由于GPC/SEC的分離機理是按照分子尺寸的大小進行分離的，不考慮溶質和載體之間的吸附效應，也不考慮溶質在流動相和固定相之間的分配效應，其淋出體積（自試樣進柱到被淋洗出來所接收到的淋洗液總體積）僅由溶質分子尺寸和載體的孔洞尺寸決定，與分子量只是間接的關系。不同的高分子，雖然分子量相同，但分子體積并不一定相同。例如，線形PE和支化PE，雖然有相同的分子量，但分子尺寸后者比前者小。因此，在同一根柱子和相同的測試條件下，不同的高分子試樣由于分子鏈形態(tài)不同，所得到的分子量—淋出體積校正曲線并不重合。為此，在測定某種聚合物的分子量分布時，都需要有這種聚合物的單分散（或窄分布）試樣所求得的專用的校正曲線，而單分散（或窄分布）試樣不容易得到，只有很少的高聚物能制得窄分布的標準試樣，這給測試工作帶來極大的不便。對此通常采用能夠制得窄分布標準樣的聚合物聚苯乙烯（PS，溶于各種有機溶劑）、聚甲基丙烯酸甲酯（PMMA，溶于有機溶劑）、聚環(huán)氧乙烷（PEO，也叫聚氧化乙烯，溶于水）、聚乙二醇（PEG，溶于水）代替，因此用GPC采用實驗數(shù)據(jù)后要對數(shù)據(jù)進行校正處理，才能得到盡可能真實的相對分子量。

    高效液相色譜儀中，保護柱安裝在進樣器和分析柱之間，通過流動相和樣品溶液。保護柱是液相色譜分析中重要的色譜耗材，使用保護柱可大大降低分析柱受污染的程度，延長分析柱使用壽命。保護柱位于進樣器與分析柱之間，作用主要兩方面：

    1.截留不溶性顆粒
    2.吸附樣品基質中的雜質
    一、如何選擇保護柱：
    1.保護柱的填料，與分析柱保持一致!填料品牌一致，才能100%確保選擇性一致。
    2.保護柱的規(guī)格，要與分析柱匹配!填料粒徑一致，保護柱的內徑與分析柱的內徑相近。
    3.對于精細分離，保護柱本身的裝填柱效要足夠好!
    4.對于精細分離或者小內徑色譜柱分離，保護柱的連接死體積要盡可能小。
    5.如果是用于UHPLC柱，還要考慮保護柱的耐壓能力。
    保護柱不理想，就會導致峰擴散，分離度下降，不利于精細分離。
    理想的保護柱，即使分析柱短小如4.6×100mm，安裝保護柱后也未引起分離度與峰高的降低。
    二、如何使用保護柱：
    1.專柱專用。避免保護柱成為不同項目的交叉污染源。
    2.及時更換保護柱。當峰的理論塔板數(shù)下降15%，或是柱壓上升15%，或是關鍵分離度下降15%時，都應該及時更換保護柱。
    3.不慎發(fā)生強污染時，可以將分析柱卸下，單獨沖洗保護柱，可以使污染物更快的從保護柱中流出?！遣豢梢猿暠Ｗo柱。
    三、保護柱使用注意事項：
    1.獨立式保護柱與分析柱連接時，連接管路盡可能短，且接口切面平滑，盡量減少死體積以降低柱外展寬效應。
    2.卡套式保護柱一般未標注液流方向，使用時可以自行標注，并按照標注方向來使用，以免正反向使用后，截留的雜質污染分析柱。
    3.直接填裝的短柱型保護柱，出現(xiàn)柱壓升高或峰型變差時，可不接分析柱進行反向清洗，清洗溶劑可參考分析柱清洗溶劑。
    4.卡套式保護柱，柱芯替換時，注意柱芯與柱套是否存在方向上的匹配，同時不易旋擰過緊，以防滑絲。
    5.保護柱或柱芯一般不建議超聲清洗，因可能對填料表面修飾有影響。
    6.如同一保護柱配不同的分析柱使用，每次使用前，保護柱需先清洗并用流動相平衡保護柱一段時間后，再接分析柱使用。