色譜柱在使用前，可以進行柱的性能測試，并將結(jié)果保存起來，作為今后評價柱性能變化的參考。但要注意：柱性能可能由于所使用的樣品、流動相、柱溫等條件的差異而有所不同;另外，在做柱性能測試時是按照色譜柱出廠報告中的條件進行(出廠測試所使用的條件是較佳條件)，只有這樣，測得的結(jié)果才有可比性。

　　1、樣品的前處理：

　　a、可以使用流動相溶解樣品。

　　b、使用予處理柱除去樣品中的強極性或與柱填料產(chǎn)生不可逆吸附的雜質(zhì)。使用0.45?m的過濾膜過濾除去微粒雜質(zhì)。

　　2、流動相的配制：

　　液相色譜是樣品組分在柱填料與流動相之間質(zhì)量交換而達(dá)到分離的目的，因此要求流動相具備以下的特點：

　　a、流動相對樣品具有一定的溶解能力，保證樣品組分不會沉淀在柱中(或長時間保留在柱中)。

　　b、流動相具有一定惰性，與樣品不產(chǎn)生化學(xué)反應(yīng)(特殊情況除外)。

　　c、流動相的黏度要盡量小，以便在使用較長的分析柱時能得到好的分離效果;同時降低柱壓降，延長液體泵的使用壽命(可運用提高溫度的方法降低流動相的黏度)。

　　d、流動相的物化性質(zhì)要與使用的檢測器相適應(yīng)。如使用UV檢測器，可以使用對紫外吸收較低的溶劑配制。

　　e、流動相沸點不要太低，否則容易產(chǎn)生氣泡，導(dǎo)致實驗無法進行。

　　f、在流動相配制好后，一定要進行脫氣。除去溶解在流動相中的微量氣體既有利于檢測，還可以防止流動相中的微量氧與樣品發(fā)生作用。

　　3、流動相流速的選擇：

　　因柱效是柱中流動相線性流速的函數(shù)，使用不同的流速可得到不同的柱效。對于一根特定的色譜柱，要追求較佳柱效，可以使用較佳流速。對內(nèi)徑為4.6mm的色譜柱，流速一般選擇1ml/min，對于內(nèi)徑為4.0mm柱，流速0.8ml/min為佳。

　　當(dāng)選用較佳流速時，分析時間可能延長?？刹捎酶淖兞鲃酉嗟南礈鞆姸鹊姆椒ㄒ钥s短分析時間(如使用反相柱時，可適當(dāng)增加甲醇或乙腈的含量)。

流動相脫氣是液相色譜儀提高檢測性能和保護色譜柱的有效措施。

一、液相色譜儀液相色譜儀流動相脫氣的目的：

1、使色譜泵輸液均勻準(zhǔn)確，減小脈動。

2、提高保留時間和色譜峰面積的重現(xiàn)性。

3、防止氣泡引起尖峰。

4、使基線穩(wěn)定，提高信噪比。

5、降低溶劑的紫外吸收本底。

6、減少死體積。

7、防止填料氧化。

二、液相色譜儀流動相常用的脫氣方法：

1、吹氦脫氣法：

利用液體中氦氣的溶解度比空氣低的特性，連續(xù)吹氦脫氣，效果較好，適合所有溶劑。但成本高，使用較少。

2、加熱回留法：

脫氣效果比較好，但操作復(fù)雜。

3、超聲波脫氣法：

操作簡單，但脫氣效果不理想。

4、抽真空脫氣法：

利用真空泵降壓至0.05～0.07MPa，可除去溶劑中的氣體。但抽真空會引起混合溶劑組分的變化，從而影響實驗的重現(xiàn)性，多用于單一溶劑體系。

5、在線真空脫氣法：

利用膜滲透技術(shù)，在線真空脫氣，智能控制，成本低，脫氣效果明顯優(yōu)于以上幾種方法，并適用于多元溶劑體系。

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