檢測(cè)器的作用是將柱流出物中樣品組成和含量的變化轉(zhuǎn)化為可供檢測(cè)的信號(hào)，常用檢測(cè)器有紫外吸收、熒光、示差折光、化學(xué)發(fā)光等?！?/font>
1. 紫外可見(jiàn)吸收檢測(cè)器（ultraviolet－visible detector，UVD）
紫外可見(jiàn)吸收檢測(cè)器（UVD）是HPLC中應(yīng)用廣泛的檢測(cè)器之一，幾乎所有的液相色譜儀都配有這種檢測(cè)器。其特點(diǎn)是靈敏度較高，線性范圍寬，噪聲低，適用于梯度洗脫，對(duì)強(qiáng)吸收物質(zhì)檢測(cè)限可達(dá)1ng，檢測(cè)后不破壞樣品，可用于制備，并能與任何檢測(cè)器串聯(lián)使用。紫外可見(jiàn)檢測(cè)器的工作原理與結(jié)構(gòu)同一般分光光度計(jì)相似，實(shí)際上就是裝有流動(dòng)地的紫外可見(jiàn)光度計(jì)。
（1）紫外吸收檢測(cè)器
紫外吸收檢測(cè)器常用氘燈作光源，氘燈則發(fā)射出紫外-可見(jiàn)區(qū)范圍的連續(xù)波長(zhǎng)，并安裝一個(gè)光柵型單色器，其波長(zhǎng)選擇范圍寬（190nm～800nm）。它有兩個(gè)流通池，一個(gè)作參比，一個(gè)作測(cè)量用，光源發(fā)出的紫外光照射到流通池上，若兩流通池都通過(guò)純的均勻溶劑，則它們?cè)谧贤獠ㄩL(zhǎng)下幾乎無(wú)吸收，光電管上接受到的輻射強(qiáng)度相等，無(wú)信號(hào)輸出。當(dāng)組分進(jìn)入測(cè)量池時(shí)，吸收一定的紫外光，使兩光電管接受到的輻射強(qiáng)度不等，這時(shí)有信號(hào)輸出，輸出信號(hào)大小與組分濃度有關(guān)。
局限：流動(dòng)相的選擇受到一定限制，即具有一定紫外吸收的溶劑不能做流動(dòng)相，每種溶劑都有截止波長(zhǎng)，當(dāng)小于該截止波長(zhǎng)的紫外光通過(guò)溶劑時(shí)，溶劑的透光率降至10%以下，因此，紫外吸收檢測(cè)器的工作波長(zhǎng)不能小于溶劑的截止波長(zhǎng)。
（2）光電二極管陣列檢測(cè)器（photodiode array detector， PDAD）
也稱(chēng)快速掃描紫外可見(jiàn)分光檢測(cè)器，是一種新型的光吸收式檢測(cè)器。它采用光電二極管陣列作為檢測(cè)元件，構(gòu)成多通道并行工作，同時(shí)檢測(cè)由光柵分光，再入射到陣列式接收器上的全部波長(zhǎng)的光信號(hào)，然后對(duì)二極管陣列快速掃描采集數(shù)據(jù)，得到吸收值(A)是保留時(shí)間(tR)和波長(zhǎng)(l)函數(shù)的三維色譜光譜圖。由此可及時(shí)觀察與每一組分的色譜圖相應(yīng)的光譜數(shù)據(jù)，從而迅速?zèng)Q定具有較佳選擇性和靈敏度的波長(zhǎng)。
單光束二極管陣列檢測(cè)器，光源發(fā)出的光先通過(guò)檢測(cè)池，透射光由全息光柵色散成多色光，射到陣列元件上，使所有波長(zhǎng)的光在接收器上同時(shí)被檢測(cè)。陣列式接收器上的光信號(hào)用電子學(xué)的方法快速掃描提取出來(lái)，每幅圖象僅需要10ms，遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過(guò)色譜流出峰的速度，因此可隨峰掃描。
2．熒光檢測(cè)器（fluorescence detector， FD）
熒光檢測(cè)器是一種高靈敏度、有選擇性的檢測(cè)器，可檢測(cè)能產(chǎn)生熒光的化合物。某些不發(fā)熒光的物質(zhì)可通過(guò)化學(xué)衍生化生成熒光衍生物，再進(jìn)行熒光檢測(cè)。其最小檢測(cè)濃度可達(dá)0.1ng／ml，適用于痕量分析；一般情況下熒光檢測(cè)器的靈敏度比紫外檢測(cè)器約高2個(gè)數(shù)量級(jí)，但其線性范圍不如紫外檢測(cè)器寬?！ 〗陙?lái)，采用激光作為熒光檢測(cè)器的光源而產(chǎn)生的激光誘導(dǎo)熒光檢測(cè)器極大地增強(qiáng)了熒光檢測(cè)的信噪比，因而具有很高的靈敏度，在痕量和超痕量分析中得到廣泛應(yīng)用。
3. 示差折光檢測(cè)器（differential refractive Index detector， RID）
示差折光檢測(cè)器是一種濃度型通用檢測(cè)器，對(duì)所有溶質(zhì)都有響應(yīng)，某些不能用選擇性檢測(cè)器檢測(cè)的組分，如高分子化合物、糖類(lèi)、脂肪烷烴等，可用示差檢測(cè)器檢測(cè)。示差檢測(cè)器是基于連續(xù)測(cè)定樣品流路和參比流路之間折射率的變化來(lái)測(cè)定樣品含量的。光從一種介質(zhì)進(jìn)入另一種介質(zhì)時(shí)，由于兩種物質(zhì)的折射率不同就會(huì)產(chǎn)生折射。只要樣品組分與流動(dòng)相的折光指數(shù)不同，就可被檢測(cè)，二者相差愈大，靈敏度愈高，在一定濃度范圍內(nèi)檢測(cè)器的輸出與溶質(zhì)濃度成正比。
4. 電化學(xué)檢測(cè)器 （elec）chemical detector， ED）
電化學(xué)檢測(cè)器主要有安培、極譜、庫(kù)侖、電位、電導(dǎo)等檢測(cè)器，屬選擇性檢測(cè)器，可檢測(cè)具有電活性的化合物。目前它已在各種無(wú)機(jī)和有機(jī)陰陽(yáng)離子、生物組織和體液的代謝物、食品添加劑、環(huán)境污染物、生化制品、農(nóng)藥及醫(yī)藥等的測(cè)定中獲得了廣泛的應(yīng)用。其中，電導(dǎo)檢測(cè)器在離子色譜中應(yīng)用較多。
電化學(xué)檢測(cè)器的優(yōu)點(diǎn)是：
①靈敏度高，最小檢測(cè)量～般為ng級(jí)，有目可達(dá)pg級(jí)；
②選擇性好，可測(cè)定大量非電活性物質(zhì)中極痕量的電活性物質(zhì)；
③線性范圍寬，一般為4～5個(gè)數(shù)量級(jí)；
④設(shè)備簡(jiǎn)單，成本較低；
⑤易于自動(dòng)操作。
5. 化學(xué)發(fā)光檢測(cè)器 （c。iluminescence detector， CD）
化學(xué)發(fā)光檢測(cè)器是近年來(lái)發(fā)展起來(lái)的一種快速、靈敏的新型檢測(cè)器，因其設(shè)備簡(jiǎn)單、價(jià)廉、線性范圍寬等優(yōu)點(diǎn)。其原理是基于某些物質(zhì)在常溫下進(jìn)行化學(xué)反應(yīng)，生成處于激發(fā)態(tài)勢(shì)反應(yīng)中間體或反應(yīng)產(chǎn)物，當(dāng)它們從激發(fā)態(tài)返回基態(tài)時(shí)，就發(fā)射出光子。由于物質(zhì)激發(fā)態(tài)的能量是來(lái)自化學(xué)反應(yīng)，故叫作化學(xué)發(fā)光。當(dāng)分離組分從色譜柱中洗脫出來(lái)后，立即與適當(dāng)?shù)幕瘜W(xué)發(fā)光試劑混合，引起化學(xué)反應(yīng)，導(dǎo)致發(fā)光物質(zhì)產(chǎn)生輻射，其光強(qiáng)度與該物質(zhì)的濃度成正比。
這種檢測(cè)器不需要光源，也不需要復(fù)雜的光學(xué)系統(tǒng)，只要有恒流泵，將化學(xué)發(fā)光試劑以一定的流速泵入混合器中，使之與柱流出物迅速而又均勻地混合產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光，通過(guò)光電倍增管將光信號(hào)變成電信號(hào)，就可進(jìn)行檢測(cè)。這種檢測(cè)器的最小檢出量可達(dá)10-12g。
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相關(guān)熱詞：
等離子清洗機(jī),反應(yīng)釜,旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀,高精度溫濕度計(jì),露點(diǎn)儀,高效液相色譜儀價(jià)格,霉菌試驗(yàn)箱,跌落試驗(yàn)臺(tái),離子色譜儀價(jià)格,噪聲計(jì),高壓滅菌器,集菌儀,接地電阻測(cè)試儀型號(hào),柱溫箱,旋渦混合儀,電熱套,場(chǎng)強(qiáng)儀萬(wàn)能材料試驗(yàn)機(jī)價(jià)格,洗瓶機(jī),勻漿機(jī),耐候試驗(yàn)箱,熔融指數(shù)儀,透射電子顯微鏡。
液相色譜法是一種以液體為流動(dòng)相的色譜法，液相色譜法是現(xiàn)在應(yīng)用十分廣泛的一種液相色譜法，這種方法是20世紀(jì)60年代興起的，經(jīng)過(guò)不斷的完善和發(fā)展，現(xiàn)已被應(yīng)用于各個(gè)領(lǐng)域。在醫(yī)藥分析領(lǐng)域，液相檢驗(yàn)的應(yīng)用已經(jīng)普及，而液相色譜法作為液相檢驗(yàn)中的一種重要手段，也得到了大力的推廣與應(yīng)用，目前實(shí)驗(yàn)室常用的P230液相色譜儀。
液相色譜法及其系統(tǒng)構(gòu)造
液相色譜法是以經(jīng)典液相色譜法為基礎(chǔ)，通過(guò)引入氣相色譜理論而迅速發(fā)展起來(lái)的。區(qū)別于經(jīng)典液相色譜法柱效低、時(shí)間長(zhǎng)的特點(diǎn)，液相色譜法采用了高壓泵、固定相和高靈敏度檢測(cè)器等技術(shù)，因此其檢測(cè)有高壓、高速、、高靈敏度、檢驗(yàn)速度快、分辨率高等特點(diǎn)，更適宜于分離、分析熱穩(wěn)定性差、高沸點(diǎn)、有生理活性及相對(duì)分子量比較大的物質(zhì)。
HPLC系統(tǒng)一般由輸液泵、進(jìn)樣器、色譜柱、溶劑貯存器、檢測(cè)器、檢測(cè)數(shù)據(jù)記錄器等組成。其中輸液泵、色譜柱和檢測(cè)器關(guān)鍵。制備型HPLC儀有餾分收集裝置。新型HPLC儀增加了微機(jī)控制，可進(jìn)行自動(dòng)化儀器控制和數(shù)據(jù)處理。
輸液泵性能的好壞直接影響分析結(jié)果的可靠性，好的輸液泵應(yīng)具備輸出壓力高，流量穩(wěn)定、耐腐蝕，密封性能好，液缸容積小等特點(diǎn)；HPLC進(jìn)樣方式可分為：隔膜進(jìn)樣、閥進(jìn)樣、停流進(jìn)樣、自動(dòng)進(jìn)樣，進(jìn)樣裝置需要：密封性能好，重復(fù)性好，死體積小，對(duì)色譜系統(tǒng)的壓力、流量影響小；色譜柱擔(dān)負(fù)分離作用，是色譜系統(tǒng)的心臟，在選擇色譜柱時(shí)要注意選擇柱效高、選擇性好，分析速度快的色譜柱；檢測(cè)器是把洗脫液中組分的量轉(zhuǎn)變?yōu)殡娦盘?hào)，其要求線性范圍寬、靈敏度高、重復(fù)性好、噪音低和適用范圍廣。
液相色譜的原理及分類(lèi)
液相色譜的原理主要依靠分離機(jī)制，其分離方法有多種，相應(yīng)的分離機(jī)制也不同。根據(jù)分離機(jī)制的不同主要有四種基本類(lèi)型色譜法：吸附色譜、分配色譜、分子排阻色譜及離子交換色譜法，其他還有膠束色譜法、化學(xué)鍵合色譜法及親和色譜法等類(lèi)別。在液相檢驗(yàn)中，分離是核心，而色譜是一種分離分析手段。無(wú)論是那種分離方法，其分離原理都是一個(gè)物理過(guò)程，與液相層析的原理相似：將要檢測(cè)分析的化合物通過(guò)進(jìn)樣器放入液相色譜儀，流動(dòng)相攜帶著其流過(guò)色譜柱，由于不同物質(zhì)在固定相上的保留時(shí)間不同出現(xiàn)的峰高或者峰面積定量以及出峰時(shí)間的不同而達(dá)到分離，從而或檢測(cè)藥物中不同成分的含量、或分析藥效，或測(cè)定藥物殘留物雜質(zhì)成分的濃度。
藥物含量檢驗(yàn)中液相色譜的應(yīng)用
藥物含量檢驗(yàn)中定量分析的準(zhǔn)確與否，關(guān)鍵在于檢測(cè)器所產(chǎn)生的信號(hào)是否與被測(cè)樣品的量始終呈一定的函數(shù)關(guān)系。液相色譜儀可使輸出信號(hào)與樣品量好呈線性關(guān)系，這樣進(jìn)行定藥物含量測(cè)定時(shí)既準(zhǔn)確又方便。
例如，示差檢測(cè)法就是用液相色譜測(cè)定多糖類(lèi)藥物，用電化學(xué)檢測(cè)器檢測(cè)的陰離子交換柱分離出多糖類(lèi)藥物，這種方法優(yōu)于傳統(tǒng)檢驗(yàn)法，可直接對(duì)低濃度糖作定量分析，不需衍生和樣品處理，在節(jié)約時(shí)間和資金的同時(shí)避免了有毒衍生試劑的使用。在檢驗(yàn)中不同類(lèi)型的糖(如單糖、糖胺聚糖、半乳糖、果糖等)適用于不同的離子交換柱。
藥效檢驗(yàn)中液相色譜的應(yīng)用
藥物的治療效果取決于人體對(duì)藥物的吸收，與藥物成分及其代謝物在血液中的濃度有關(guān)。隨著現(xiàn)代藥物的選擇性越來(lái)越高，所服用的劑量越來(lái)越低，這就需要提高藥效?，F(xiàn)階段藥效臨床試驗(yàn)中采用人肝組織，選擇液相色譜法檢測(cè)藥性藥效，對(duì)混合物中微量組分進(jìn)行結(jié)構(gòu)分析，可搭配固定相和流動(dòng)相以達(dá)到好的分離效果。
例如，用內(nèi)標(biāo)法檢測(cè)血液中藥物濃度的總量限度。內(nèi)標(biāo)法是液相色譜的一種常用測(cè)定方法。首先提取血液，然后根據(jù)規(guī)定的方法配制不含藥物的溶液，注入到液相色譜儀中，記錄為色譜圖I，然后再配制含有藥物的溶液，以相同的條件注樣，記錄為色譜圖II。然后將圖I與圖II進(jìn)行比較，則可以通過(guò)雜質(zhì)峰確認(rèn)雜質(zhì)峰的面積，從而達(dá)到檢驗(yàn)的效果。
藥物殘留中液相色譜的應(yīng)用
通常藥物在使用一段時(shí)間后在體內(nèi)產(chǎn)生殘留物會(huì)影響認(rèn)得某些生理功能，也就是人們所說(shuō)的食藥三分毒，如何分析藥物殘留物成分，減少其引起的不必要危害，液相色譜法起到了重要的作用。質(zhì)譜儀是完成藥物代謝物毒性鑒定的主要工具，是制藥工業(yè)中毒理學(xué)試驗(yàn)的基礎(chǔ)。
今后的醫(yī)藥分析檢驗(yàn)研究中，可以應(yīng)用液相色譜法不受試樣揮發(fā)性限制等優(yōu)點(diǎn)，結(jié)合其它的先進(jìn)技術(shù)，如色譜——光譜聯(lián)用、柱切換技術(shù)、傅立葉變換紅外線吸收光譜聯(lián)用等，不斷提高液相色譜在液相檢驗(yàn)中的應(yīng)用。
液相色譜儀的基本故障
1、柱壓高原因
(1)緩沖液鹽分如(乙酸銨等)沉積于柱內(nèi)；
(2)樣品污染沉積。處理對(duì)于第一種情況先用40～50℃的純水，低速正向沖洗柱子，待柱壓逐漸下降后，相應(yīng)提高流速?zèng)_洗，柱壓大幅度下降后，用常溫純水沖洗，之后用純甲醇沖洗柱子30分鐘；對(duì)于第二種情況，由樣品的沉積引起污染的C18柱，和純水反向沖洗柱子，然后換成甲醇沖洗，接著用甲醇+異丙醇(4+6)沖洗柱子(沖洗時(shí)間的長(zhǎng)短由樣品污染的情況而定)，再用換成甲醇沖洗，然后用純水沖洗，最后甲醇沖洗正向沖洗柱子30分鐘以上。
2、氣泡溢出
流動(dòng)相內(nèi)有氣泡，關(guān)閉泵，打開(kāi)泄壓閥，打開(kāi)purg鍵，清洗脫氣，氣泡不斷從過(guò)濾器冒出，進(jìn)入流動(dòng)相，無(wú)論打開(kāi)purge鍵幾次，都無(wú)法清除不斷產(chǎn)生的氣泡。原因過(guò)濾器長(zhǎng)期沉浸于乙酸銨等緩沖液內(nèi)，過(guò)濾器內(nèi)部由于霉菌的生長(zhǎng)繁殖，形成菌團(tuán)，阻塞了過(guò)濾器，緩沖液難以流暢地通過(guò)過(guò)濾器，空氣在泵的壓力作用下經(jīng)過(guò)濾器進(jìn)入流動(dòng)相。處理過(guò)濾器浸泡于5%硝酸溶液中，超聲清洗幾分鐘即可；亦可將過(guò)濾器浸泡于5%硝酸溶液中12～36小時(shí)，輕輕震蕩幾次，再將過(guò)濾器用純水清洗幾次，打開(kāi)泄壓閥，打開(kāi)purge鍵清洗脫氣，如仍有氣泡不斷從過(guò)濾器冒出，繼續(xù)將過(guò)濾器浸泡于5%硝酸溶液中，如沒(méi)有氣泡不斷從過(guò)濾器中冒出，說(shuō)明過(guò)濾器內(nèi)部的霉菌菌團(tuán)已被硝酸破壞，流動(dòng)相可以流暢地通過(guò)過(guò)濾器。打開(kāi)泄壓閥，打開(kāi)泵，流速調(diào)至1.0～3.0ml/min，純水沖洗過(guò)濾器1小時(shí)左右。即可將過(guò)濾器清洗干凈。關(guān)閉泄壓閥，純甲醇沖洗半小時(shí)即可。
3、既無(wú)壓力指示，又無(wú)液體流過(guò)
(1)泵密封墊圈磨損；
(2)大量氣泡進(jìn)入泵體；
處理對(duì)于第一種情況，更換密封墊圈；對(duì)于第二種情況，在泵作用的同時(shí)，用一個(gè)50ml的玻璃針筒在泵的出口處幫助抽出空氣。
4、壓力波動(dòng)大，流量不穩(wěn)定
原因系統(tǒng)中有空氣或者單向閥的寶石球和閥座之間夾有異物，使得兩者不能密封。處理工作中注意觀察流動(dòng)相的量，保證不銹鋼濾器沉入儲(chǔ)液器瓶底，避免吸入空氣，流動(dòng)相要充分脫氣。如為單向閥和閥座之間夾有異物，拆下單向閥，放入盛有丙酮的燒杯用超聲波清洗。
5、出峰不佳，峰分叉
(1)色譜柱被污染；
(2)柱頭填料塌陷；
處理對(duì)于第一種情況，先用純水反向沖洗柱子，然后換成甲醇沖洗，接著用甲醇+異丙醇(4+6)沖洗柱子(沖洗時(shí)間的長(zhǎng)短由樣品污染的情況而定)，再換成甲醇沖洗，然后用純水沖洗，最后甲醇沖洗正向沖洗柱子30分鐘以上。如沖洗后依然出峰不佳，則考慮第二種情況。對(duì)于第二種情況，擰開(kāi)柱頭，檢查柱填料是否硬結(jié)或塌陷。去除硬結(jié)部分(污染的填料)，裝入新填料，滴一滴甲醇，填料下陷，再填，用與柱內(nèi)徑相同的頂端平滑的不銹鋼桿壓緊，再填平，滴甲醇，再壓緊反復(fù)幾次，直至裝滿(mǎn)填平。柱頭用甲醇沖洗干凈，擦凈柱外壁的填料，擰緊柱頭，用純甲醇沖洗30分鐘以上。
6、峰面積重復(fù)性不佳
(1)進(jìn)樣閥漏液；
(2)加樣針不到位。
(3)液量不足.
以上就是液相色譜儀的基本故障，希望此文能夠給您帶來(lái)幫助，如有需要的可以關(guān)注我們。
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