?實驗室離心機分離方法不一,適用場合也不盡相同。目前主流的離心分離方法主要是差速離心法和區(qū)帶離心法,其實在實驗室離心技術(shù)制備超離心法一文中有提及兩種離心方法,今天筆者對這兩種方法的原理及應用介紹進行補充和完善。
1. 差速離心法:許多具有生物活性的生物大分子和亞細胞器是不穩(wěn)定的,需要低溫高速離心,常用的是差速離心法。通過離心后倒出上清液和沉淀分開,把分離出來的上清液再增大轉(zhuǎn)速離心,分離出第二部分沉淀,這樣不斷增大轉(zhuǎn)速,逐級分離出所需要的物質(zhì)。利用這種方法可以有效地分離大小上差別較大的顆粒,但不能分離大小相似的顆粒,而且所分離出來的組分往往是不均一的,雜有其他種類的顆粒。
2.區(qū)帶離心法:其中又可以分為兩種:速率區(qū)帶離心和等密度速率區(qū)帶離心。
1) 速率區(qū)帶離心法:這是將小量懸液放在一平緩的密度梯度液上,用此梯度液來穩(wěn)定顆粒的沉降。由于離心,顆粒離開起始區(qū)帶而移動,移動的速度是由顆粒的大小、形狀和它們所受實驗室離心機的離心力來決定的。離心一段時間歷,各種穎粒將按照它們的相對速度移動而各個分開,成為一系列區(qū)帶。用這種方法我們可以將沉降速度差為20%或者更大的顆粒。
2)等密度區(qū)帶離心法:這是將要分離的顆粒懸液放至密度梯度液上,或者實際上將顆粒溶于制作梯度的溶液中。通過離心,顆?;蛘呱细』蛘呦鲁粒_到與它們自己密度相同的液體處在這里它們沒有重量,不管離心多長時間,它們再也不移動了。這些顆??沙蔀橐幌盗袇^(qū)帶,每種顆粒在它自己的密度區(qū)。所以,這是一種利用顆粒浮密度的大小分離顆粒大小的方法。使用的介質(zhì)通常是氯化銫(Cscl)和硫酸銫(Cs2SO4)。前者適合于DNA分離,后者適合于RNA分離。這種方法與速率區(qū)帶離心法相比,它有一個主要的缺點是在離心期間,顆粒不可避免地暴露在高濃度的梯度溶液中,會引起顆粒的部分損傷,并可能出現(xiàn)相當于損傷顆粒的一些額外的區(qū)帶。
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實驗室用離心機涉及范圍特別的廣,血液的分離、病毒的研究、DNA的研究、藥品的提純,對溶液中密度不同的粒子進行分離。是放射免疫、生物化學、環(huán)境保護等生產(chǎn)和科研單位必備實驗儀器。
實驗室離心機使用時注意事項:
1、放置離心管的時候一定要對稱的放置?。∵@樣才能轉(zhuǎn)起來,保證不偏,比如有四個放置離心管的位置,一定要放入兩個離心管而且是隔一個放一個
2、在開啟離心機的時候一定要將離心機的蓋子蓋上
3、開啟和關閉離心機的時候一定是速度慢慢增加或者減小的,不能一下子使速度改變很快
4、還有一點,就是在保證離心管對稱外,還要保持重量相當。
5、液體可以也不要是沸點太低的,要注意內(nèi)外氣壓比。
6、如果是有毒試劑還要做好通風處理。
實驗室離心機選型主要根據(jù)樣品成分、轉(zhuǎn)速要求、容量要求和溫控要求等進行選擇。
一、樣品成分:
不同成分的樣品所用的實驗室離心機類型有一定規(guī)律可循。
二、轉(zhuǎn)速要求:
實驗室離心機的最高轉(zhuǎn)速代表著離心機的分離能力,分主機最高轉(zhuǎn)速和轉(zhuǎn)子最高轉(zhuǎn)速。主機最高轉(zhuǎn)速不一定是每個轉(zhuǎn)子的最高轉(zhuǎn)速。
三、容量要求:
指離心管的容量和一次較多可放離心管的數(shù)量。
四、溫控要求:
指分離樣品時需要不需要冷凍。
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