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液相色譜儀注意事項(xiàng)有哪些 液相色譜如何操作

時(shí)間:2020-07-10    來源:儀多多儀器網(wǎng)    作者:儀多多商城     

1、泵正常工作時(shí),在流動相和流速不變的前提下柱壓應(yīng)該是穩(wěn)定的,當(dāng)然在換流動相時(shí)壓力變化是正常的,正常情況下如果柱壓升高基本上都是由色譜柱使用時(shí)間長引起的(只有更換色譜柱),如果正常情況下壓力突然降低有可能是(1)接頭處有漏液的地方,采取的方法是有濾紙檢查,如有漏液的地方用扳手?jǐn)Q緊即可。如果沒有漏液則可能是(2)白色的管子里面有氣泡從而導(dǎo)致流動相進(jìn)不到泵里面去,采取的方法是排氣泡。排氣時(shí):先STOP停泵--打開排氣閥--按PURGE(快沖)鍵--等氣泡排完后先STOP停泵--擰緊排氣閥,其先后步驟不要搞反了。

2、泵正常工作時(shí)zui高壓力不要超過200KG,所以打開泵以后可以將泵的zui大壓力調(diào)到200KG,這樣如果壓力超過上限則會自動報(bào)警停機(jī),流速不用超過1ML/MIN,如果使用時(shí)壓力超過200KG,建議將流速調(diào)低點(diǎn)以降低壓力(在色譜柱正常的情況下),如果是因?yàn)樯V柱長時(shí)間使用造成壓力升高則建議更換色譜柱(因?yàn)樯V柱屬于耗材長時(shí)間使用就需要更換,更換的主要依據(jù)色譜柱出峰不正常或者柱壓力過高)。

3、泵正常工作時(shí)平均每15天左右向注油孔加潤滑油2-3滴。

4、流動相里面如果有鹽或酸類,做完實(shí)驗(yàn)后要先用95%二次蒸餾水與5%甲醇洗色譜柱40分鐘左右,然后用純甲醇洗30分鐘左右才可以關(guān)機(jī)。第二天如果繼續(xù)做實(shí)驗(yàn)流動相里面仍舊有鹽或酸類,先用95%二次蒸餾水與5%甲醇過渡20分鐘,再用流動相。如果流動相里面只有甲醇,水,乙腈,做完實(shí)驗(yàn)后就不用95%二次蒸餾水5%甲醇沖洗,可直接用純甲醇洗30分鐘即可關(guān)機(jī)。

5、C18色譜柱的耐酸PH值范圍3-8使用時(shí)不要超出。

6、儀器長期不用時(shí)一定要將濾頭泡在甲醇里半月開機(jī)一次,如果開機(jī)時(shí)泵抽不上液可以打開排氣閥按PURGE快沖。

7、調(diào)反壓器時(shí)要注意等液體流出來以后才能調(diào),一般調(diào)8--10KG,比如現(xiàn)在泵顯示屏顯示柱壓50KG那再增加10KG顯示屏上顯示柱壓60KG然后擰緊鎖緊螺母。

8、關(guān)機(jī)順序:清洗液路時(shí)可以把檢測器直接關(guān)機(jī),清洗結(jié)束后先按STOP讓泵停止后再關(guān)電源,不允許直接關(guān)機(jī)

流動相脫氣是液相色譜儀提高檢測性能和保護(hù)色譜柱的有效措施。

一、液相色譜儀液相色譜儀流動相脫氣的目的:

1、使色譜泵輸液均勻準(zhǔn)確,減小脈動。

2、提高保留時(shí)間和色譜峰面積的重現(xiàn)性。

3、防止氣泡引起尖峰。

4、使基線穩(wěn)定,提高信噪比。

5、降低溶劑的紫外吸收本底。

6、減少死體積。

7、防止填料氧化。

二、液相色譜儀流動相常用的脫氣方法:

1、吹氦脫氣法:

利用液體中氦氣的溶解度比空氣低的特性,連續(xù)吹氦脫氣,效果較好,適合所有溶劑。但成本高,使用較少。

2、加熱回留法:

脫氣效果比較好,但操作復(fù)雜。

3、超聲波脫氣法:

操作簡單,但脫氣效果不理想。

4、抽真空脫氣法:

利用真空泵降壓至0.05~0.07MPa,可除去溶劑中的氣體。但抽真空會引起混合溶劑組分的變化,從而影響實(shí)驗(yàn)的重現(xiàn)性,多用于單一溶劑體系。

5、在線真空脫氣法:

利用膜滲透技術(shù),在線真空脫氣,智能控制,成本低,脫氣效果明顯優(yōu)于以上幾種方法,并適用于多元溶劑體系。

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  【中國儀器網(wǎng) 使用手冊】色譜柱可分為填充柱和開管柱兩大類。多為金屬或玻璃制作。有直管形、盤管形、U形管等形狀。液相色譜通常均采用填充柱。而對于液相色譜而言,色譜填料的選擇有時(shí)候恰恰決定了樣品分析效果的好快。今天小編就圍繞常見的色譜填料種類,講解一下,應(yīng)該如何針對儀器使用環(huán)境對色譜填料進(jìn)行合適的選擇。
 
  硅膠填料
 
  硅膠填料主要應(yīng)用正相色譜及反相色譜柱中,正相色譜用的固定相通常為硅膠(Silica),以及其他具有極性官能團(tuán),如胺基團(tuán)(NH2,APS)和氰基團(tuán)(CN,CPS)的鍵合相填料。由于硅膠表面的硅羥基(SiOH)或其他團(tuán)的極性較強(qiáng),因此,分離的次序是依據(jù)樣品中的各組份的極性大小,即極性強(qiáng)弱的組份先被沖洗出色譜柱。正相色譜使用的流動相極性相對比固定相低,如:正乙烷(Hexane),氯仿(Chloroform),二氯甲烷(Methylene Chloride)等。反相色譜填料常是以硅膠為基礎(chǔ),表面鍵合有極性相對較弱的官能團(tuán)的鍵合相。反相色譜所使用的流動相極性較強(qiáng),通常為水,緩沖液與甲醇,已腈等混合物。樣品流出色譜柱的順序是極性較強(qiáng)組合先被沖出,而極性弱的組份會在色譜柱上有更強(qiáng)的保留。常用的反相填料有C18(ODS)、C8(MOS)、C4(B)、C6H5(Phenyl)等。
 
  聚合物填料
 
  聚合物調(diào)料多為聚苯乙烯-二乙烯基苯或聚甲基丙酸酯等,其主要優(yōu)點(diǎn)是在PH值為1~14均可使用。相對與硅膠基質(zhì)的C18填料,這類填料具有更強(qiáng)的疏水性;大孔的聚合物填料對蛋白質(zhì)等樣品的分離非常有效。現(xiàn)在的聚合物填料的缺點(diǎn)是相對硅膠基質(zhì)填料,色譜柱柱效較低。
 
  其他無機(jī)填料
 
  其它HPLC的無機(jī)填料色譜柱也已經(jīng)商品化。由于其特殊的性質(zhì),一般于特殊的用途。如石墨化碳也用于正逐漸成為反相色譜填料。這種填料的分離不同與硅膠基質(zhì)烷基鍵合相,石墨化碳的表面即是保留的基礎(chǔ),不再需其它的表面改性,該柱填料一般比烷基鍵合硅膠或多孔聚合物填料的保留能力更強(qiáng),石墨化碳可用于分離某些幾何導(dǎo)構(gòu)體,又由于HPLC流動相中不會被溶解,這類柱可在任何PH與溫度下使用。氧化鋁也可用于HPLC,氧化鋁微粒剛性強(qiáng),可制成穩(wěn)定的色譜柱柱床,其優(yōu)點(diǎn)是可在PH高達(dá)12的流動相中使用。但由于氧化鋁與堿性化合物作用也很強(qiáng),應(yīng)用范圍受到一定的限制,所以未能廣泛應(yīng)用,新型氧化鋯填料也可用于HPLC,商品化的僅有聚合物涂層的多孔氧化鋯微球色譜柱,應(yīng)用PH范圍1~14,溫度可達(dá)100℃。由于氧化鋯填料幾年才開始研究,加之面臨的實(shí)驗(yàn)難度,其重要用途與優(yōu)勢尚在進(jìn)行中。


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