原子熒光光度計將樣品溶液中的待分析元素還原為揮發(fā)性共價氣態(tài)氫化物（或原子蒸汽），然后借助載氣將其導(dǎo)入原子化器，在氬—氫火焰中原子化而形成基態(tài)原子。
基態(tài)原子吸收光源的能量而變成激發(fā)態(tài)，激發(fā)態(tài)原子在去活化過程中將吸收的能量以熒光的形式釋放出來，此熒光信號的強弱與樣品中待測元素的含量成線性關(guān)系,因此通過測量熒光強度就可以確定樣品中被測元素的含量。
儀器正常的使用，除了對儀器要足夠了解，也要對儀器維護清潔：
1、嚴(yán)格遵循開、關(guān)機程序。
2、觀察管路的密閉性能，如果管路漏液應(yīng)及時停止轉(zhuǎn)泵，查清漏源再次連接好管路，應(yīng)及時清除漏液避免液體腐蝕儀器表面。
3、為了自身健康和環(huán)境請你及時處理廢液。
4、測試完成以后，用去離子水清洗泵管和注射針管，并及時取下蠕動泵泵管卡，避免泵管長時間壓制變形而影響其壽命。變形后可用10%鹽酸浸泡48小時，用去離子水清洗干凈備用。
5、泵管使用一段時間后，應(yīng)隨時向泵管與泵頭間的空隙滴加隨機提供的硅油，以保護泵管。
6、儀器的表面清潔 儀器的外殼表面經(jīng)過了噴漆、及噴塑工藝的處理，在使用過程中請不要將溶液遺灑在外殼上， 否則會在外殼上留下斑痕， 如果不小心將溶液遺灑在外殼上請立即用濕毛巾擦拭干凈，杜絕使用有機溶液擦拭。
7、儀器長期不用時，需每隔1個月預(yù)熱儀器半小時左右(在測量狀態(tài)下預(yù)熱才有用)，有助于延長燈及儀器的壽命。
8、氣液分離器和加熱石英管為石英玻璃件，應(yīng)避免碰撞以免破碎，使用過程中可用10%鹽酸浸泡24小時來清除雜質(zhì)，用去離子水清洗干凈晾干備用。
除了核酸濃度，分光光度計同時顯示幾個非常重要的比值表示樣品的純度，如A260/A280的比值，用于評估樣品的純度，因為蛋白的吸收峰是280nm。純凈的樣品，比值大于1.8(DNA)或者2.0(RNA)。如果比值低于1.8或者2.0，表示存在蛋白質(zhì)或者酚類物質(zhì)的影響。A230表示樣品中存在一些污染物，如碳水化合物，多肽，苯酚等，較純凈的核酸A260/A230的比值大于2.0。A320檢測溶液的混濁度和其他干擾因子。純樣品，A320一般是0。
蛋白質(zhì)的直接定量(UV法)
這種方法是在280nm波長，直接測試蛋白。選擇Warburg公式，光度計可以直接顯示出樣品的濃度，或者是選擇相應(yīng)的換算方法，將吸光值轉(zhuǎn)換為樣品濃度。蛋白質(zhì)測定過程非常簡單，先測試空白液，然后直接測試蛋白質(zhì)。由于緩沖液中存在一些雜質(zhì)，一般要消除320nm的“背景”信息，設(shè)定此功能“開”。與測試核酸類似，要求A280的吸光值至少大于0.1A，較佳的線性范圍在1.0-1.5之間。實驗中選擇Warburg公式顯示樣品濃度時，發(fā)現(xiàn)讀數(shù)“漂移”。這是一個正常的現(xiàn)象。事實上，只要觀察A280的吸光值的變化范圍不超過1%，表明結(jié)果非常穩(wěn)定。漂移的原因是因為Warburg公式吸光值換算成濃度，乘以一定的系數(shù)，只要吸光值有少許改變，濃度就會被放大，從而顯得結(jié)果很不穩(wěn)定。蛋白質(zhì)直接定量方法，適合測試較純凈、成分相對單一的蛋白質(zhì)。紫外直接定量法相對于比色法來說，速度快，操作簡單;但是容易受到平行物質(zhì)的干擾，如DNA的干擾;另外敏感度低，要求蛋白的濃度較高。
比色法蛋白質(zhì)定量
蛋白質(zhì)通常是多種蛋白質(zhì)的混合物，比色法測定的基礎(chǔ)是蛋白質(zhì)構(gòu)成成分：氨基酸(如酪氨酸，絲氨酸)與外加的顯色基團或者染料反應(yīng)，產(chǎn)生有色物質(zhì)。有色物質(zhì)的濃度與蛋白質(zhì)反應(yīng)的氨基酸數(shù)目直接相關(guān)，從而反應(yīng)蛋白質(zhì)濃度。
一、開機 開機前將樣品室內(nèi)的干燥劑取出，確認(rèn)電源是否連接。打開儀器電源開關(guān)，等待儀器自檢通過，自檢過程中禁止打開樣品室?！ 《?、使用 儀器自檢結(jié)束后(7個自檢項目均出現(xiàn)OK字樣)，按[MAINMENU]鍵(主菜單)，屏幕顯示如下5個功能項： 1、Phtometry(定量運算); 2、WavelengthScan(波長掃描模式); 3、TimeScan(時間曲線掃描); 4、System(系統(tǒng)校正);5、Datadisplay(光度直接測量模式)。按相應(yīng)選項前的數(shù)字鍵，即可進入該選項的下一級子菜單?！ ?、Phtometry(定量運算) 1)按[MAINMENU]鍵，再按數(shù)字[1]鍵進入Phtometry子菜單下，選中對應(yīng)的數(shù)字來選擇所需的測定方式： ?、?T/ABS(透過率/吸光度測定模式); ②Ratio(比例測定模式); ?、跜oncentration(濃度測定模式或標(biāo)準(zhǔn)曲線模式); 2)按數(shù)字[1]鍵進入%T/ABS(透過率/吸光度測定)子菜單，選中對應(yīng)的數(shù)字鍵來設(shè)定測定條件：①NUMWL(設(shè)定測試波長的數(shù)目，較多可設(shè)定6個不同波長); ?、赪LSetting(設(shè)定測試波長具體數(shù)值)③DataMode(選擇測定吸光度或透光率)，設(shè)定完畢后點擊[Enter]鍵確定，所有項目設(shè)定完畢后按數(shù)字[0]鍵確定，等待儀器調(diào)整至準(zhǔn)備狀態(tài)，此時屏幕上出現(xiàn)AUTOZERO，將盛有空白溶液的比色皿放入樣品室中，按[Start/Stop]鍵進行零點的自動調(diào)整，自動調(diào)零完成后，將樣品置于光路中，再按[Start/Stop]鍵進行測量，儀器的顯示屏自動給出對應(yīng)波長的數(shù)值。 3)按數(shù)字[3]鍵進入③Concentration(濃度測定模式或標(biāo)準(zhǔn)曲線模式)，選中對應(yīng)的數(shù)字來設(shè)定條件(波長數(shù)目，波長數(shù)值，標(biāo)準(zhǔn)溶液數(shù)目及濃度)，設(shè)定完畢后點擊[Enter]鍵確定，所有項目設(shè)定完畢后按數(shù)字[0]鍵確定，等待儀器調(diào)整至準(zhǔn)備狀態(tài)，此時屏幕上出現(xiàn)AUTOZERO，將盛有空白溶液的比色皿放入樣品室中，按[Start/Stop]鍵進行零點的自動調(diào)整，自動調(diào)零完成后，將標(biāo)準(zhǔn)溶液置于光路中，按照濃度從低到高順序依次按[Start/Stop]鍵進行測量，測量完畢后儀器將自動給出標(biāo)準(zhǔn)曲線，標(biāo)準(zhǔn)曲線下方有三項供選擇：①Process(更改標(biāo)準(zhǔn)曲線的坐標(biāo)和觀察濃度回歸曲線的數(shù)據(jù));②Measure(直接進入樣品的測量);③Print(打印濃度回歸曲線譜圖和數(shù)據(jù))，選中對應(yīng)的數(shù)字就可執(zhí)行相應(yīng)的功能。 4)如果希望返回上一級菜單，按[CLEARRETURN]鍵返回，返回主菜單直接按[MAINMENU]鍵?！ ?、WavelengthScan(波長掃描模式) 1)參數(shù)修改：按[MAINMENU]鍵，再按數(shù)字[2]鍵進入②WavelengthScan(波長掃描模式)子菜單下，選中對應(yīng)的數(shù)字來選擇所需修改的內(nèi)容，修改掃描的起始波長，測量模式，圖譜坐標(biāo)的上下限，掃描速度等等。修改完畢按數(shù)字[0]鍵確定?！ ?)波長掃描：分別將兩個比色皿裝上空白溶液和樣品溶液，放入比色槽中，按[Start/Stop]鍵進行譜圖掃描(如想終止掃描再次按按[Start/Stop]鍵)，待儀器自動進行基線校正，提示拉入樣品自動測試，測試完畢后有掃描圖譜出現(xiàn)，下方有相應(yīng)的數(shù)據(jù)處理選項①Process②Baseline③Print; 3)數(shù)據(jù)處理：按數(shù)字[1]鍵進入①Process(數(shù)據(jù)處理)，可以讀峰谷值，修改坐標(biāo)，顯示所有數(shù)據(jù)，求一階倒數(shù)等等功能?！ ?、TimeScan(時間曲線掃描) 同上(二)操作。 4、System(系統(tǒng)校正) 一般不做?！ ?、Datadisplay(光度直接測量模式) 同上(二)操作?！ ∪?、關(guān)機 將比色皿中的溶液倒盡，然后用蒸餾水或有機溶劑沖洗比色皿至干凈;關(guān)電源將干燥劑放入樣品室內(nèi)，蓋上防塵罩，做好使用登記，得到管理人員認(rèn)可方可離開。
449717568
