分光光度計的基本原理是:物質(zhì)在光的照射下會產(chǎn)生對光吸收的效應(yīng),而且物質(zhì)對光的吸收是具有選擇性的。各種不同物質(zhì)都具有其各自的吸收光譜。
因此不同波長的單色光通過溶液時其光的能星就會被不同程度的吸收,光能量被吸收的程度和物質(zhì)的濃度有一定的比例關(guān)系,即符合比耳定律。
在使用可見分光光度計前先了解一下的操作規(guī)程沒有錯。
開機
1、開機前，檢查電源插座是否接上;
2、啟動電源開關(guān)，儀器顯示"723C"
3、儀器經(jīng)自測后，按"MODE"鍵后再按"2"鍵，儀器顯示"DATA"
基本使用方法
1、按"GO TO λ"鍵，輸入設(shè)定波長;
2、四個比色皿，其中R位置放置參比試樣，其余三個放入待測試樣。將比色皿放入樣品池內(nèi)的比色皿架中，蓋上樣品池蓋;
3、將參比試樣推入光路，按"ABS%"鍵，使儀器自動調(diào)零和置滿度;
4、然后將待測試樣推入光路，顯示試樣的吸光度值;
5、如果要想將待測試樣的數(shù)據(jù)打印出，只需按"START/STOP"鍵即可。
可見分光光度計的使用注意事項
每天使用結(jié)束后，應(yīng)仔細檢查樣品室內(nèi)是否有溶液溢出，若有溢出必須隨時用濾紙吸干;
儀器使用完畢，用防塵套罩住。
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分光光度法是指應(yīng)用分光光度計的分析方法，具有靈敏、準確、快速及選擇性好等特點。
通常所測樣品溶液濃度下限可達10-6~10-5mol/L，適用于測定食品中的微量組分（如肉制品中的亞硫酸鹽、糖果中的二氧化硫等）。
原理
物質(zhì)對光的選擇性吸收
當光束照射到物質(zhì)上時，光與物質(zhì)發(fā)生相互作用，產(chǎn)生反射、散射、吸收或透射。
若被照射的是均勻溶液，光的散射可以忽略。
溶液顏色的產(chǎn)生
當一束白光通過某一有色溶液時，一些波長的光被溶液吸收，另一些波長的光則透過溶液。
透射光或反射光刺激人眼使人感到顏色的存在。
人把自身能感覺到的光定義為可見光。
在可見光區(qū)，不同波長的光呈現(xiàn)不同的顏色，因此溶液的顏色由透射光的波長所決定。
透射光與吸收光可組成白光，故稱這兩種光互為補色光，兩種顏色互為補色。
光吸收的本質(zhì)
當一束光照射到某物質(zhì)或其溶液時，組成該物質(zhì)的分子、原子或離子與光子發(fā)生“碰撞”;
光子的能量就轉(zhuǎn)移到分子、原子或離子上，是這些粒子由最低能態(tài)（基態(tài)）躍遷到較高能太（激發(fā)態(tài)），這個作用稱為物質(zhì)對光的吸收。
被激發(fā)的粒子約在10-8s后回到基態(tài)，并以熱或熒光等形式釋放出能量。
分子、原子或離子具有不連續(xù)的量子化能級，僅當照射光光子的能量hυ，與被照射物質(zhì)粒子的基態(tài)和激發(fā)態(tài)能量之差相當時，才能發(fā)生吸收。
不同物質(zhì)微粒由于結(jié)構(gòu)不同而具有不同的量子化能級，其基態(tài)和激發(fā)態(tài)能量差也不相同。
所以物質(zhì)對光的吸收具有選擇性。
吸收曲線
吸收曲線，也稱為吸收光譜，描述了物質(zhì)對不同波長的光的吸收能力。
將不同波長的光透過某一固定濃度和厚度的有色溶液，測量每一波長下有色溶液對光的吸收程度（即吸光度）；
然后以波長為橫坐標，以吸光度為縱坐標作圖，繪制的曲線即為吸收曲線。
不同濃度的同一物質(zhì)，在吸收峰附近的吸光度隨著濃度增加而增大，但最大吸收波長不變。
若在最大吸收波長處測定吸光度，則靈敏度最高。
因此，吸收曲線是分光光度法中選擇測定波長的重要依據(jù)。
光吸收基本定律
即朗伯-比爾定律：
當一束平行單色光通過液層厚度為b的有色溶液時，溶質(zhì)吸收了光能，光的強度就要減弱。
溶液的濃度越大，通過的液層厚度越大，入射光越強，則光被吸收的越多，光強度的減弱也越顯著。
該定律是紫外可見分光光度法等各類吸光光度法定量分析的依據(jù)，是由實驗觀察得到的，不僅適用于溶液，也適用于其他均勻非散射的吸光物質(zhì)。
A=lg(I/I0)=εbc
A-吸光度；
I0-入射光強度，cd；
I-透射光強度，cd；
ε-吸光系數(shù)，L/(mol˙cm)；
b-液層厚度（光程長度），cm；
c-有色溶液的濃度，mol/L。
其物理意義為：
當一束平行單色光通過單一均勻、非散射的吸光物質(zhì)溶液時，溶液的吸光度與溶液濃度和液層厚度的乘積成正比。
式中ε是吸光物質(zhì)在特定波長和溶劑的情況下的一個特征常數(shù)，數(shù)值上等于濃度為1mol/L的吸光物質(zhì)在1cm光程中的吸光度。
ε是吸光物質(zhì)吸光能力的量度，ε值越大，方法的靈敏度越高。
由實驗結(jié)果計算ε時，常以被測物質(zhì)的總濃度代替吸光物質(zhì)的濃度，實際上時表觀摩爾吸光系數(shù)。
在多組分體系中，如果各種吸光物質(zhì)之間沒有相互作用，體系的總吸光度等于各組分吸光度之和，即吸光度具有加和性。
透光度T是透射光強度I與入射光強度I0之比，即：
T=I/I0
因此：A=lg(1/T)
先檢查保險絲是否松動或熔斷，再檢查電源線是否斷路或接觸不良。正常時，電源進線與機殼間的絕緣電阻應(yīng)大于20MΩ。
二、故障現(xiàn)象：空心陰極燈點不亮。
可能是燈電源已壞或未接通；燈頭接線斷路或燈頭與燈座接觸不良?？煞謩e檢查燈電源、連線及相關(guān)接插件。
三、故障現(xiàn)象：空心陰極燈內(nèi)有跳火放電現(xiàn)象。
這是燈陰極表面有氧化物或雜質(zhì)的原因?？杉哟鬅綦娏鞯绞畮讉€毫安，直到火花放電現(xiàn)象停止。若無效，需換新燈。
四、故障現(xiàn)象：空心陰極燈輝光顏色不正常。
這是燈內(nèi)惰性氣體不純。可在工作電流下反向通電處理，直到輝光顏色正常為止。
五、故障現(xiàn)象：輸出能量過低。
可能是波長超差；陰極燈老化；外光路不正；透鏡或單色器被嚴重污染；放大器系統(tǒng)增益下降等。若是在短波或者部分波長范圍內(nèi)輸出能量較低，則應(yīng)檢查燈源及光路系統(tǒng)的故障。若輸出能量在全波長范圍內(nèi)降低，應(yīng)重點檢查光電倍增管是否老化，放大電路有無故障。
六、故障現(xiàn)象：電氣回零不好。
這可能由如下原因造成：
1、陰極燈老化。更換新燈。
2、廢液不暢通，
3、霧化室內(nèi)積水。應(yīng)及時排除。
4、燃氣不穩(wěn)定，使測定條件改變?？烧{(diào)節(jié)燃氣，使之符合條件。
5、陰極燈窗口及燃燒器兩側(cè)的石英窗或聚光鏡表面有污垢。逐一檢查清除。
6、毛細管太長。可剪去多余的毛細管。
七、故障現(xiàn)象：靈敏度低。
可能由如下原因造成
1、陰極燈工作電流大，造成譜線變寬，產(chǎn)生自吸收。應(yīng)在光源發(fā)射強度滿足要求的情況下，盡可能采用低的工作電流。
2、霧化效率低。若是管路堵塞的原因，可將助燃氣的流量開大，用手堵住噴嘴，使其暢通后放開。若是撞擊球與噴嘴的相對位置沒有調(diào)整好，則應(yīng)調(diào)整到霧呈煙狀液粒很小時為較佳。
3、燃氣與助燃氣之比選擇不當。一般燃氣與助燃氣之比小于為貧焰，介于和之間為中焰，大于為富焰。
4、燃燒器與外光路不平行。應(yīng)使光軸通過火焰中心，縫與光軸保持平行。
5、分析譜線沒找準?？蛇x擇較靈敏的共振線作為分析譜線。
6、樣品及標準溶液被污染或存放時間過長變質(zhì)。立即將容器沖洗干凈，重新配制。
八、故障現(xiàn)象：穩(wěn)定性差。
可能由如下原因造成
1、儀器受潮或預(yù)熱時間不夠?？捎脽犸L機除潮或按規(guī)定時間預(yù)熱后再操作使用。
2、燃氣或助燃氣壓力不穩(wěn)定。若不是氣源不足或管路泄漏的原因，可在氣源管道上加一閥門控制開關(guān)，調(diào)穩(wěn)流量。
3、廢液流動不暢。停機檢查，疏通或更換廢液管。
4、火焰高度選擇不當，造成基態(tài)原子數(shù)變化異常，致使吸收不穩(wěn)定。
5、光電倍增管負高壓過大。雖然增大負高壓可以提高靈敏度，但會出現(xiàn)噪聲大，測量穩(wěn)定性差的問題。只有適當降低負高壓，才能改善測量的穩(wěn)定性。
九、故障現(xiàn)象：背景校正噪聲大。
1、光路未調(diào)到較佳位置。重新調(diào)整氘燈與空心陰極燈的位置，使兩者光斑重合。
2、高壓調(diào)得太大。適當降低氘燈能量，在分析靈敏度允許的情況下，增加狹縫寬度。
3、原子化溫度太高?？蛇x用適宜的原子化條件。
十、故障現(xiàn)象：校準曲線線性差。
1、光源燈老化或使用高的燈電流，引起分析譜線的衰弱或擴寬。應(yīng)及時更換光源燈或調(diào)低燈電流。
2、狹縫過寬，使通過的分析譜線超過一條。可減小狹縫。
3、測定樣品的濃度太大。由于高濃度溶液在原子化器中生成的基態(tài)原子不成比例，使校準曲線產(chǎn)生彎曲。因此，需縮小測量濃度的范圍或用靈敏度較低的分析譜線。
十一、故障現(xiàn)象：檢出限偏高。
1、標尺擴展不夠。應(yīng)擴大至合適值。
2、積分時間太短?？杉娱L至適當值。
3、分析靈敏度偏低。按前面故障現(xiàn)象的處理方法逐一分析解決。
4、毛細管堵塞或老化腐蝕。應(yīng)清理或更換毛細管。
5、氣路不穩(wěn)定。查看氣路系統(tǒng)中有無漏氣、積水等問題；檢查氣源是否穩(wěn)定。
十二、故障現(xiàn)象：產(chǎn)生回火。
發(fā)生這種現(xiàn)象是因氣流速度小于燃燒速度?；鼗饡r極易引起火災(zāi)和爆炸。因此，在突然停電或助燃氣壓縮機出現(xiàn)故障，以及發(fā)現(xiàn)廢液排出管水封不好或霧化室中的安全塞松動漏氣時，或者氣路長時間不更換出現(xiàn)老化時，應(yīng)立即關(guān)閉燃氣氣路，確保人身和財產(chǎn)的安全。然后將儀器各控制開關(guān)恢復(fù)到開啟前的狀態(tài)后方可檢查產(chǎn)生回火的原因。
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