據(jù)了解，有的紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)只測(cè)試220nm處的雜散光，不測(cè)試340nm處的雜散光，這樣是不正確的，需測(cè)試220nm處雜散光是因?yàn)椋孩俑鶕?jù)量子光學(xué)理論，波長(zhǎng)是能量的倒數(shù)，波長(zhǎng)短能量大，容易產(chǎn)生雜散光，而220nm處屬于短波部分；②根據(jù)儀器學(xué)理論中的電光源理論，氘燈在220nm處能量很小，即信號(hào)很小，容易顯現(xiàn)雜散光；③根據(jù)儀器學(xué)理論中的光電發(fā)射理論，光電倍增管在220nm處的光譜響應(yīng)(靈敏度)低，容易顯現(xiàn)雜散光。而測(cè)試340nm處雜散光的原因是完全不同的，因?yàn)?40nm處一般是氘燈換鎢燈和儀器調(diào)換濾光片的地方，此時(shí)容易產(chǎn)生雜散光。所以，對(duì)于紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)來(lái)講，應(yīng)該測(cè)試220nm和340nm兩處的雜散光。
紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)雜散光測(cè)試步驟：
1、首先將參比液注入配對(duì)石英石吸收池，分別放置在參比池座和試樣池座內(nèi)。再測(cè)定波段掃描基線并使之平滑。
2、將減光片插入試樣光路的濾光片槽內(nèi)，其讀數(shù)即為減光片的衰減值K，然后將減光片插入?yún)⒈裙饴返臑V光片座內(nèi)，
3、將石英吸收池中的蒸餾水依次換成上述截止濾光液，插入試樣試樣池座中，在相應(yīng)的波段內(nèi)掃描、打?。辉谟涗浖埖淖鳂?biāo)上量取測(cè)定波長(zhǎng)處的透光度，乘以衰減值K，即得各測(cè)定波長(zhǎng)處的雜散光值。
紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)來(lái)自于美國(guó)，產(chǎn)品包含光源，單色器，吸收池，檢測(cè)器和顯 示器等，它是一款對(duì)物質(zhì)進(jìn)行定性，定量以及結(jié)構(gòu)分析的儀器。這款儀器和人們常 用的可見(jiàn)光光度計(jì)有有很大的區(qū)別，除了波長(zhǎng)范圍，使用光源都不一樣等，價(jià)格也 是后者要要貴一些；平時(shí)的使用和注意事項(xiàng)不一樣的，今天就先來(lái)學(xué)習(xí)一下紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)使用方法： 1.試驗(yàn)中所用的量瓶、移液管均應(yīng)經(jīng)檢定校正、洗凈后使用。 2.使用的石英吸收池必須潔凈。用于盛裝樣品、參比及空內(nèi)溶液的吸收池，當(dāng)裝 入同一溶劑時(shí)，在規(guī)定波長(zhǎng)測(cè)定吸收池的透光率，如透光率相差在0.3%以下者可配 對(duì)使用，否則必須加以校正。 3.取吸收池時(shí)，手指拿毛玻璃面的兩側(cè)。裝盛樣品溶液以池休積的4/5為度，使用 揮發(fā)性溶液吋應(yīng)加蓋，透光面要用擦鏡紙由上而下擦拭干凈，檢視應(yīng)無(wú)殘留溶劑。 為防止溶劑揮發(fā)后溶質(zhì)殘留在池子的透光面，可先用蘸有空白溶劑的擦鏡紙擦拭， 然后再用干擦鏡紙拭凈。吸收池放入樣品室時(shí)應(yīng)注意每次放入方向相同。使用后用 洗液及水沖洗干凈，晾干防塵保存，吸收池發(fā)現(xiàn)污染不易洗凈時(shí)可用硫酸發(fā)煙硝酸(3 ：1V/V)混合液稍加浸泡后，洗凈備用。如用重鉻酸鉀清潔液清洗時(shí)，吸收池不貧在 清潔液中長(zhǎng)時(shí)間浸泡，否則清潔液中的重鉻酸鉀結(jié)晶會(huì)損壞吸收池的光學(xué)表面，并 應(yīng)充分甩水沖洗，以防重鉻酸鉀吸附于吸收池表面。 4.測(cè)定前應(yīng)先檢查所用的溶劑在測(cè)定供試品所用的波長(zhǎng)附近是否符合要求，可用 lcm石英吸收池盛溶劑以空氣為空白（即參比光路中不放置任何物質(zhì))測(cè)定其吸收度 ，應(yīng)符合規(guī)定。 5.稱(chēng)量應(yīng)按藥典規(guī)定要求。配制測(cè)定溶液時(shí)稀釋轉(zhuǎn)移次數(shù)應(yīng)盡可能少，轉(zhuǎn)移稀釋 時(shí)所取容積一般應(yīng)不少于5cm。含量測(cè)定供試品應(yīng)稱(chēng)取2份，如為對(duì)照品比較法，對(duì) 照品一般也應(yīng)稱(chēng)取2份。吸收系數(shù)檢查也應(yīng)稱(chēng)取供試品2份，平行操作，每份結(jié)果對(duì) 平均值的偏差應(yīng)在±0.5%以內(nèi)。作鑒別或檢查可取樣品1份。 6.供試品測(cè)定溶液的濃度，除各該品種項(xiàng)下已有注明者外，供試品溶液的吸收度 以在0.3~0.7之間為宜，吸收度讀數(shù)在此范圍誤差較小，并應(yīng)結(jié)合所用儀器吸收度線 性范圍，配制合適的讀數(shù)濃度。 7.選用儀器的狹縫譜帶寬度應(yīng)小于供試品吸收帶的半寬度，否則測(cè)得的吸收度值 會(huì)偏低，狹縫寬度的選擇應(yīng)以減小狹縫寬度吋供試品的吸收度不揮增加為準(zhǔn)，對(duì)于 紫外測(cè)定的部分品種，可以使用2nm縫寬，但對(duì)某些品種如青霉素鉀及鈉的吸收度 檢查則需用lnm縫寬或更窄，否則其264nm的吸收度會(huì)偏低。 8.測(cè)定時(shí)除另有規(guī)定者外，應(yīng)在規(guī)定的吸收峰±2nm處，再測(cè)幾點(diǎn)的吸收度，以核 對(duì)供試品的吸收峰位置是否正確，并以吸收度最大的波長(zhǎng)作為測(cè)定波長(zhǎng)，除另有規(guī) 定外吸收度最大波長(zhǎng)應(yīng)在該品種項(xiàng)下規(guī)定的波長(zhǎng)±lnm以內(nèi)，否則應(yīng)考慮試樣的同一 性、純度以及儀器波長(zhǎng)的準(zhǔn)確度 9.除另有規(guī)定外，比色法所用的空內(nèi)系指用同休積的溶劑代替對(duì)照品或供試品溶 液，然后依次加入等量的相應(yīng)試劑，并用同樣方法處理。 10.當(dāng)吸收度和濃度關(guān)系不呈線性關(guān)系時(shí)，應(yīng)取數(shù)份梯度量的對(duì)照濃度，用溶劑補(bǔ) 充至同一休積，顯色后測(cè)定各份溶液的吸收度，然后以吸收度與相應(yīng)的濃度繪制標(biāo) 準(zhǔn)曲線，再根據(jù)供試品的吸收度在標(biāo)準(zhǔn)曲線上求出其含量。
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