在日常分離分析工作中，色譜柱的正確使用和維護(hù)十分重要，色譜柱使用是否得當(dāng)，直接影響色譜柱的壽命，在色譜操作過(guò)程中，需要注意下列問(wèn)題，以維護(hù)色譜柱。

    1、柱子在裝卸、更換時(shí)，動(dòng)作要輕，接頭擰緊要適度。必須防止較強(qiáng)的機(jī)械振動(dòng)，以免柱床產(chǎn)生空隙。

    2、如果儀器用來(lái)做常規(guī)分析，樣品種類有限，但分析次數(shù)多，則不妨為每一類常規(guī)分析配置一根專用柱，這樣有助于延長(zhǎng)柱子的壽命。

    3、避免壓力和溫度的急劇變化及任何機(jī)械震動(dòng)。溫度的突然變化或者使色譜柱從高處掉下都會(huì)影響柱內(nèi)的填充狀況;柱壓的突然升高或降低也會(huì)沖動(dòng)柱內(nèi)填料，因此在調(diào)節(jié)流速時(shí)應(yīng)該緩慢進(jìn)行，在閥進(jìn)樣時(shí)閥的轉(zhuǎn)動(dòng)不能過(guò)緩。

    4、應(yīng)逐漸改變?nèi)軇┑慕M成，特別是反相色譜中，不應(yīng)直接從有機(jī)溶劑改變?yōu)槿渴撬粗嗳弧?/p>

    5、如使用柱溫控制裝置時(shí)，應(yīng)注意在通人流動(dòng)相后才能升溫。

    6、一般說(shuō)來(lái)色譜柱不能反沖，只有生產(chǎn)者指明該柱可以反沖時(shí)，才可以反沖除去留在柱頭的雜質(zhì)。否則反沖會(huì)迅速降低柱效。

    7、選擇使用適宜的流動(dòng)相，以避免固定相被破壞。有時(shí)可以在進(jìn)樣器前面連接一個(gè)預(yù)柱，分析柱是鍵合硅膠時(shí)，預(yù)柱為硅膠，可使流動(dòng)相在進(jìn)入分析柱之前預(yù)先被硅膠“飽和”，避免分析柱中的硅膠基質(zhì)被溶解。

    8、避免將基質(zhì)復(fù)雜的樣品尤其是生物樣品直接注人柱內(nèi)，需要對(duì)樣品進(jìn)行預(yù)處理或者在進(jìn)樣器和色譜柱之間連接一個(gè)保護(hù)柱。保護(hù)柱一般是填有相似固定相的短柱。保護(hù)柱可以而且應(yīng)該經(jīng)常更換。

    9、 經(jīng)常用強(qiáng)溶劑沖洗色譜柱，清除保留在柱內(nèi)的雜質(zhì)。在進(jìn)行清洗時(shí)，對(duì)流路系統(tǒng)中流動(dòng)相的置換應(yīng)以相混溶的溶劑逐漸過(guò)渡，每種流動(dòng)相的體積應(yīng)是柱體積的20倍左右，即常規(guī)分析需要50-75mL。

    10、保存色譜柱時(shí)應(yīng)將柱內(nèi)充滿乙腈或甲醇，柱接頭要擰緊，防止溶劑揮發(fā)干燥。絕對(duì)禁止將緩沖溶液留在柱內(nèi)靜置過(guò)夜或更長(zhǎng)時(shí)間。

    11、色譜柱使用過(guò)程中，如果壓力升高，一種可能是燒結(jié)濾片被堵塞，這時(shí)應(yīng)更換濾片或?qū)⑵淙〕鲞M(jìn)行清洗;另一種可能是大分子進(jìn)人柱內(nèi)，使柱頭被污染;如果柱效降低或色譜峰變形，則可能柱頭出現(xiàn)塌陷，死體積增大。

    12、在完成分離分析工作之后，不應(yīng)立即停機(jī)，需及時(shí)對(duì)色譜分析系統(tǒng)進(jìn)行沖洗，一般0.5h以上，以除去色譜柱內(nèi)的雜質(zhì)。

    當(dāng)色譜柱使用一段時(shí)間以后，柱內(nèi)由于各種原因，滯留了一些高沸點(diǎn)組分或氧化物等，除柱效有所下降外，還可能出現(xiàn)基線波動(dòng)或“鬼峰”。為了去除污染物，使柱效和基線恢復(fù)到原來(lái)的狀態(tài)，稱為色譜柱的再生。色譜柱的再生和柱老化有一定區(qū)別和不同，它是柱在使用一段時(shí)間柱性能下降，經(jīng)處理后盡量恢復(fù)到原來(lái)性能的過(guò)程。
    A、色譜柱在以下幾種情況必須再生處理
    a.使一段時(shí)間，柱效明顯下降；
    b.柱被污染，特別是在程序升溫時(shí)，基線漂移和噪聲超過(guò)容忍程度或出現(xiàn)“鬼峰”；
    c.柱頭塌陷，柱床短路或斷位(在玻璃柱中容易發(fā)現(xiàn))，而出現(xiàn)尖峰或雙重峰；
    d.峰形展寬，保留時(shí)間明顯變化；
    e.待分離組分和固定相表面非特異性相互作用，引起保留時(shí)間較短的峰拖尾或出現(xiàn)雙峰；
    B、毛細(xì)管柱再生的幾種方法
    a.用載氣將色譜柱污染物沖洗出來(lái)；
    b.將柱頭截去100mm 或更長(zhǎng)一些；
    c.若使用交聯(lián)的色譜柱，可在儀器上反復(fù)注射溶劑進(jìn)行沖洗。常用的溶劑依次為丙酮、甲苯、乙醇、氯仿和二氯甲烷，每次可進(jìn)樣5～10μL；
    d.交聯(lián)柱在儀器上沖洗無(wú)效時(shí)，可把柱拆下來(lái)用二氯甲烷或氯仿沖洗，溶劑用量視柱的污染程度而定，一般20mL 左右。
    C、色譜柱再生前應(yīng)注意的問(wèn)題
    當(dāng)分析出現(xiàn)問(wèn)題時(shí)，不能只考慮是柱問(wèn)題，而馬上進(jìn)行再生。除上述情況外，還應(yīng)考慮樣品處理、進(jìn)樣技術(shù)、操作有無(wú)失誤、數(shù)據(jù)處理參數(shù)有無(wú)改變等可能帶來(lái)的問(wèn)題。
    a.襯管、預(yù)柱和檢測(cè)器被污染也會(huì)引起基線不穩(wěn)定、出現(xiàn)“鬼峰”或裂解峰；
    b.新的注射墊也會(huì)引起基線漂移和出現(xiàn)“鬼峰”；
    c.襯管密封欠佳、柱安裝死體積或檢測(cè)器固有特性也會(huì)引起較早出現(xiàn)峰的拖尾；
    d.分析系統(tǒng)發(fā)生變化(如漏氣嚴(yán)重)也可能使保留時(shí)間突變；
    e.峰變寬，除柱效下降外也可能由柱外效應(yīng)引起；
    f.進(jìn)樣量太大也會(huì)引起峰變寬、拖尾或保留時(shí)間變短；
    g.色譜柱長(zhǎng)時(shí)間樣品過(guò)載，保留時(shí)間也會(huì)變小等。
    D、色譜柱再生時(shí)應(yīng)注意的幾個(gè)問(wèn)題
    1.如前所述和色譜柱老化一樣，不是溫度越高越好，時(shí)間越長(zhǎng)越好；建議不要使用長(zhǎng)時(shí)間烘烤的方法，來(lái)處理受到污染的色譜柱，因?yàn)楹婵緯r(shí)，溫度會(huì)把污染的殘留物變成不能溶解的物質(zhì)，再用溶劑清洗也無(wú)濟(jì)于事；
    2.儀器在高靈敏度操作時(shí)，如：量程在1×10-11A/mV以下，痕量分析程序升溫過(guò)程中，溫度升到大于180℃后，基線明顯漂移是不可避免的；
    3.不同類型柱子，再生方法不同；
    4.樣品種類、組分、進(jìn)樣量不同或操作時(shí)間長(zhǎng)短不同，再生方法也不同；
    5.儀器本身?xiàng)l件如：氣源種類、純度、凈化條件、進(jìn)樣口結(jié)構(gòu)和操作檢測(cè)器不同，再生柱方法也有區(qū)別；
    6.高分子量組分污染色譜柱后，高溫再生時(shí)間長(zhǎng)會(huì)導(dǎo)致固定相的老化；使用交聯(lián)或鍵合柱可以用溶劑漂洗再生，漂洗溶劑流動(dòng)方向一定要從柱出口注入。應(yīng)該注意，毛細(xì)管柱交聯(lián)鍵合率通常不到90%，因此會(huì)漂洗掉未化學(xué)結(jié)合的液相部分，所以保留時(shí)間和分離狀態(tài)會(huì)有所變化；
    7.對(duì)于難揮發(fā)物，碳化物是不能通過(guò)再生除去，對(duì)于填充柱可以使用帶襯管氣化室進(jìn)樣器，對(duì)于毛細(xì)管可通過(guò)把柱入口切去30～50cm的方法除去污物段。有條件的可以使用預(yù)柱，把不揮發(fā)的有機(jī)物、無(wú)機(jī)物和顆粒材料阻留在預(yù)柱中，需要時(shí)更換預(yù)柱；
    8.在某些情況下，色譜柱要在溫度極限附近使用，這時(shí)基線漂移和大噪聲已不可避免，柱的再生要求只能視情況而定；
    9.不是所有色譜柱通過(guò)再生均能恢復(fù)原來(lái)性能。