在液相色譜的使用中，我們會發(fā)現(xiàn)很多實驗室會面臨色譜柱頻繁損壞的問題。所以，這次我們就來討論一下色譜柱的預(yù)防措施吧。

影響色譜柱使用的因素

1.流動相pH

不同基質(zhì)的填料具有不同的pH適用范圍。其實，在工作過程中大多數(shù)的顆粒物堵塞導(dǎo)致的色譜柱背壓升高問題是體現(xiàn)在柱頭堵塞。當(dāng)流動相pH超出堿性范圍時，會加速硅膠的溶解而釋放出絮狀物堵塞柱子;當(dāng)流動相pH值超出酸性范圍時，鍵合相易發(fā)生水解而流失，這兩種反應(yīng)均是不可逆反應(yīng)，特別是在溫度較高(>40℃)的環(huán)境下，會使柱效迅速降低而報廢。

而樣品的易吸附機制也可能會和柱前端的硅膠表面游離的硅醇基發(fā)生作用導(dǎo)致色譜柱背壓升高。但是這種情況在較低的PH系統(tǒng)中會有所改善，因為較低的PH系統(tǒng)會降低硅膠表面的硅醇基發(fā)生解離。

2.流動相變質(zhì)

當(dāng)前使用為廣泛的是硅基鍵合相填料，當(dāng)以水溶液作為流動相或流動相中含有一定濃度的磷酸鹽緩沖液時，水溶液中或緩沖鹽溶液中會滋生出一些細菌或霉菌，從而堵塞固定相顆粒間的空隙。特別是對于多元自動比例混合的液相色譜儀來說,水相或緩沖鹽相獨立存貯，因存放時間較長而容易發(fā)生此類問題。

3. 流動相純度

目前，廣泛使用的填料顆粒粒徑范圍在3～10μm,孔徑在6～10nm,色譜柱在使用中會有大量的流動相通過,如流動相含有微量不溶性雜質(zhì)顆粒,則很容易在柱頭部位被截留,久而久之,造成色譜柱機械性堵塞,引起柱壓升高而無法正常使用。

4.其它因素

影響色譜柱壽命的因素很多，除流動相和樣品因素外，還有其它一些外在因素，如，柱壓的影響，溫度的影響，色譜柱的正確沖洗，色譜柱的正確安裝等。

預(yù)防措施

為了降低色譜柱的損傷問題，大家在使用色譜柱時可以做一些預(yù)防。例如：

1在液相系統(tǒng)中加入在線過濾器

在線過濾器的內(nèi)部顆?？障兑话闶?.5微米，對于UHPLC會選擇0.2微米空隙的在線過濾器。這個空隙尺寸和柱頭的過濾篩板尺寸接近或者略小。

所以，在線過濾器能夠有效的阻隔來自樣品、泵頭密封墊、自動進樣器的轉(zhuǎn)子密封墊的顆粒物，以防止柱頭過濾篩板的堵塞。

2在柱子前端使用保護柱

保護柱有很多種，通用型、一體式、卡套式，但是它其實是一個和分析柱固定相相同的10-20mm的小柱子。

因為它具有和分析柱相同的內(nèi)部填料，所以保護柱不僅可以阻隔顆粒物，還可以阻隔易吸附的樣品基質(zhì)組分。

3對樣品進行凈化處理

有一些液相的分析方法沒有明確標(biāo)注樣品的凈化，但希望大家在做分析時都能夠考慮樣品的凈化，常用的方案是對樣品進行過濾。

色譜柱損壞的簡單消除方法

由于化學(xué)損壞多發(fā)于色譜柱的前端，因此把色譜柱的前端修整或切割掉1/2-1 米通常可以消除所有色譜方面的故障。在更為嚴(yán)重的情況下，可能需要切割掉5 米或更長的一段。使用保護柱或保留間隙柱會將對色譜柱的損壞降至小，但是，需要經(jīng)常修整保護柱。酸或堿常常會破壞熔融石英管線的脫活表面，從而引起活性化合物的峰形變壞。

保存

     實驗結(jié)束后，色譜柱的合理保存也是保護色譜柱的關(guān)鍵，同時也是影響色譜柱使用壽命的關(guān)鍵。

1、短期保存

     應(yīng)保存在接近常用的流動相條件下，并且移除系統(tǒng)中的緩沖鹽、酸等。

2、長期保存

     將色譜柱按照說明書保存在對應(yīng)的溶劑中，并且將色譜柱從系統(tǒng)中去下，兩頭用堵頭密封。