一、流動(dòng)相溶劑的選擇
1.所選用的流動(dòng)相溶劑要有一定的化學(xué)穩(wěn)定性，不與固定相和樣品組分起反應(yīng)，其純度和化學(xué)特性必須滿足色譜過(guò)程的穩(wěn)定性和重復(fù)性的要求。
2.溶劑應(yīng)當(dāng)不干擾檢測(cè)器的工作，溶劑應(yīng)與檢測(cè)器匹配，選擇不影響檢測(cè)器正常工作應(yīng)選擇在測(cè)定波長(zhǎng)范圍內(nèi)無(wú)吸收的流動(dòng)相。
3.在制備分離中,溶劑應(yīng)當(dāng)易于除去,不干擾對(duì)分離組分的回收。
4.溶劑的粘度要小，保證合適的柱壓降。
5.從實(shí)用角度考慮，溶劑應(yīng)當(dāng)價(jià)格低廉，容易購(gòu)得，使用安全，純度要高。
二、流動(dòng)相溶劑使用的注意事項(xiàng)
1.流動(dòng)相溶劑應(yīng)選擇HPLC的溶劑或依此為標(biāo)準(zhǔn)的溶劑。流動(dòng)相使用前用0.45μm濾膜過(guò)濾、脫氣，清除微粒和灰塵。在送液泵內(nèi)，為了防止雜物（固體）進(jìn)入流路，裝有吸濾器，但網(wǎng)孔徑為10μm，比此更小的顆粒仍然可通過(guò)，這會(huì)導(dǎo)致流路和柱子堵塞和污染。為此，建議常用0.45μm濾膜過(guò)濾。流動(dòng)相溶劑須經(jīng)脫氣，如不脫氣，在溶劑混合時(shí)，或壓力溫度變化時(shí)容易產(chǎn)生大量氣泡，會(huì)導(dǎo)致泵誤動(dòng)作和輸液不暢，檢測(cè)器產(chǎn)生噪聲信號(hào)等。
2.流動(dòng)相恢復(fù)到室溫后使用。流動(dòng)相溫度與室溫相差時(shí)，流動(dòng)相在恢復(fù)到室溫前，基線水平很難穩(wěn)定，特別是發(fā)生漂移，也容易產(chǎn)生氣泡等現(xiàn)象。水與有機(jī)溶劑混合時(shí)，混合液變化大，往往會(huì)與室溫相差很大，務(wù)必注意。
3.做HPLC流動(dòng)相的試劑應(yīng)用HPLC級(jí)的、水應(yīng)用二次蒸餾水，水相流動(dòng)相需經(jīng)常更換，防止長(zhǎng)菌變質(zhì)。使用去離子水、針劑水、純凈水（炊用）并不合適、尤其是做梯度洗脫時(shí)，水中的不純物會(huì)成為鬼峰，從而干擾分析結(jié)果。
4.流動(dòng)相的pH值過(guò)高或過(guò)低，流動(dòng)相使用純水，使用高濃度磷酸鹽緩沖溶液，使用離子對(duì)試劑等，均可能造成色譜柱填料被化學(xué)破壞，這種對(duì)色譜柱固定相及鍵合相的破壞通常是不可修復(fù)的
5.用緩沖鹽做流動(dòng)相時(shí)，在使用前和使用后都要用水清洗流路，絕對(duì)禁止將緩沖溶液留在流路中靜置或更長(zhǎng)時(shí)間。
6.若需要使用含鹽的流動(dòng)相，使用前請(qǐng)過(guò)濾。并且使用該含鹽流動(dòng)相前，色譜柱需先用低比例有機(jī)相（有機(jī)相含量應(yīng)不低于10%）的溶液沖洗，以免緩沖鹽析出。流動(dòng)相若為蒸餾水或含鹽的緩沖液，建議現(xiàn)用現(xiàn)配，以免流動(dòng)相因滋生微生物而造成柱填料的污染。
7.進(jìn)行梯度實(shí)驗(yàn)時(shí)要注意梯度變化過(guò)程中流動(dòng)相的互溶性，避免因流動(dòng)相不互溶而導(dǎo)致的緩沖鹽析出問(wèn)題。反相系統(tǒng)更換正相系統(tǒng)或正相系統(tǒng)更換反相系統(tǒng)時(shí)，用異丙醇置換系統(tǒng)內(nèi)的儲(chǔ)存流動(dòng)相后在接柱子。
8.在更換兩種互不相溶的流動(dòng)相時(shí)，中間要用異丙醇溶液清洗過(guò)渡。例如：先用甲醇水做流動(dòng)相，然后在用正己烷做流動(dòng)相時(shí)，一定要先用異丙醇溶液沖洗甲醇水，然后用正己烷沖洗異丙醇，反之也是一樣。在更換流動(dòng)相時(shí)還要考慮色譜柱是否更換。
9.儀器在短期（兩三天）不用時(shí)，流路中可以是甲醇或水。儀器在長(zhǎng)期不用時(shí)，流路中應(yīng)用甲醇。
10.對(duì)于UV等檢測(cè)器用于高靈敏度檢測(cè)時(shí)，要使用UV吸收性小的HPLC的溶劑作為流動(dòng)相溶劑，如甲醇、乙腈等。
11.當(dāng)流動(dòng)相溶劑為乙腈時(shí)，流速為1ml/min泵的正常壓力5～7Mpa之間，如果壓力逐漸降低，基線也出現(xiàn)異常。這是由于乙氰的粘性大，導(dǎo)致泵的流速降低?？蛇m當(dāng)提高流速使泵的壓力恢復(fù)正常即可。
12.流動(dòng)相含有濃硫酸、濃硝酸、二氯乙酸、二氯甲烷、丙酮、四氯呋南、二甲化砜等溶劑，會(huì)對(duì)流路中的PEEK樹(shù)脂管路強(qiáng)度變成差、PEEK樹(shù)脂管容易破裂使溶劑外濺。流動(dòng)相含有鹵素離子的溶劑，如KCI、NaCI、NH4CI等。對(duì)流路中的不銹鋼材料有腐蝕作用，以上的溶劑須盡量避免使用。非用不可時(shí)，分析完了后，應(yīng)立刻用蒸餾水把全流路清洗干凈。
13.用于檢定梯度等性能時(shí)，短時(shí)間使用在0.5%以下的低濃度丙酮水溶液是沒(méi)有問(wèn)題的。
14.注意：稀硝酸與甲醇不能混合，否則有可能會(huì)引起爆炸。
三、液相色譜流動(dòng)相的貯存
流動(dòng)相一般貯存于玻璃、聚四氟乙烯或不銹鋼容器內(nèi)，不能貯存在塑料容器中。因許多有機(jī)溶劑如甲醇、乙酸等可浸出塑料表面的增塑劑，導(dǎo)致溶劑受污染。這種被污染的溶劑如用于HPLC系統(tǒng)，可能造成柱效降低。貯存容器一定要蓋嚴(yán)，防止溶劑揮發(fā)引起組成變化，也防止氧和二氧化碳溶入流動(dòng)相。
磷酸鹽、乙酸鹽緩沖液很易長(zhǎng)霉，應(yīng)盡量新鮮配制使用，不要貯存。如確需貯存，可在冰箱內(nèi)冷藏，并在3天內(nèi)使用，用前應(yīng)重新濾過(guò)。容器應(yīng)定期清洗，特別是盛水、緩沖液和混合溶液的瓶子，以除去底部的雜質(zhì)沉淀和可能生長(zhǎng)的微生物。因甲醇有防腐作用，所以盛甲醇的瓶子無(wú)此現(xiàn)象。
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1、液相色譜儀的日常操作條件：溫度：10-40℃；相對(duì)濕度<80％；可以是恒溫、恒濕，遠(yuǎn)離高電干擾、高振動(dòng)設(shè)備。
2、泵的保養(yǎng)：
?。?）使用流動(dòng)相盡量要清潔；
（2）進(jìn)液處的沙芯過(guò)濾頭要經(jīng)常清洗；
?。?）流動(dòng)相交換時(shí)要防止結(jié)晶；
?。?）避免泵內(nèi)堵塞或有氣泡;
3、檢測(cè)器(UV)的保養(yǎng)：
?。?）紫外燈的保養(yǎng)：在2小時(shí)以上不用是關(guān)閉，節(jié)省能量。
?。?）樣品池要沖洗、保養(yǎng)。
4．進(jìn)樣器的保養(yǎng)：
?。?）每次分析結(jié)束后，要反復(fù)沖洗進(jìn)樣口，防止樣品的交叉污染；
（2）平時(shí)應(yīng)注意用二次蒸餾水和甲醇在裝載狀態(tài)及進(jìn)樣分析狀態(tài)清洗；如出現(xiàn)漏液現(xiàn)象，原因極可能為轉(zhuǎn)子密封墊磨損或污染，一般須申請(qǐng)維修或更換配件。
5、色譜柱的保養(yǎng)：
?。?）色譜柱在任何情況下不能碰撞、彎曲或強(qiáng)烈震動(dòng)；
?。?）當(dāng)色譜柱和色譜儀聯(lián)結(jié)時(shí)，閥件或管路一定要清洗干凈；
?。?）要注意流動(dòng)相的脫氣、PH；
?。?）避免使用高粘度的溶劑作為流動(dòng)相；
?。?）進(jìn)樣樣品要提純；
?。?）嚴(yán)格控制進(jìn)樣量；
（7）每天分析工作結(jié)束后，要清洗進(jìn)樣閥中殘留的樣品；
?。?）每天分析測(cè)定結(jié)束后，都要用適當(dāng)?shù)娜軇﹣?lái)清洗柱；
?。?）若分析柱長(zhǎng)期不使用，應(yīng)用適當(dāng)有機(jī)溶劑保存并封閉；
6、工作站：出現(xiàn)死機(jī)可重起計(jì)算機(jī)；不正常運(yùn)行時(shí)，首先可更換電腦測(cè)試其硬件故障；或在本機(jī)上重新插拔接口、重新安裝軟件。
7、流動(dòng)相的抽作要求：二次蒸餾水，緩沖鹽一定要過(guò)濾；流動(dòng)相脫氣至關(guān)重要（可采用抽濾，超聲波脫氣等方法）。緩沖鹽的使用：流動(dòng)相含有鹽分時(shí)，做完實(shí)驗(yàn)后一定要進(jìn)行流路沖洗；首先用水沖洗，打開(kāi)排液閥用PURG鍵轉(zhuǎn)換出原有含鹽的流動(dòng)相，然后關(guān)閉排液閥打開(kāi)泵沖洗全部流路45分鐘以上，如此更換流動(dòng)相為水和甲醇混合液沖洗全部流路30分鐘（此步驟一般可省去，根據(jù)實(shí)驗(yàn)而論），最后更換純甲醇沖洗全部流路45分鐘以上。
8、吸濾頭：特殊情況下可拆下濾頭抽取以判斷其中是否堵塞；亦可用注射器吸取流動(dòng)相通過(guò)吸濾頭打出以判斷其是否堵塞。若有堵塞情況可用異丙醇超聲波清洗；清洗不成功則需要換。
9、過(guò)濾器：當(dāng)色譜峰出現(xiàn)異常情況時(shí)，有可能是此部件被污染，拆下用異丙醇超洗或更換過(guò)濾墊片。
10、單向閥：如遇到泵壓不穩(wěn)或流動(dòng)相不能抽取，則可能是單向閥出現(xiàn)問(wèn)題，卸下用異丙醇超聲波清洗，清洗時(shí)須按其安裝的方向放置在小燒杯中，切記不可與安裝方向倒置超洗！
11、泵頭：泵頭漏液或出現(xiàn)其它故障一般要申請(qǐng)維修（如漏液，或更換柱塞桿及其密封墊等）
12、排液閥：此處不能完全密封或漏液時(shí)一般是其中的墊片污染或磨損，可卸下后取出其墊片用異丙醇超聲波清洗或更換墊圈。
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