分光光度計(jì)的使用步驟主要有哪些?
以下相關(guān)工程師做如下介紹：
1.把分光光度計(jì)電源線連接好，儀器的電源具備接地功能;
2.接通電源后，按動(dòng)開(kāi)機(jī)開(kāi)關(guān)，然后讓儀器預(yù)熱至少20分鐘；
儀器會(huì)自動(dòng)校正，然后顯示546.0nm 0.000A說(shuō)明自檢結(jié)束，就可以開(kāi)始測(cè)試;
3.使用“方式”鍵測(cè)試的方式，再根據(jù)自己要測(cè)量的結(jié)果選透光率、吸光度、和濃度的測(cè)試;
4.要對(duì)波長(zhǎng)進(jìn)行分析，選擇按鍵6，然后按提示依次進(jìn)行;
5.把樣品溶液和要測(cè)定的溶液各自倒入比色皿中后；
然后打開(kāi)樣品蓋，把盛著溶液的比色皿插入另一個(gè)比色皿中，最后蓋好樣品蓋;
6.把參比的溶液拉到光路中按住“OABS/100%T”鍵；
這時(shí)的顯示器會(huì)顯示出BLANKING,，直到最后顯示出“100%T”或者是“0.000A”為止;
7.最后儀器顯示出“100%T”或者是“0.000A”即可結(jié)束測(cè)試。
這時(shí)被測(cè)樣品的透光度、吸光度等參數(shù)就可直接讀出;
8.分光光度計(jì)使用完畢，關(guān)上電源，取出比色皿洗凈，樣品室用軟布或軟紙擦凈。
分光光度計(jì)的使用注意事項(xiàng)：
1、分光光度計(jì)應(yīng)放在干燥的房間內(nèi)，使用時(shí)放置在堅(jiān)固平穩(wěn)的工作臺(tái)上，室內(nèi)照明不宜太強(qiáng)。
熱天時(shí)不能用電扇直接向儀器吹風(fēng)，防止燈泡燈絲發(fā)亮不穩(wěn)定;
2、分光光度計(jì)使用前，使用者應(yīng)該首先了解分光光度計(jì)的結(jié)構(gòu)和工作原理，以及各個(gè)操縱旋鈕之功能。
在未按通電源之前，應(yīng)該對(duì)儀器的安全性能進(jìn)行檢查，電源接線應(yīng)牢固；
通電也要良好，各個(gè)調(diào)節(jié)旋鈕的起始位置應(yīng)該正確，然后再按通電源開(kāi)關(guān)。
3、在分光光度計(jì)尚未接通電源時(shí)，電表指針必須于“0”刻線上；
若不是這種情況，則可以用電表上的校正螺絲進(jìn)行調(diào)節(jié)。
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導(dǎo)讀：
紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)在生物學(xué)的應(yīng)用分析中, 常見(jiàn)的有蛋白質(zhì)含量檢測(cè);一般是在蛋白質(zhì)的吸收峰上作吸光度測(cè)定。因?yàn)榈鞍踪|(zhì)對(duì)紫外光的主要吸收波長(zhǎng)為280nm, 所以, 采用光度測(cè)量模式, 將儀器的波長(zhǎng)GOTO 到蛋白質(zhì)的zui大吸收峰波長(zhǎng)280nm 上, 測(cè)試其吸光度大小, 就可完成對(duì)蛋白質(zhì)的定量檢測(cè)。
目前, 紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)的應(yīng)用主要是在定量分析方面。先從生命科學(xué)領(lǐng)域的應(yīng)用來(lái)介紹。紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)在生命科學(xué)中應(yīng)用非常廣泛。zui主要的是以下5 個(gè)方面。
1. 蛋白質(zhì)分析工作中的應(yīng)用
紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)在蛋白質(zhì)的分析中, zui主要的是作蛋白質(zhì)含量檢測(cè);一般是在蛋白質(zhì)的吸收峰上作吸光度測(cè)定。因?yàn)榈鞍踪|(zhì)對(duì)紫外光的主要吸收波長(zhǎng)為280nm, 所以, 采用光度測(cè)量模式, 將儀器的波長(zhǎng)GOTO 到蛋白質(zhì)的zui大吸收峰波長(zhǎng)280nm 上, 測(cè)試其吸光度大小, 就可完成對(duì)蛋白質(zhì)的定量檢測(cè)。
2. 核酸分析工作中的應(yīng)用
紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)在核酸分析中的應(yīng)用, 主要是用來(lái)對(duì)核酸的定量檢測(cè); 因?yàn)楹怂岬奈辗逶?60nm。我們只要采用光度測(cè)量模式, 將紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)的波長(zhǎng)GOTO 到核酸的zui大吸收峰260nm 上, 測(cè)試其吸光度大小就是了。
3. 氨基酸分析工作中的應(yīng)用
紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)在氨基酸分析中的應(yīng)用, 主要是用來(lái)對(duì)氨基酸的定量檢測(cè)。因?yàn)榘被釋?duì)紫外光的主要吸收波長(zhǎng)為230nm, 所以, 我們只要采用光度測(cè)量模式, 將紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)儀器的波長(zhǎng)GOTO 到氨基酸的zui大吸收峰230nm 上, 就可測(cè)試其吸光度大小, 從而計(jì)算出氨基酸的含量。但是, 因?yàn)榘被岱治鰰r(shí), 一般是將它溶解在水中, 而水在230 nm 附近有很多干擾吸收線, 所以, 在用紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)對(duì)氨基酸分析檢測(cè)時(shí), 要注意防止干擾的問(wèn)題。此外, 還需注意: 只有少數(shù)氨基酸有紫外吸收, 多數(shù)氨基酸無(wú)紫外吸收或很弱, 測(cè)定時(shí)要衍生化后再測(cè)。
4. 糖類分析測(cè)試工作中的應(yīng)用
紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)在糖的分析中, 主要是作定量檢測(cè)。因?yàn)樘菍?duì)紫外光的主要吸收波長(zhǎng)為218nm, 所以, 對(duì)糖類進(jìn)行分析時(shí), 只要采用光度測(cè)量模式, 將紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)儀器的波長(zhǎng)GOTO 到氨基酸的zui大吸收峰218 nm上, 就可測(cè)試其吸光度大小, 從而計(jì)算出糖的含量。
5. 多糖分析測(cè)試工作中的應(yīng)用
紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)在多糖的分析中, 主要也是作定量檢測(cè)。因?yàn)槎嗵菍?duì)紫外光的主要吸收波長(zhǎng)為206nm, 所以, 我們只要采用光度測(cè)量模式, 將紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)儀器的波長(zhǎng)GOTO 到多糖的zui大吸收峰206 nm 上, 就可測(cè)試其吸光度大小, 從而計(jì)算出多糖的含量。
但是多糖的分析難度很大。因?yàn)? 在206 nm 處的時(shí)候, 光源(氘燈) 的能量已經(jīng)很弱, 儀器光學(xué)系統(tǒng)的能量輸出也很低, 光電倍增管的靈敏度也很低, 206nm 左右的干擾也很大。所以, 用紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)作多糖的分析是很難的事, 目前許多科學(xué)家正在研究中。
紫外可見(jiàn)吸收光譜是由于分子中的某些基團(tuán)吸收了紫外可見(jiàn)輻射光后，發(fā)生了電子能級(jí)躍遷而產(chǎn)生的吸收光譜。
由于各種物質(zhì)具有各自不同的分子、原子和不同的分子空間結(jié)構(gòu)，其吸收光能量的情況也就不會(huì)相同；
因此，每種物質(zhì)就有其特有的、固定的吸收光譜曲線，可根據(jù)吸收光譜上的某些特征波長(zhǎng)處的吸光度的高低判別或測(cè)定該物質(zhì)的含量，這就是分光光度定性和定量分析的基礎(chǔ)。
分光光度分析就是根據(jù)物質(zhì)的吸收光譜研究物質(zhì)的成分、結(jié)構(gòu)和物質(zhì)間相互作用的有效手段。它是帶狀光譜，反映了分子中某些基團(tuán)的信息。可以用標(biāo)準(zhǔn)光圖譜再結(jié)合其它手段進(jìn)行定性分析。
根據(jù)Lambert-Beer定律說(shuō)明光的吸收與吸收層厚度成正比，比耳定律說(shuō)明光的吸收與溶液濃度成正比;如果同時(shí)考慮吸收層厚度和溶液濃度對(duì)光吸收率的影響，即得朗伯-比耳定律。
即A=εbc，(A為吸光度，ε為摩爾吸光系數(shù)，b為液池厚度，c為溶液濃度)就可以對(duì)溶液進(jìn)行定量分析。
將分析樣品和標(biāo)準(zhǔn)樣品以相同濃度配制在同一溶劑中，在同一條件下分別測(cè)定紫外可見(jiàn)吸收光譜。
若兩者是同一物質(zhì)，則兩者的光譜圖應(yīng)完全一致。如果沒(méi)有標(biāo)樣，也可以和現(xiàn)成的標(biāo)準(zhǔn)譜圖對(duì)照進(jìn)行比較。這種方法要求儀器準(zhǔn)確，精密度高，且測(cè)定條件要相同。
實(shí)驗(yàn)證明，不同的極性溶劑產(chǎn)生氫鍵的強(qiáng)度也不同，這可以利用紫外光譜來(lái)判斷化合物在不同溶劑中氫鍵強(qiáng)度，以確定選擇哪一種溶劑。
應(yīng)用：
在水和廢水監(jiān)測(cè)中的應(yīng)用，對(duì)于一個(gè)水系的監(jiān)測(cè)分析和綜合評(píng)價(jià)，一般包括水相(溶液本身)、固相(懸浮物、底質(zhì))、生物相(水生生物)。
在水質(zhì)的常規(guī)監(jiān)測(cè)中，紫外可見(jiàn)分光光度法占有較大的比重。由于水和廢水的成分復(fù)雜多變，待測(cè)物的濃度和干擾物的濃度差別很大，在具體分析時(shí)必須選擇好分析方法。
在農(nóng)產(chǎn)品和食品分析中可用于檢測(cè)的組分或成分有蛋白質(zhì)、賴氨酸、葡萄糖、維生素C、硝酸鹽、亞硝酸鹽、砷、汞等；
在植物生化分析中可用于檢測(cè)葉綠素、全氮和酶的活力等；
在飼料分析中可用于檢測(cè)煙酸、棉酚、磷化氫和甲酯等。
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