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液相色譜中常用的柱前衍生化方法 液相色譜技術(shù)指標

時間:2020-06-30    來源:儀多多儀器網(wǎng)    作者:儀多多商城     
【導讀】液相色譜使用較多的是紫外檢測器,為了使一些沒有紫外吸收或紫外吸收很弱的化合物能被紫外檢測器檢測,往往通過衍生化反應(yīng)在這些化合物的分子中引入有強紫外吸收的



    液相色譜使用較多的是紫外檢測器,為了使一些沒有紫外吸收或紫外吸收很弱的化合物能被紫外檢測器檢測,往往通過衍生化反應(yīng)在這些化合物的分子中引入有強紫外吸收的基團:2,4-二硝基苯、苯甲基、對硝基苯甲基、3,5-二硝基苯甲基、苯甲酸酯、對甲苯酰、對氯苯甲酸制、對硝基苯甲酸酯、對甲氧基苯甲酸酯、苯甲酰甲基、對溴苯甲酰甲基,這些衍生物可被紫外檢測器檢測。
    大多數(shù)紫外衍生反應(yīng)來自經(jīng)典的光度分析和有機定量分析,新的衍生化反應(yīng)和衍生化試劑是隨液相發(fā)展而發(fā)展的,這些反應(yīng)的原理都來自有機合成,所以就要求操作者對有機合成有所了解。但是,由于柱前衍生化是為色譜分析準備樣品,處理樣品的量?。╩g級),所用的小型和微型反應(yīng)器皿又不同于常量的有機合成,而是類似于近年來發(fā)展的微量有機合成。紫外衍生化反應(yīng)要選擇反應(yīng)產(chǎn)率高、重復性好的反應(yīng)。過量試劑和試劑中的雜質(zhì)如果干擾下一步的色譜分離和檢測,則在色譜進樣前要進行純化分離。還要注意反應(yīng)介質(zhì)對紫外吸收的影響。
    (1)苯甲酰化反應(yīng):苯甲酰氯及其衍生物--對硝基苯甲酰氯、3,5-二甲基苯甲酰氯和對甲氧基苯甲酰氯都可以同胺、醇和酚類化合物反應(yīng),生成紫外吸收的苯甲酸酯類衍生物;
    (2)2,4-二硝基氟代苯(DNFB)的反應(yīng):DNFB與醇的反應(yīng)產(chǎn)率很低,但可與大多數(shù)伯胺、仲胺和氨基酸反應(yīng),生成強紫外吸收的苯胺類衍生物;
    (3)苯基異硫氰酸酯(PITC)的反應(yīng):PITC可與氨基酸反應(yīng),生成苯基己丙酰硫脲衍生物--PTH氨基酸;
    (4)苯基磺酰氯的反應(yīng):苯基磺酰氯可與伯胺和仲胺反應(yīng)。
    甲苯磺酰氯可與多氨基化合物反應(yīng),不僅能提高它們的檢測靈敏度,還可改變HPLC的分離度。
    (5)有機酸的酯化反應(yīng):有機酸很容易與酰溴基反應(yīng)生成酯,常用的酰溴基試劑有苯甲酰溴、甲氧基苯甲酰溴、對溴基苯甲酰溴和對硝基苯甲酰溴等;
    酯化反應(yīng)在極性溶劑(如乙腈、丙酮或四氫呋喃)中進行,有時需要加催化劑,如冠醚加鉀離子、二乙胺或N-二異丙基胺等。
    (6)羰羥基化合物的反應(yīng):醛類和酮類中的羰基可與2,4-二硝基苯肼(DNPA)反應(yīng),反應(yīng)在弱酸性條件下進行,生成苯腙衍生物。
    羰基化合物還可以與對甲基芐基羥胺(PNBA)在堿催化下反應(yīng),生成有強紫外吸收的肟。





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高效液相色譜儀的脫氣的必要性

  在食品分析中,無論是殘留分析還是成分分析,HPLC 也已成為不可或缺的。流動相脫氣是HPLC 系統(tǒng)能得到可靠數(shù)據(jù)的一個很有效的措施。下面分析一下,高效液相色譜脫氣的必要性,并總結(jié)歸納了脫氣常用的方法。

  一、脫氣的必要性

  流動相脫氣是HPLC 系統(tǒng)能得到可靠數(shù)據(jù)的一個很有效的措施。HPLC 泵在輸送液體時要產(chǎn)生很大的力量,由于氣體的壓縮比與液體相比大的多,因而當氣泡存在時,我們發(fā)現(xiàn)瞬間的流速降低和系統(tǒng)壓力下降。如果這個氣泡足夠大,液相泵將不能輸送任何溶劑,而且如果壓力低于預(yù)先設(shè)定的壓力低限,泵將停止工作。當一個氣泡通過輸液泵時,由于系統(tǒng)壓力大,氣泡通常會溶解在流動相溶液中,隨流動相通過柱子。但是到達檢測器流通池時系統(tǒng)壓力又恢復到了大氣壓,因而氣泡可能在檢測器流通池中又顯現(xiàn),在色譜圖上會出現(xiàn)不規(guī)律的毛刺。

  二、脫氣方法

  1、吹氦脫氣法。

  利用氦氣在液體中溶解度比空氣低的特性,在0.1MPa 壓力下,以約60 mL/min 流速通入流動相儲液容器中10~15min,可以很有效地從流動相中排除溶解的空氣,能排除接近80%的氧氣。采用一個高效分布式噴射流裝置,一體積的氦氣可從流動相中將等體積的幾乎全部氣體排除。這意味著1L 氦氣通過1L 流動相就可完成排氣這個工作。這種脫氣方法雖然好,但氦氣價格較高,很少使用。

  2、加熱回流法。

  此法的脫氣效果較好。在操作時要注意冷凝塔的冷卻效率,否則溶劑會丟失,混合流動相的比例會有變化。

  3、抽真空脫氣法。

  此法可使用真空泵,降壓至0.05~0.07MPa ,即可除去溶解的氣體。但是由于真空脫氣會使混合溶劑組成發(fā)生變化,從而影響到實驗的重現(xiàn)性,因此多用于單溶劑體系的簡單分析。

  4、超聲波脫氣法。

  將欲脫氣的流動相置于超聲波清洗機中,用超聲波震蕩10~20min。此法的脫氣效果最差。

標簽: 高效液相色譜儀
高效液相色譜儀 高效液相色譜儀的脫氣的必要性_高效液相色譜儀
  在線脫氣機接于HPLC的流動相存儲液瓶與高壓恒流泵之間。流動相經(jīng)由在線脫氣機的入口進入脫氣機中,在獨立的單元真空泵腔內(nèi),通過預(yù)先設(shè)定的真空度,真 空泵連續(xù)低速運行,HPLC流動相在泵的作用下流經(jīng)真空腔內(nèi)一段很短的Teflon® AF脫氣膜管,按照Henry’s定律,在真空作用下,溶劑中溶解的氣體通過管壁排出。配了在線脫氣機的液相色譜儀再不需要人工超聲脫氣或氦氣脫氣。下面我們來了解一下在線脫氣機。
 
  問:流行品牌液相色譜儀的在線脫氣機有何特點
 
  答:目前大流行品牌的在線脫氣機很大部分是使用了TeflonAF脫氣管技術(shù)。有的流行品牌提供TeflonAF技術(shù)脫氣機和其他類型脫氣機供用戶選擇,因為價格有不同。
 
  問:如何判別是TeflonAF技術(shù)脫氣機。
 
  由于TeflonAF技術(shù)脫氣效率非常高,TeflonAF脫氣管路體積很小,僅有不到每路500ul。而普通脫氣機的管路每路有12ml。相差巨大。檢查儀器性能指標中都有標示這個指標。
 
  問:液相色譜儀一般配原廠的在線脫氣機,還是說可以配其他品牌的脫氣機?
 
  答:如果原廠配的是TeflonAF的在線脫氣機,那么脫氣效果會很好。但有一個問題是流行品牌液相色譜儀廠家把維修零配件的價格定的太高,難以接受。例如:真空泵,脫氣盒,在發(fā)生故障時需要更換。這些配件少則5千,多則萬元,難以接受。而Easeatech在線脫氣機的真空泵和脫氣盒的價格要低的多。并且都是原裝進口,性能和壽命都非常高。由于在線脫氣機是獨立的,Easeatech在線脫氣機可配所有品牌的液相色譜儀,例如Waters,安捷倫,島津,戴安。所以新購置一臺液相色譜儀,配原廠的脫氣機不一定是的選擇。配Easeatech在線脫氣機更合適。
 
  問:用氦氣脫氣的四元液相色譜儀是否需要配在線脫氣機?
 
  答:氦氣脫氣也不錯。就是用完后還要重新買氦氣,很麻煩。如果有經(jīng)費,還是購一臺在Easeatech線脫氣機。
 
問:二元雙泵液相色譜儀是否要配在線脫氣機?
 
  答:二元液相色譜儀屬于高壓混合類型。要求不高時可以不配在線脫氣機,但實驗前要用超聲脫氣機脫氣。脫氣后的流動相才能倒入流動相瓶中使用。有些麻煩。在要求高的情況下,例如:1)流動相的配比大約相等,如有機相(甲醇):水是50:50,或60:40等,這時氣體產(chǎn)生較多,壓力會波動較大。2)基線噪音影響到實驗的結(jié)果,要求更低的基線噪音。在這些情況下排除了泵和檢測器本身故障,解決的辦法就是配Easeatech在線脫氣機。
 
  問:液相色譜儀的脫氣機出現(xiàn)故障,需要更換脫氣盒,如何處理呢?
 
  答:由于原裝脫氣盒價格被定的太高,更換費用太高。因次建議購買Easeatech在線脫氣機。一勞永逸的解決這個問題。如果是Waters液相色譜儀,也可以用Easeatech的脫氣盒代替原裝的,價格要低很多。安裝沒有任何問題。因為接口和形狀都完全一樣。


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