1、測量波長
    在定量分析中，為了提高測定的靈敏度，入射光的波長應(yīng)選擇被測物的最大吸收波長λmax，如果λmax有干擾，可選擇另一條靈敏度稍低、但能避免干擾的譜線，所以，適當(dāng)選擇入射光的波長，不僅能提高測定的靈敏度，還能提高測定的準(zhǔn)確度。
    2、狹縫寬度
    狹縫寬度過大，入射光的單色性差；狹縫寬度太小，入射光的強減弱。狹縫寬度過大或過小均會造成靈敏度降低，較佳選擇是產(chǎn)生最小誤差情下的最大狹縫。一般選用儀器的狹縫寬琶度應(yīng)小于待測樣品吸收帶的半寬度，否則測得的吸光度值會偏低，狹縫寬度的選擇應(yīng)以減少狹縫寬度時供試品的吸光度不再；加為準(zhǔn)，對于大部分被測品種，可以使用2nm縫寬。
    3、控制適當(dāng)?shù)奈舛确秶?br>    可通過控制被測物濃度或改變吸收池厚度來實現(xiàn)吸光度合理的范圍，以盡量減小測量誤差。一般吸光度盡量控制在0.1-0.8范圍。
    4、空白溶液的選擇
    空白溶液是用來調(diào)節(jié)吸光度測量工作零點即A=0，T=100%的溶液，以消除溶液中其它基體組分以及吸收池和溶劑對入射光的反射和吸收所帶來的誤差。根據(jù)情況不同，常用空白溶液有如下幾種選擇。
    ①溶劑空白當(dāng)溶液中只有待測組分在測定波長下有吸收，而其它組分無吸收時，可用純?nèi)軇┳骺瞻住?br>    ②試劑空白如果顯色劑或其它試劑有吸收，而待測試樣溶液無吸收，則用不加待測組分的其它試劑作空白。
    ③試樣空白如果試樣基體有吸收，而顯色劑或其它試劑無吸收，則用不加顯色劑的試樣溶液作空白。

    分光光度計采用一個可以產(chǎn)生多個波長的光源，通過系列分光裝置，從而產(chǎn)生特定波長的光源，光源透過測試的樣品后，部分光源被吸收，計算樣品的吸光值，從而轉(zhuǎn)化成樣品的濃度。樣品的吸光值與樣品的濃度成正比。常用于核酸，蛋白定量以及細(xì)菌生長濃度的定量。

    操作方法：

    接通電源，打開儀器開關(guān)，掀開樣品室暗箱蓋，預(yù)熱 10 分鐘。

    將靈敏度開關(guān)調(diào)至“1”檔(若零點調(diào)節(jié)器調(diào)不到“0”時，需選用較高檔。

    根據(jù)所需波長轉(zhuǎn)動波長選擇鈕。

    將空白液及測定液分別倒入比色杯 3/4 處，用擦鏡紙擦清外壁，放入樣品室內(nèi)，使空白管對準(zhǔn)光路。

    在暗箱蓋開啟狀態(tài)下調(diào)節(jié)零點調(diào)節(jié)器，使讀數(shù)盤指針指向 t=0 處。

    蓋上暗箱蓋，調(diào)節(jié)“100”調(diào)節(jié)器，使空白管的 t=100，指針穩(wěn)定后逐步拉出樣品滑竿，分別讀出測定管的光密度值，并記錄。

    比色完畢，關(guān)上電源，取出比色皿洗凈，樣品室用軟布或軟紙擦凈。

    三大注意事項：

    分光光度計應(yīng)放在干燥的房間內(nèi)，使用時放置在堅固平穩(wěn)的工作臺上，室內(nèi)照明不宜太強。熱天時不能用電扇直接向儀器吹風(fēng)，防止燈泡燈絲發(fā)亮不穩(wěn)定。

    分光光度計使用前，使用者應(yīng)該首先了解本儀器的結(jié)構(gòu)和工作原理，以及各個操縱旋鈕之功能。在未按通電源之前，應(yīng)該對儀器的安全性能進行檢查，電源接線應(yīng)牢固，通電也要良好，各個調(diào)節(jié)旋鈕的起始位置應(yīng)該正確，然后再按通電源開關(guān)。

    分光光度計在儀器尚未接通電源時，電表指針必須于“0”刻線上，若不是這種情況，則可以用電表上的校正螺絲進行調(diào)節(jié)。