分光光度計采用一個可以產(chǎn)生多個波長的光源，通過系列分光裝置，從而產(chǎn)生特定波長的光源，光源透過測試的樣品后，部分光源被吸收，計算樣品的吸光值，從而轉(zhuǎn)化成樣品的濃度。樣品的吸光值與樣品的濃度成正比。常用于核酸，蛋白定量以及細菌生長濃度的定量。
操作方法：
接通電源，打開儀器開關(guān)，掀開樣品室暗箱蓋，預(yù)熱 10 分鐘。
將靈敏度開關(guān)調(diào)至“1”檔(若零點調(diào)節(jié)器調(diào)不到“0”時，需選用較高檔。
根據(jù)所需波長轉(zhuǎn)動波長選擇鈕。
將空白液及測定液分別倒入比色杯 3/4 處，用擦鏡紙擦清外壁，放入樣品室內(nèi)，使空白管對準(zhǔn)光路。
在暗箱蓋開啟狀態(tài)下調(diào)節(jié)零點調(diào)節(jié)器，使讀數(shù)盤指針指向 t=0 處。
蓋上暗箱蓋，調(diào)節(jié)“100”調(diào)節(jié)器，使空白管的 t=100，指針穩(wěn)定后逐步拉出樣品滑竿，分別讀出測定管的光密度值，并記錄。
比色完畢，關(guān)上電源，取出比色皿洗凈，樣品室用軟布或軟紙擦凈。
三大注意事項：
分光光度計應(yīng)放在干燥的房間內(nèi)，使用時放置在堅固平穩(wěn)的工作臺上，室內(nèi)照明不宜太強。熱天時不能用電扇直接向儀器吹風(fēng)，防止燈泡燈絲發(fā)亮不穩(wěn)定。
分光光度計使用前，使用者應(yīng)該首先了解本儀器的結(jié)構(gòu)和工作原理，以及各個操縱旋鈕之功能。在未按通電源之前，應(yīng)該對儀器的安全性能進行檢查，電源接線應(yīng)牢固，通電也要良好，各個調(diào)節(jié)旋鈕的起始位置應(yīng)該正確，然后再按通電源開關(guān)。
分光光度計在儀器尚未接通電源時，電表指針必須于“0”刻線上，若不是這種情況，則可以用電表上的校正螺絲進行調(diào)節(jié)。
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分光光度計中zui簡單的和應(yīng)用zui普遍的一種。它的特點是只有一條光束。通過交換參比和樣品的位置，使其分別進入光路。在參比（溶劑）進入光路時，調(diào)零。然后將樣品進入光路的信號和參比信號進行比較，就可在顯示器上讀出樣品的透過率和吸光度。
分光光度計的保養(yǎng)方法
1.若大幅度改變測試波長，需稍等片刻，等燈熱平衡后，重新校正“0”和“100%”點。然后再測量。
2.指針式儀器在未接通電源時，電表的指針必須位于零刻度上。若不是這種情況，需進行機械調(diào)零。
3.比色皿使用完畢后，請立即用蒸餾水沖洗干凈，并用干凈柔軟的紗布將水跡擦去，以防止表面光潔度被破壞，影響比色皿的透光率。
4.操作人員不應(yīng)輕易動燈泡及反光鏡燈，以免影響光效率。
5.1900型等分光光度計，由于其光電接收裝置為光電倍增管，它本身的特點是放大倍數(shù)大，因而可以用于檢測微弱光電信號，而不能用來檢測強光。否則容易產(chǎn)生信號漂移，靈敏度下降。
針對其上述特點，在維修、使用此類儀器時應(yīng)注意不讓光電倍增管長時間暴露于光下，因此在預(yù)熱時，應(yīng)打開比色皿蓋或使用擋光桿，避免長時間照射使其性能漂移而導(dǎo)致工作不穩(wěn)。
6.放大器靈敏度換擋后，必須重新調(diào)零。
7.比色杯的配套性問題。比色杯必須配套使用，否則將使測試結(jié)果失去意義。在進行每次測試前均應(yīng)進行比較。
具體方法如下;分別向被測的兩只杯子里注入同樣的溶液，把儀器置于某一波長處，石英比色杯;220nm、700nm裝蒸餾水，玻璃比色杯：700nm處裝蒸餾水，將某一個池的透射比值調(diào)至100%，測量其他各池的透射比值，記錄其示值之差及通光方向，如透射比之差在±0.5%的范圍內(nèi)則可以配套使用，若超出此范圍應(yīng)考慮其對測試結(jié)果的影響。
分光光度計由于在每個波長都需要變換參比和樣品的位置，所以只能手動，不能掃描吸收光譜。它的結(jié)構(gòu)比較簡單，使用也有一定限制，但如配置程序控制和打印裝置，則對一些常規(guī)的定量測定還是比較適用的。
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