液相色譜儀根據(jù)固定相是液體或是固體，又分為液-液色譜(LLC）及液-固色譜(LSC）?，F(xiàn)代液相色譜儀由高壓輸液泵、進(jìn)樣系統(tǒng)、溫度控制系統(tǒng)、色譜柱、檢測(cè)器、信號(hào)記錄系統(tǒng)等部分組成。與經(jīng)典液相柱色譜裝置比較，具有高效、快速、靈敏等特點(diǎn)。
液相色譜儀操作步驟：
1. 首先對(duì)流動(dòng)相進(jìn)行過濾，根據(jù)需要選擇不同的濾膜，一般為有機(jī)系和水系，常用的孔徑為0.20um和0.45um。
2. 對(duì)抽濾后的流動(dòng)相進(jìn)行超聲脫氣10-20分鐘。
3. 正常情況下，儀器首先用甲醇沖洗10-20分鐘，然后再進(jìn)入測(cè)試用流動(dòng)相(如流動(dòng)相為緩沖試劑，則要二次重蒸水沖洗10-20分鐘，直至色譜柱中有機(jī)相沖凈為止) 。
4. 一般情況下，流動(dòng)相沖洗20-30分鐘后，儀器方可穩(wěn)定，重要的是儀器基線走后，方可進(jìn)樣測(cè)試。
5. 同時(shí)進(jìn)兩針標(biāo)樣，將其結(jié)果相比較，其結(jié)果的比值在0.98-1.02之間后，就可以正式進(jìn)行樣品的測(cè)試了。
6. 樣品測(cè)試結(jié)束后，就要進(jìn)行色譜儀及色譜柱的清洗和維護(hù)。如流動(dòng)相為緩沖試劑，同樣也要用重蒸水清洗10-20分鐘，方可用有機(jī)相進(jìn)行保護(hù)，否則，有損色譜柱。
7). 關(guān)機(jī)時(shí)，先關(guān)計(jì)算機(jī)，再關(guān)液相色譜。
液相色譜注意事項(xiàng)：
1. 流動(dòng)相均需色譜純度，水用20M的去離子水。脫氣后的流動(dòng)相要小心振動(dòng)盡量不引起氣泡。
2. 柱子是非常脆弱的，第一次做的方法，先不要讓液體過柱子。
3. 所有過柱子的液體均需嚴(yán)格的過濾。
4. 壓力不能太大，可以不要超過150kgf/cm2 .
5. 因?yàn)榫彌_試劑遇有機(jī)溶劑，會(huì)結(jié)晶，有損色譜柱，所以，每次由有機(jī)相變流動(dòng)相或流動(dòng)相變有機(jī)相均需用蒸餾水清洗。
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高效液相色譜儀是實(shí)驗(yàn)中常見的儀器之一，色譜柱的靈敏度是確保實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)確性的重要原因，那么當(dāng)色譜柱的靈敏度不夠時(shí)，我們?cè)撊绾稳ソ鉀Q呢？應(yīng)該從以下幾個(gè)方面去分析：
1、樣品量不足：解決辦法為增加樣品量
2、樣品未從柱子中流出：可根據(jù)樣品的化學(xué)性質(zhì)改變流動(dòng)相或柱子
3、樣品與檢測(cè)器不匹配：根據(jù)樣品化學(xué)性質(zhì)調(diào)整波長(zhǎng)或改換檢測(cè)器
4、檢測(cè)器衰減太多：調(diào)整衰減即可。
5、檢測(cè)器時(shí)間常數(shù)太大：解決辦法為降低時(shí)間參數(shù)
6、檢測(cè)器池窗污染：解決辦法為清洗池窗。
7、檢測(cè)池中有氣泡：解決辦法為排氣。
8、記錄儀測(cè)壓范圍不當(dāng)：調(diào)整電壓范圍即可。
9、流動(dòng)相流量不合適：調(diào)整流速即可。
10、檢測(cè)器與記錄儀超出校正曲線：解決辦法為檢查記錄儀與檢測(cè)器，重作校正曲線。
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