液相色譜儀根據(jù)固定相是液體或是固體，又分為液-液色譜(LLC）及液-固色譜(LSC）。現(xiàn)代液相色譜儀由高壓輸液泵、進樣系統(tǒng)、溫度控制系統(tǒng)、色譜柱、檢測器、信號記錄系統(tǒng)等部分組成。與經(jīng)典液相柱色譜裝置比較，具有高效、快速、靈敏等特點。
第一、液相色譜儀操作步驟：
1、打開電腦；
2、打開主機、預熱；
3、進入儀器工作站，聯(lián)機并設定儀器使用方法及儀器參數(shù)；
4、啟動泵的動力系統(tǒng)預處理(排氣等)；
5、檢查是否漏夜、柱壓是否正常；
6、設置儀器方法，包括儀器的使用條件等；
7、激活操作方法，等待儀器平衡、基線平直；
8、儀器出現(xiàn)“Ready”后可進行樣品分析；
9、操作測試結(jié)束后，清理所有實驗材料，做好清潔衛(wèi)生；
10、記錄儀器使用日志，并與管理員辦理交接手續(xù)。
第二、液相色譜儀注意事項：
1、高效液相色譜的流動相應采用色譜純?nèi)軇詽M足儀器要求、避免損壞色譜柱;
2、嚴禁使用有污染的水等沖洗色譜柱，避免將互不相溶的溶劑一同進入泵內(nèi);
3、流動相需經(jīng)過濾、除氣后方可使用;
4、待分析的樣品必須徹底溶解澄清、過濾，以避免堵塞、損壞色譜柱;
5、分析完成后，須注意及時清洗色譜柱和檢測器的比色池。
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在我們常規(guī)思維中，色譜柱上標示的流向是不可改變的，每次使用都要遵循。可是，大家有沒有想過這個方向的作用是什么呢？為什么要標示一個使用方向呢？
其實色譜柱前后端的填料及填裝工藝都是一樣的，標示方向的目的就是讓我們在使用中記住流動相從哪個方向流入色譜柱，那么這個流入段就是最先污染端。這樣就為我們?nèi)蘸缶S護或再生色譜柱做了準備，而我們需要遵循這個規(guī)定應該在色譜柱開始做樣后。
我曾將已經(jīng)污染過的色譜柱反方向來使用，如果保留時間不是很長，而色譜柱足夠長，還是能使用一段時間的。
2.不去看說明書，直接就上機使用
色譜柱內(nèi)部保存著什么溶劑一定要看清楚，因此色譜柱的說明書一定要看清楚，當然也包括說明書上建議的維護保養(yǎng)規(guī)定，對我們都非常的有用。對于反相柱來說，溶劑基本就是乙腈或甲醇。但正相柱就不同了，因為正相柱除了可以適用正相系統(tǒng)，也可以適用反相系統(tǒng)，因此一定要看清楚，對于你的方法來說是否需要置換色譜柱內(nèi)部保存溶劑。
3.用純水沖洗色譜柱才能把緩沖液沖洗干凈
使用強溶劑沖洗色譜柱對內(nèi)部填料的損傷是最大的，尤其是純水，除非你的色譜柱是耐水的。沖洗色譜柱可以的方法是用流動相比例的水系和有機系來沖洗。如果你認為流動相比例無法把色譜柱沖洗干凈或者此比例中有機系占有比例過大，你可以使用內(nèi)含10%左右的純水來沖洗。
4.保存在乙腈或甲醇中的新色譜柱可以直接使用
理論上液相色譜柱不同于氣相色譜柱需要活化，但是由于液相色譜柱內(nèi)部保存的有機系具有揮發(fā)性，因此在使用前還是應該用小流速的和色譜柱內(nèi)部相同的溶劑沖洗一定的時間。可以是0.5ml/min，120min，但可以咨詢廠家，根據(jù)色譜柱參數(shù)設定。
5.色譜柱應該保存在純乙腈或甲醇中
根據(jù)第4條，色譜柱內(nèi)部保存液具有揮發(fā)性，因此為了減少其揮發(fā)速度，可以添加5%-10%的水，這樣的話可以在一定程度上減少一些有機系的揮發(fā)。如果再增加一個保險，我們可以在堵緊堵頭后，再用封口膜封起來。同樣道理，色譜柱一段時間不用后，也應該按照第4條，進行小流速的沖洗色譜柱。
6.色譜柱污染后把篩板卸下來超聲清洗
對于色譜柱的污染，首當其沖的就是篩板，因此我們常用的做法就是把柱頭卸下來，把篩板拿去超聲清洗。但是我們在拆卸過程中對色譜柱前端填料的損害遠遠大于污染照成的傷害，因為我們不是專業(yè)的。因此建議這一步能不做就不做。
7.自己填裝色譜柱
和第6條相同，這一步做法幾乎可以把此色譜柱判死刑了，我們的填裝工具有什么呢？就是手工的，其填裝壓力遠遠小于工廠內(nèi)原始的填裝壓力。那么我們填裝的結(jié)果會是個什么樣也就很明顯了。
在我看來，自己填裝也就是練練手，熟悉一下這個過程，要把色譜柱維修好的可能性幾乎為零。
8.用異丙醇沖洗再生后，柱子效果更差了
這種情況我自己就遇到過，還好那根柱子本來就打算報廢了，因此也沒有照成多少損失。但是這是什么原因呢？其實很簡單，就是在我反向沖洗前沒有把管路中的污染物沖洗干凈就直接接了柱子。所以說，方法是沒有錯的，色譜柱受污染時，我們應該先想到儀器也污染了！
下面就一一介紹下液相色譜使用中的幾個重要環(huán)節(jié)吧。
實驗前的準備工作
1. 過濾流動相。為了保證流動相潔凈，流動相使用前都必須微膜過濾。
2. 流動相脫氣。為了避免流動相中氣泡對儀器（氣泡可能會對儀器及相關(guān)設備的正常使用及壽命產(chǎn)生一定影響）及分析結(jié)果的影響。
3. 運行液相泵前盡量先清洗泵柱塞部件。清洗液一般采用10%甲醇溶液，也有采用10%異丙醇溶液（5%甲醇或異丙醇等有機相溶液能避免微生物污染，但濃度不能太高，高于20%緩沖液可能會導致鹽結(jié)晶析出，碰到酸堿類物質(zhì)可能會有比較強烈的反應；另外異丙醇粘度較大，清洗能力較強；也有采用純水清洗的，這樣如果儀器每天使用還行，如果長期不用，為了防止微生物繁殖，純水還得用含有有機相的清洗液置換出去）沖洗，這是為了保護泵柱塞和密封圈等部件在泵運行時不被結(jié)晶鹽等磨損而導致泵頭漏液。
4. 每天運行儀器前先排氣。一般的液相色譜儀都有排氣功能，沒有的可以不接色譜柱開機運行幾分鐘排氣。
5. 泵運行時盡量不采用大流量模式（主要是換流動相或排氣泡等，流量盡量設為3.0ml/min以內(nèi)，這樣更有利于保護泵柱塞桿和密封圈等部件的壽命）。
6. 分析前先對色譜系統(tǒng)（整個流路）進行沖洗及平衡，尤其是色譜柱。先用純甲醇沖洗30分鐘，再換10%甲醇水溶液沖洗30分鐘，后換含緩沖鹽或酸堿類物質(zhì)的流動相平衡30分鐘。色譜柱如果長期沒用，每一步?jīng)_洗、平衡量盡量為色譜柱柱容量20倍以上）。如果流動相中不含緩沖鹽或酸堿類物質(zhì)，純甲醇沖洗完可直接換為流動相。使用色譜柱前知道或懷疑色譜柱中殘留有或酸堿鹽類物質(zhì)，在用純甲醇沖洗前增加一步10%甲醇水溶液沖洗。
7. 如果色譜柱需要控溫（升溫），要先運行泵后再設柱溫箱溫度。
8. 待儀器運行穩(wěn)定后（基線基本走平后，這個是經(jīng)驗值），方可進樣。
樣品前處理
1.樣品濃度不要太大，雜質(zhì)不要太多，否則色譜柱處理起來壓力很大。
2.進樣前樣品一定得先經(jīng)微膜（一般采用0.22um或0.45um微膜）過濾。
實驗過程中注意事項
1.為了避免進樣器殘留影響，進樣前先對進樣器進行清洗（這個不是必須的，但盡量是每進一針樣品或標準品前都清洗進樣器和進樣針，當然同一樣品也可以不洗，不同樣品盡量洗），清洗順序為純水、甲醇、流動相。
2.每進一針樣品后要對系統(tǒng)進行一次沖洗、平衡后再進下一針樣品（等度要求不高，梯度要求相對高，主要是沖洗色譜柱中殘留的強保留物質(zhì)）。
實驗完畢的后續(xù)工作
1.做完樣要先清洗進樣器，清洗順序為純水、甲醇。
2.關(guān)閉柱溫箱溫度設置。
3.沖洗色譜系統(tǒng)及色譜柱。先用10%甲醇水溶液沖洗30分鐘后換為純甲醇沖洗30分鐘，待基線基本走平停泵。如果流動相中不含緩沖鹽或酸堿類物質(zhì)，沖洗時流動相可直接換為純甲醇。色譜柱用完后如果長時間內(nèi)不會再用，純甲醇沖洗量要大于色譜柱柱容量20倍以上的，沖洗后卸下，兩端密封保存。
4.待色譜柱溫度降至接近于室溫時再停泵、關(guān)機（這一點需特別注意，目的是防止溫度過高損壞色譜柱）。
5.關(guān)機前用清洗液清洗柱塞桿。
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