色譜柱在色譜儀分析系統(tǒng)中起著分離作用，是色譜分析的核心部件。正確使用和維護色譜柱尤為重要，使用不當就會降低柱效、縮短使用壽命甚至損壞。以下從幾個方面簡單介紹液相色譜柱在使用過程中應當著重注意的問題。
一、避免壓力和溫度的急劇變化
溫度的突然變化或者使色譜柱從高處掉下都會影響柱內(nèi)的填充狀況；柱壓的突然升高或降低也會沖動柱內(nèi)填料，因此在調(diào)節(jié)流速時應該緩慢進行，以保持色譜柱內(nèi)填料的穩(wěn)定性。
二、避免直接改變?nèi)軇┑慕M成
在需要改變檢測樣品溶液組成是，應逐漸改變?nèi)軇┑慕M成，特別是反相色譜中，不應直接從有機溶劑改變?yōu)槿渴撬?，反之亦然。且在使用次洗脫能力強的洗脫液沖洗色譜柱時，對流路系統(tǒng)中流動相的置換應以相混溶的溶劑逐漸過渡，每種流動相的體積應是柱體積的20倍左右，即常規(guī)分析需要50~75ml。
三、避免色譜柱反沖
一般來說色譜柱不能反沖，只有色譜柱使用說明書上標明該柱可反沖才可以反沖除去留在柱頭上的雜質(zhì)。否則，反沖色譜柱的影響是迅速降低柱效。
四、避免流動相使用不當而破壞固定相
選擇使用適宜的流動相（尤其是pH），以避免固定相被破壞。有時可以在進樣器前面連接一段預柱，分析柱是鍵合硅膠時，預柱為硅膠，可使流動相在進入分析柱之前預先被硅膠"飽和"，避免分析柱中的硅膠基質(zhì)被溶解。
五、禁止樣品未經(jīng)處理直接進入色譜柱
避免將基質(zhì)復雜的樣品尤其是生物樣品直接注入柱內(nèi)，需要對樣品進行預處理或者在進樣器和色譜柱之間連接一保護柱。保護柱一般是填有相似固定相的短柱。保護柱可以而且應該經(jīng)常更換。
六、禁止將緩沖溶液長時間存放在色譜柱內(nèi)
保存色譜柱時應將柱內(nèi)充滿乙腈或甲醇，柱接頭要擰緊，防止溶劑揮發(fā)干燥。禁止將緩沖溶液留在柱內(nèi)靜置過夜或更長時間。
七、禁止色譜柱未經(jīng)處理直接封存
色譜柱使用完成之后須使用相宜溶劑進行清潔處理，例如ODS柱宜用甲醇沖洗至基線平衡；當采用鹽緩沖溶液作流動相時，使用完后應用無鹽流動相沖洗；含鹵族元素（氟、氯、溴）的化合物可能會腐蝕不銹鋼管道，不宜長期與之接觸；裝在液相色譜儀上的色譜柱如不經(jīng)常使用，應每隔4-5天開機沖洗15分鐘。
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色譜柱是高效液相色譜儀的重要組成部分，在色譜儀分析系統(tǒng)中起著分離作用，是色譜分析的核心部件，對高效液相色譜柱的正確使用不僅能延長色譜柱的使用壽命，還能有效保證實驗結果。
以下簡單介紹液相色譜柱
在使用過程中應當注意的問題
01
性能測試
新色譜柱使用前，應進行柱的性能測試，并將結果保存起來，作為今后評價柱性能變化的參考依據(jù) (柱性能由于所使用的樣品、流動相、柱溫等條件的差異有所不同，在測試中需保證方法一致性）。
02
流動相的配制
液相色譜是通過樣品組分在柱填料與流動相之間質(zhì)量交換而達到分離的目的，因此要求流動相具備以下的特點：
流動相對樣品具有一定的溶解能力，保證樣品組分不會沉淀在柱中（或長時間保留在柱中）。
流動相具有一定惰性，與樣品不產(chǎn)生化學反應。
流動相的黏度要盡量小，以便在使用較長的分析柱時既能得到好的分離效果，同時又降低柱壓，延長柱子的使用壽命（可運用提高溫度的方法降低流動相的黏度）。
流動相的物化性質(zhì)與使用的檢測器相適應。
流動相沸點不要太低，否則容易產(chǎn)生氣泡，導致實驗無法進行。
流動相配制好后，一定要進行脫氣，除去溶解在流動相中的微量氣體。
03
新色譜柱使用前沖洗步驟
1、首先查看色譜柱的說明書，注意色譜柱封存的溶劑、推薦流速、pH值、耐受柱壓、及使用溫度等信息。
2、如分析使用的流動相與色譜柱內(nèi)儲存的溶劑混溶，可以直接使用流動相參照色譜柱說明書中推薦的流速、溫度等條件沖洗色譜柱20倍柱體積以上。如果分析條件使用的流動相與色譜柱內(nèi)儲存的溶劑不混溶，請選擇與色譜柱內(nèi)儲存溶劑和流動相都混溶的溶劑，作為置換溶劑，逐步置換到分析使用的流動相。每次置換均應沖洗色譜柱20倍柱體積以上。
04
日常使用注意事項
1、請使用HPLC級別以上的試劑作為流動相。
2、流動相要用0.45um孔徑以下的微孔濾膜濾過。
3、流動相的pH值不能超出色譜柱的適用范圍。
4、注意流動相的流動方向要與色譜柱標識的方向一致。
5、容易滋生微生物的流動相不要存放過久，要及時換新，以免微生物滋生污染色譜柱。
6、色譜柱分析結束后要及時徹底沖洗。
7、長時間不用的色譜柱要將流動相置換為色譜柱保存的溶劑，并兩端用堵頭封死保存。
8、色譜柱要避免劇烈碰撞、跌落等。
05
流動相流速的選擇
因柱效是柱中流動相線性流速的函數(shù)，使用不用的流速可得到不同的柱效。對于一根特定的色譜柱，要追求較佳柱效，應使用zui佳流速。對內(nèi)徑為4.6mm的色譜柱，流速一般選擇1mL/min，對于內(nèi)徑4.0mm柱，流速0.8mL/min為更佳。當選用zui佳流速時，分析時間可能延長?？刹捎酶淖兞鲃酉嗟南礈鞆姸鹊姆椒ㄒ钥s短分析時間（如使用反相柱時，可適當增加有機試劑甲醇或乙腈的含量）。
液相色譜柱在色譜分析中起著至關重要的角色，是樣品分離的核心，正確使用色譜柱才能達到更好的理想的分離效果，提高色譜柱的使用壽命。
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倉溫管控精靈
空氣循環(huán)制冷控溫模塊，防止熱空氣進入樣品倉形成冷凝水
譜峰解析精靈
zui小肩縫提取，共流出峰切割，線性范圍拓展
系統(tǒng)一般由輸液泵、進樣器、色譜柱、檢測器、數(shù)據(jù)記錄及處理裝置等組成。
其中輸液泵、色譜柱、檢測器是關鍵部位。有的儀器還有梯度洗脫裝置、在線脫氣機、自動進樣器、與柱或保護住、柱溫控制器等，現(xiàn)代HPLC儀還有微機控制系統(tǒng)，進行自動化儀器控制和數(shù)據(jù)處理。
下面就介紹下高效液相色譜使用中的幾個重要環(huán)節(jié)吧。
實驗前的準備工作
1.過濾流動相。為了保證流動相潔凈，流動相使用前都必須微膜過濾。
2.流動相脫氣。為了避免流動相中氣泡對儀器（氣泡可能會對儀器及相關設備的正常使用及壽命產(chǎn)生一定影響）及分析結果的影響。
3.運行液相泵前盡量先清洗泵柱塞部件。清洗液一般采用10%甲醇溶液，也有采用10%異丙醇溶液
（5%甲醇或異丙醇等有機相溶液能避免微生物污染，但濃度不能太高，高于20%緩沖液可能會導致鹽結晶析出，碰到酸堿類物質(zhì)可能會有比較強烈的反應；另外異丙醇粘度較大，清洗能力較強；也有采用純水清洗的，這樣如果儀器每天使用還行，如果長期不用，為了防止微生物繁殖，純水還得用含有有機相的清洗液置換出去）
沖洗，這是為了保護泵柱塞和密封圈等部件在泵運行時不被結晶鹽等磨損而導致泵頭漏液。
4.每天運行儀器前先排氣。一般的液相色譜儀都有排氣功能，沒有的可以不接色譜柱開機運行幾分鐘排氣。
5.泵運行時盡量不采用大流量模式（主要是換流動相或排氣泡等，流量盡量設為3.0ml/min以內(nèi)，這樣更有利于保護泵柱塞桿和密封圈等部件的壽命）。
6.分析前先對色譜系統(tǒng)（整個流路）進行沖洗及平衡，尤其是色譜柱。先用純甲醇沖洗30分鐘，再換10%甲醇水溶液沖洗30分鐘，最后換含緩沖鹽或酸堿類物質(zhì)的流動相平衡30分鐘。色譜柱如果長期沒用，每一步?jīng)_洗、平衡量盡量為色譜柱柱容量20倍以上）。
如果流動相中不含緩沖鹽或酸堿類物質(zhì)，純甲醇沖洗完可直接換為流動相。使用色譜柱前知道或懷疑色譜柱中殘留有或酸堿鹽類物質(zhì)，在用純甲醇沖洗前增加一步10%甲醇水溶液沖洗。
7.如果色譜柱需要控溫（升溫），要先運行泵后再設柱溫箱溫度。
8.待儀器運行穩(wěn)定后（基線基本走平后，這個是經(jīng)驗值），方可進樣。
樣品前處理
1.樣品濃度不要太大，雜質(zhì)不要太多，否則色譜柱處理起來壓力很大。
2.進樣前樣品一定得先經(jīng)微膜（一般采用0.22um或0.45um微膜）過濾。
實驗過程中注意事項
1.為了避免進樣器殘留影響，進樣前先對進樣器進行清洗（這個不是必須的，但盡量是每進一針樣品或標準品前都清洗進樣器和進樣針，當然同一樣品也可以不洗，不同樣品盡量洗），清洗順序為純水、甲醇、流動相。
2.每進一針樣品后要對系統(tǒng)進行一次沖洗、平衡后再進下一針樣品（等度要求不高，梯度要求相對高，主要是沖洗色譜柱中殘留的強保留物質(zhì)）。
實驗完畢的后續(xù)工作
1.做完樣要先清洗進樣器，清洗順序為純水、甲醇。
2.關閉柱溫箱溫度設置。
3.沖洗色譜系統(tǒng)及色譜柱。先用10%甲醇水溶液沖洗30分鐘后換為純甲醇沖洗30分鐘，待基線基本走平停泵。如果流動相中不含緩沖鹽或酸堿類物質(zhì)，沖洗時流動相可直接換為純甲醇。色譜柱用完后如果長時間內(nèi)不會再用，純甲醇沖洗量要大于色譜柱柱容量20倍以上的，沖洗后卸下，兩端密封保存。
4.待色譜柱溫度降至接近于室溫時再停泵、關機（這一點需特別注意，目的是防止溫度過高損壞色譜柱）。
5.關機前用清洗液清洗柱塞桿。
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