對應(yīng)的系數(shù)。如:1OD 的吸光值分別相當(dāng)于50μg/ml的dsDNA,37μg/ml的ssDNA,40μg/ml的RNA,30μg/ml的Olig。測試后的吸光值經(jīng)過上述系數(shù)的換算,從而得出相應(yīng)的樣品濃度。
三:超微量分光光度計的工作原理是利用分光光度法對物質(zhì)進行定量定性分析的儀器,常用于核酸,蛋白定量以及細菌生長濃度的定量。無論在物理學(xué)、化學(xué)、生物學(xué)、醫(yī)學(xué)、材料學(xué)、環(huán)境科學(xué)等科學(xué)研究領(lǐng)域 ,還是在化工、醫(yī)藥、環(huán)境檢測、冶金等現(xiàn)代生產(chǎn)與管理部門 ,紫外可見分光光度計督有廣泛而重要的應(yīng)用。
四:超微量分光光度計是精密光學(xué)儀器,正確安裝、使用和保養(yǎng)對保持儀器良好的性能和保證測試的準確度有重要作用。下面分享一些超微量分光光度計不可不知的保養(yǎng)常識。
(1)儀器工作環(huán)境的要求
分光光度計對工作環(huán)境的要求如下。
?、賰x器應(yīng)安放在干燥的房間內(nèi),使用溫度為5~35℃.相對濕度不超過85%。
②儀器應(yīng)放置在堅固平穩(wěn)的工作臺上,且避免強烈的振動或持續(xù)的振動。
?、凼覂?nèi)照明不宜太強,且應(yīng)避免直射日光的照射。
?、茈娚炔灰酥苯酉騼x器吹風(fēng),以防止光源燈因發(fā)光不穩(wěn)定而影響儀器的正常使用。
?、荼M量遠離高強度的磁場、電場及發(fā)生高頻波的電器設(shè)備。
?、薰┙o儀器的電源電壓為AC 220V±22V,頻率為50Hz±1Hz,并必須裝有良好的接地線。推薦使用功率為1000w以上的電子交流穩(wěn)壓器或交流恒壓穩(wěn)壓器,以加強儀器的抗干擾性能。
?、弑苊庠谟辛蚧瘹涞雀g性氣體的場所使用。
(2)儀器的日常維護和保養(yǎng)
?、俟庠础9庠吹膲勖邢?,為了延長光源使用壽命,在不使用儀器時不要開光源燈,應(yīng)盡量減少開關(guān)次數(shù)。在短時問的工作間隔內(nèi)可以不關(guān)燈。剛關(guān)閉的光源燈不能立即重新開啟。儀器連續(xù)使用時間不應(yīng)超過3h。若需長時間使用,好間歇30min。如果光源燈亮度明顯減弱或不穩(wěn)定,應(yīng)及時更換新燈。更換后要調(diào)節(jié)好燈絲位置,不要用手直接接觸窗口或燈泡,避免油污沾附。若不小心接觸過,要用無水乙醇擦拭。
?、趩紊鳌紊魇莾x器的核心部分,裝在密封盒內(nèi),不能拆開。選擇波長應(yīng)平衡地轉(zhuǎn)動,不可用力過猛。為防止色散元件受潮生霉,必須定期更換單色器盒干燥劑(硅膠)。若發(fā)現(xiàn)干燥劑變色,應(yīng)立即更換。
③吸收池。必須正確使用吸收池,應(yīng)特別注意保護吸收池的兩個光學(xué)面。
?、軝z測器。光電轉(zhuǎn)換元件不能長時間曝光,且應(yīng)避免強光照射或受潮積塵。
⑤當(dāng)儀器停止工作時,必須切斷電源。
?、逓榱吮苊鈨x器積灰和沾污,在停止工作時,應(yīng)蓋上防塵罩。
⑦儀器若暫時不用要定期通電,每次不少于20~30min,以保持整機呈干燥狀態(tài),并且維持電子元器件的性能。
分光光度計是利用物質(zhì)對光的選擇性吸收的特性,以較純的單色光作為入射光,測定物質(zhì)對光的吸收,從而對物質(zhì)進行定性或定量分析的儀器。在使用過程中常常會出現(xiàn)測量誤差,這些誤差又是如何產(chǎn)生的呢?下面小編為大家介紹分光光度計測量誤差產(chǎn)生原因。
1、復(fù)色光對比耳定律的偏離
比耳定律成立的前提條件是人射光是單色光,但是精度再高的儀器,即使是雙單色器的分光光度計,也只能獲得近乎單色的光,無法獲得純單色光,它仍然含有狹窄光通帶,具有復(fù)色光的性質(zhì)。而復(fù)色光會導(dǎo)致比耳定律的正或負偏離。
固定狹縫的紫外分光光度計光譜帶寬一般為1nm或2nm,可調(diào)狹縫的可以做到0、1nm;可見分光光度計帶寬6nm、snm,甚至十幾納米。
光譜帶寬應(yīng)該是越小越好,但是,隨著光譜分辨率的提高,儀器的靈敏度降低,所以,選擇儀器時要綜合考慮各種條件的影響。當(dāng)溶液濃度較小且單色光較純時,可近似認為符合比耳定律。
2、雜散光的影響
雜散光是指進人檢測器的處于待測波長光譜帶寬范圍外的其他波長組分,它是光譜測量中誤差的主要來源。
產(chǎn)生原因有:
分光光度計的色散元件、反射鏡、透鏡及單色器內(nèi)壁灰塵等。在分光光度計工作波段邊緣波長處,由于單色器透光率、光源輻射強度、檢測器靈敏度都較低,雜散光的影響更為顯著。
雜散光限制儀器的分析上限可引起嚴重的測量誤差,實際工作中,在定量分析時,一般在吸收峰或其附近處測量樣品吸光度,如果在分析波長處含有雜散光,這時樣品的透光率較小,而雜散光大部分透過,使測量吸光度低于真實吸光度。
3、儀器噪聲對測t的影響
儀器噪聲也是儀器的一個重要指標(biāo),它表征儀器做稀溶液的能力。是疊加在待測量的分析信號中的不需要的信號,掃描100%T和0%T線,可觀察到分光光度計的絕對噪聲水平,如果儀器噪聲較大,會掩蓋較小的測量信號,一般用噪音的二倍來表示儀器的靈敏度。
4、波長和吸光度準確度
樣品的每一個值都是在一定的波長下測得的,如果,波長誤差很大,測出的值肯定不準。吸光度準確度也是用戶對儀器的直接要求,更應(yīng)引起足夠的重視。
國家計量檢定規(guī)程規(guī)定雙光束紫外可見分光光度計透射比準確度為A級士0、6%,B級土1、0%。