在選擇各種儀器時(shí),都有一定的標(biāo)準(zhǔn),如測(cè)量精度、或者測(cè)量范圍。而在選擇紫外分光光度計(jì)時(shí),我們考慮的是光學(xué)構(gòu)造、光譜范圍、樣品類型和分析工具。
光學(xué)構(gòu)造主要是指紫外分光光度計(jì)給出的光是單光束還是雙光束。
單光束是通過單束光進(jìn)行測(cè)量,在測(cè)量過程中給定波長(zhǎng),然后通過被測(cè)物和對(duì)照物得到吸光結(jié)果。而雙光束是通過一個(gè)斬光輪將光束一分為二。
光源包括紅外線、紫外線和可見光。鎢燈和鹵素?zé)粢话阒桓采w可見光部分(大約380 nm 到800 nm)。而氙燈則可以覆蓋紫外光和可見光區(qū)域。
分光光度計(jì)通常使用光電倍增管和光敏二極管來測(cè)量吸光值。
在大部分的樣品類型中,分光光度計(jì)可接受樣品孔、小玻璃管cuvette、吸漿管和微孔板。
大部分單機(jī)型的分光光度計(jì)包含了驅(qū)動(dòng)儀器運(yùn)行和管理數(shù)據(jù)的軟件。
高性能的儀器,通常與PC機(jī)一起聯(lián)用,需要從制造商提供額外的軟件。同時(shí)用戶也可以選擇升級(jí)軟件以滿足他們的需要。
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目前,紫外可見分光光度計(jì)的應(yīng)用主要是在定量分析方面。先從生命科學(xué)領(lǐng)域的應(yīng)用來介紹。紫外可見分光光度計(jì)在生命科學(xué)中應(yīng)用非常廣泛。最主要的是以下5個(gè)方面。
1.蛋白質(zhì)分析工作中
紫外可見分光光度計(jì)在蛋白質(zhì)的分析中,最主要的是作蛋白質(zhì)含量檢測(cè);一般是在蛋白質(zhì)的吸收峰上作吸光度測(cè)定。因?yàn)榈鞍踪|(zhì)對(duì)紫外光的主要吸收波長(zhǎng)為280nm,所以,采用光度測(cè)量模式,將儀器的波長(zhǎng)GOTO到蛋白質(zhì)的最大吸收峰波長(zhǎng)280nm上,測(cè)試其吸光度大小,就可完成對(duì)蛋白質(zhì)的定量檢測(cè)。
2.核酸分析工作中
紫外可見分光光度計(jì)在核酸分析中的應(yīng)用,主要是用來對(duì)核酸的定量檢測(cè);因?yàn)楹怂岬奈辗逶?60nm。我們只要采用光度測(cè)量模式,將紫外可見分光光度計(jì)的波長(zhǎng)GOTO到核酸的最大吸收峰260nm上,測(cè)試其吸光度大小就是了。
3.氨基酸分析工作中
紫外可見分光光度計(jì)在氨基酸分析中的應(yīng)用,主要是用來對(duì)氨基酸的定量檢測(cè)。因?yàn)榘被釋?duì)紫外光的主要吸收波長(zhǎng)為230nm,所以,我們只要采用光度測(cè)量模式,將紫外可見分光光度計(jì)儀器的波長(zhǎng)GOTO到氨基酸的最大吸收峰230nm上,就可測(cè)試其吸光度大小,從而計(jì)算出氨基酸的含量。但是,因?yàn)榘被岱治鰰r(shí),一般是將它溶解在水中,而水在230nm附近有很多干擾吸收線,所以,在用紫外可見分光光度計(jì)對(duì)氨基酸分析檢測(cè)時(shí),要注意防止干擾的問題。此外,還需注意:只有少數(shù)氨基酸有紫外吸收,多數(shù)氨基酸無紫外吸收或很弱,測(cè)定時(shí)要衍生化后再測(cè)。
4.糖類分析測(cè)試工作中
紫外可見分光光度計(jì)在糖的分析中,主要是作定量檢測(cè)。因?yàn)樘菍?duì)紫外光的主要吸收波長(zhǎng)為218nm,所以,對(duì)糖類進(jìn)行分析時(shí),只要采用光度測(cè)量模式,將紫外可見分光光度計(jì)儀器的波長(zhǎng)GOTO到氨基酸的最大吸收峰218nm上,就可測(cè)試其吸光度大小,從而計(jì)算出糖的含量。
5.多糖分析測(cè)試工作中
紫外可見分光光度計(jì)在多糖的分析中,主要也是作定量檢測(cè)。因?yàn)槎嗵菍?duì)紫外光的主要吸收波長(zhǎng)為206nm,所以,我們只要采用光度測(cè)量模式,將紫外可見分光光度計(jì)儀器的波長(zhǎng)GOTO到多糖的最大吸收峰206nm上,就可測(cè)試其吸光度大小,從而計(jì)算出多糖的含量。
但是多糖的分析難度很大。因?yàn)?在206nm處的時(shí)候,光源(氘燈)的能量已經(jīng)很弱,儀器光學(xué)系統(tǒng)的能量輸出也很低,光電倍增管的靈敏度也很低,206nm左右的干擾也很大。所以,用紫外可見分光光度計(jì)作多糖的分析是很難的事,目前許多科學(xué)家正在研究中。