適用：
利用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法用于食品及飼料中三聚氰胺的定量測(cè)定。
檢測(cè)原理：
酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法定量測(cè)定三聚氰胺殘留。利用萃取液通過(guò)均質(zhì)及振蕩的方式提取樣品中的三聚氰胺進(jìn)行免疫測(cè)定。先將三聚氰胺酶標(biāo)記物，樣品萃取物及標(biāo)準(zhǔn)加入到已經(jīng)包被有三聚氰胺抗體的微孔中開(kāi)始反應(yīng)。在30分鐘的孵育過(guò)程中，樣品萃取物中的三聚氰胺與三聚氰胺酶標(biāo)記物競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合微孔中的三聚氰胺抗體，孵育30分鐘后洗掉小孔中所有沒(méi)有結(jié)合的三聚氰胺及三聚氰胺酶標(biāo)記物。再用去離子水清洗結(jié)束后，每孔中加入清澈的底物溶液，結(jié)合的酶標(biāo)記物將無(wú)色的底物轉(zhuǎn)化為藍(lán)色的物質(zhì)。孵育30分鐘后停止此反應(yīng)，根據(jù)各孔顏色深淺進(jìn)行數(shù)據(jù)讀取。依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)的顏色得出樣品中三聚氰胺的的濃度值。
設(shè)備及材料：
1、具有450nm的酶標(biāo)分析儀
2、8頭或12頭洗板機(jī)(選配)
3、三聚氰胺檢測(cè)試劑盒
4、可吸取50ul的移液器及吸頭及.吸水紙
5、蒸餾水或去離子水
6、 20mM PBS： 0.62g NaH2PO4-2H2O+5.73gNa2HPO4-12H2O+9gNaCl ,蒸餾水定容至1000ml.
7、清洗液：0.62g NaH2PO4-2H2O+5.73gNa2HPO4-12H2O+9gNaCl ,蒸餾水定容至1000ml.+0.5ml 土溫20樣品
飼料前處理：(稀釋倍數(shù)：20)
1、稱1g飼料樣品，加入4ml甲醇；
2、震蕩1min，加入0.1g氯化鈉；
3、4000轉(zhuǎn)離心5min；
4、取上清液0.2ml加入到0.8ml 20mMPBS中，混勻。
5、取150ul測(cè)定。
檢測(cè)：
1、先將三聚氰胺酶標(biāo)記物50ul，樣品150ul及標(biāo)準(zhǔn)150ul加入到已經(jīng)包被有三聚氰胺抗體的微孔中開(kāi)始反應(yīng)。
2、在30分鐘的孵育過(guò)程中，樣品萃取物中的三聚氰胺與三聚氰胺酶標(biāo)記物競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合微孔中的三聚氰胺抗體；
3、孵育30分鐘后用清洗液洗掉小孔中所有沒(méi)有結(jié)合的三聚氰胺及三聚氰胺酶標(biāo)記物。清洗四次后，放在桌上用吸水紙吸掉微孔板里多余的水份；
4、清洗結(jié)束后，每孔中加入100ul清澈的底物溶液，結(jié)合的酶標(biāo)記物將無(wú)色的底物轉(zhuǎn)化為藍(lán)色的物質(zhì)。
5、孵育30分鐘后加入100ul 停止液STOP停止此反應(yīng)，根據(jù)各孔顏色深淺進(jìn)行數(shù)據(jù)讀取。依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)的顏色得出樣品中三聚氰胺的的濃度值
結(jié)果分析：
1、半定量的結(jié)果是由樣品的吸光率與標(biāo)準(zhǔn)的吸光率的簡(jiǎn)單對(duì)比而來(lái)判定：樣品的顏色比標(biāo)準(zhǔn)的顏色淺，則三聚氰胺的濃度比標(biāo)準(zhǔn)樣的濃度高，樣品的顏色比標(biāo)準(zhǔn)的顏色深則三聚氰胺的濃度比標(biāo)準(zhǔn)樣的濃度低。
2、定量分析需要繪制以標(biāo)準(zhǔn)樣的吸光率為X軸,以標(biāo)準(zhǔn)樣的濃度的半對(duì)數(shù)為Y軸的曲線圖。依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)樣。吸光率的點(diǎn)畫成一直線,如此樣品的光吸收率可在線上找到,與此相對(duì)應(yīng)的Y軸則為樣品的濃度,樣品光吸收率。范圍應(yīng)比標(biāo)準(zhǔn)樣的最底范圍高,比最高范圍低, 即可說(shuō)明此樣品中三聚氰胺的含量大于500ppb或小于20ppb。
特點(diǎn)：
本產(chǎn)品為酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法(ELISA)法，靈敏度高、檢測(cè)成本低，可適用于生產(chǎn)及檢驗(yàn)單位大批量快速篩查。
儀器網(wǎng)-專業(yè)分析儀器服務(wù)平臺(tái),實(shí)驗(yàn)室儀器設(shè)備交易網(wǎng),儀器行業(yè)專業(yè)網(wǎng)絡(luò)宣傳媒體。
相關(guān)熱詞：
等離子清洗機(jī),反應(yīng)釜,旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀,高精度溫濕度計(jì),露點(diǎn)儀,高效液相色譜儀價(jià)格,霉菌試驗(yàn)箱,跌落試驗(yàn)臺(tái),離子色譜儀價(jià)格,噪聲計(jì),高壓滅菌器,集菌儀,接地電阻測(cè)試儀型號(hào),柱溫箱,旋渦混合儀,電熱套,場(chǎng)強(qiáng)儀萬(wàn)能材料試驗(yàn)機(jī)價(jià)格,洗瓶機(jī),勻漿機(jī),耐候試驗(yàn)箱,熔融指數(shù)儀,透射電子顯微鏡。
酶標(biāo)儀在臨床實(shí)驗(yàn)方面應(yīng)用廣泛，用于鑒別乙肝兩對(duì)半，HIV，鑒定DNA等許多方面，可以說(shuō)它是臨床及醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)不可或缺的基礎(chǔ)設(shè)備。
故障一：測(cè)量的結(jié)果重現(xiàn)性不好，即使用空板測(cè)量誤差也在允許的范圍之外。
故障分析：檢查試劑發(fā)現(xiàn)沒(méi)有問(wèn)題，檢查判定公式也沒(méi)有問(wèn)題，檢查光路也沒(méi)有污染。幾經(jīng)周折終于發(fā)現(xiàn)卡微板的卡簧在伸縮后沒(méi)有卡到位，造成微板在測(cè)量時(shí)在機(jī)內(nèi)晃動(dòng)影響測(cè)量結(jié)果不準(zhǔn)。
故障二：測(cè)量結(jié)果OD值偏低。
故障分析：排除完燈的能量值偏低后，檢查發(fā)現(xiàn)濾光片上有灰塵，用蒸餾水和擦鏡紙擦洗干凈晾干后故障排除。
測(cè)試方法：酶標(biāo)儀的儀器指標(biāo)在蕞佳狀態(tài)，就儀器的精度測(cè)試和儀器的線性度介紹幾種測(cè)試方法。
精度測(cè)試：該過(guò)程可被用于檢測(cè)不同微板之間的測(cè)量精度。
使用新制備的在0.1％ TWEEN20中的橘黃色甲基填充微孔，在每個(gè)微孔中使用不同稀釋度的溶劑以便獲得一個(gè)光密度范圍，首先確保每孔注入200mL液體，使用492nm慮光片測(cè)量至少3次，對(duì)每一微孔進(jìn)行下列計(jì)算：
(1)平均OD值；(2)蕞高和蕞低值；(3)平均值。蕞高和蕞低值之間的差值和百分比。讀數(shù)范圍在0．000到2．000Abs。同一孔平均值，蕞高值和蕞低值之間的差值應(yīng)該在+／一1．0％和+／一0．010OD范圍內(nèi)。
讀數(shù)范圍在2．000到3．000Abs同一孔平均值，蕞高和蕞低值之間的差值應(yīng)在+／一1．0％ 和+／一0．005OD值范圍內(nèi)。讀數(shù)范圍在3．000Abs以上時(shí)準(zhǔn)確度不符合要求。
酶標(biāo)儀儀器線性度：儀器的線性度可使用一種溶劑的稀釋系列得到。如可在492 nIn處測(cè)量在0．1％TWEEN20中的橘黃色甲基的稀釋系列。
具體方法如下：在參考光密度計(jì)上測(cè)量被稀釋的溶劑，畫出OD值對(duì)已知濃度的點(diǎn)圖，并畫出通過(guò)這些點(diǎn)的蕞好的直線。將從系列稀釋中測(cè)得的吸光度值與該圖比較從而計(jì)算出各稀釋度的濃度。微板中每種稀釋度加入250t,-L，對(duì)每種稀釋至少使用兩個(gè)樣本，以便降低因加樣引起的誤差。 測(cè)量微板使用精確測(cè)量模式，利用測(cè)量得到的平均OD值和每個(gè)樣本的已知濃度畫一條OD濃度的曲線，從系列稀釋中測(cè)得的吸光值與該曲線比較從而計(jì)算出各稀釋度的濃度。
對(duì)光度記和本儀器，比較計(jì)算的濃度，不準(zhǔn)確度不應(yīng)大于以下，使用標(biāo)準(zhǔn)濾光片492nm時(shí)吸光度在0．000～2．000Abs+／一1％、2．000～3．000Abs+／一1．5％。使用梯度濾光片492nm時(shí)，吸光度在0．000～2．500Abs+／一2％。
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