高效色譜儀色譜柱的使用事項包括色譜柱的平衡、再生和維護等。
一、色譜柱的平衡：
高效液相色譜儀反相色譜柱是保存在乙腈中，新柱應先用10～20倍柱體積的甲醇或乙腈沖洗色譜柱，一定確保分析樣品所使用的流動相與乙腈－水互溶。每天用足夠的時間以流動相平衡色譜柱，會在處理問題方面獲得最大的“補償”，而且色譜柱的壽命會變得更長。
平衡操作步驟：
1、平衡開始時，將流速緩慢提高，用流動相平衡色譜柱直到獲得穩(wěn)定的基線。緩沖鹽或離子對試劑流速如果較低，需要較長時間來平衡。
2、如果使用的流動相中含有緩沖鹽，應注意用純水“過渡”。即每天分析開始前，必須先用純水沖洗30min以上，再用緩沖鹽流動相平衡。分析結束后，必須先用純水沖洗30min以上，除去緩沖鹽之后，再用甲醇沖洗30min保護色譜柱。
二、色譜柱的再生：
1、建議用來沖洗色譜柱的溶劑體積：
（1）Ф4×125mm色譜柱：
柱體積為1.6mL，所用溶劑體積為30mL。
（2）Ф4×250mm色譜柱：
柱體積為3.2mL，所用溶劑體積為60mL。
（3）Ф10×250mm色譜柱：
柱體積為20mL，所用溶劑體積為400mL。
2、再生方法：
（1）極性固定相的再生：
正庚烷，乙酸乙酯，丙酮，乙醇，水。
（2）非極性固定相的再生：
水，異丙醇，乙腈，水。
3、注意事項：
（1）在對用NH2改性的色譜柱進行再生時，由于NH2可能以銨根離子形式存在，因此應在水洗后用0.1M的氨水沖洗，然后用水沖洗至堿溶液完全流出。
（2）如果用有機溶劑－水不能完全洗去硅膠表面吸附的雜質(zhì)，在水洗后加用0.05M的稀硫酸沖洗非常有效。
三、色譜柱的維護：
1、使用預柱、保護柱和分析柱。硅膠在極性流動相和離子性流動相中有一定的溶解度。
2、大多數(shù)反相色譜柱的pH值穩(wěn)定范圍是2～7.5，盡量不超過該色譜柱的pH值范圍。
3、避免流動相組成和極性的劇烈變化。
4、流動相使用前必須經(jīng)脫氣和過濾處理。
5、如果使用極性或離子性緩沖溶液作流動相，應在實驗完畢后沖洗干凈色譜柱，并保存于甲醇或乙腈中。
6、氯化物溶劑對色譜柱有一定腐蝕，柱和連接管內(nèi)不能長時間存留此類溶劑，以避免腐蝕。
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在色譜儀出現(xiàn)基線不穩(wěn)故障時，首先要搞清楚色譜儀氣路是否存在污染現(xiàn)象。這不但是因為氣路中氣流不干凈能直接影響基線的穩(wěn)定性，而且更為普遍的是在氣路中不干凈的條件下，許多本來在氣路干凈時對基線穩(wěn)定性影響很小的因素（如氣流流量變化、控溫波動等）對基線的穩(wěn)定性影響卻會突然增大。這就是氣路污染與其它不穩(wěn)定性的交互作用。
下面步驟是在確定氣路存在污染的前提下，對氣路采取的一系列措施，引起污染的原因有三種，即固定相流失、氣路管路被雜質(zhì)玷污及載氣不純。為了更進一步區(qū)分故障根源，可按下述檢查步驟進行之：
（1）降低柱溫。
由于色譜柱中固定液的流失量與柱溫是指數(shù)式關系。因此降低柱溫將能大幅度減少固定液的流失量。如在柱溫下降時基線變穩(wěn)，則說明柱流失原來太大，需根據(jù)具體分析條件進一步處理。
（2）是否允許柱子有較大的流失。
在某些分析方法的限定下，不得不允許柱子有一定的流失，這時可考慮適當提高儀器其它部分的穩(wěn)定性，使整個分析方法能得以實現(xiàn)。
（3）對柱流失大進行處理。
首先應懷疑柱子是否充分老化，這可在升高柱溫條件下進一步老化色譜柱后，在操作溫度下觀察基線能否變好而加以證實。如老化處理無明顯效果，可在柱溫處于150℃以上條件下，注入幾針蒸餾水作清洗試驗（每針進水量可在10~20微升左右）。在用水蒸氣清洗之后，如有效果，可認為色譜柱有雜質(zhì)污染；如水蒸氣清洗無效果，須考慮更換新的色譜柱了。
（4）柱后氣路試漏。
色譜柱到熱導檢測器之間的管路，包括熱導檢測器本身的氣路不應有泄漏。如該處有泄漏，空氣中的氧氣將會從泄漏處滲到氣路中去，影響基線穩(wěn)定性，嚴重的會腐蝕鎢絲，使之受到永久性損傷。柱后試漏的方法十分簡單，只要堵住熱導池出口，觀察相應氣路的流量計轉子是否降到零即可。
（5）更換過濾、凈化器。色譜儀載氣氣路上的過濾、凈化器在使用一段時期之后要活化或更換。
在載氣氣源不干凈時更應及時換新。在過濾、凈化器換新之后再觀察基線穩(wěn)定性的變化情況。如基線明顯變好說明載氣純度不夠，或者是過濾、凈化器失效。
（6）載氣不純。
盡管純度不高的氣源經(jīng)過一個良好的過濾、凈化器之后，可以作為一個雜質(zhì)含量少的高一級氣源而使用。但是這樣會影響過濾、凈化器的使用期限，而且氣源所含雜質(zhì)愈多，過濾、凈化器可使用的期限愈短。因此，徹底的辦法還是選用純度高的載氣氣源并附加上有效的過濾、凈化器。這樣可保證基線盡可能的穩(wěn)定，而其正常應用期限可達一年之久。
（7）清洗氣路管路玷污。
清洗氣路管路的玷污時可先進行蒸餾水或乙醇的注樣清洗。方法是使整個系統(tǒng)升溫到150℃以上，再在進樣器多次用注射器注入10~20微升的蒸餾水或乙醇，待相應的峰出完后，觀察基線的穩(wěn)定性。如基線明顯變好，可認為管路僅有輕微的玷污，仍可繼續(xù)使用；如基線穩(wěn)定性無變化或變化不大，則應考慮對管路的徹底清洗。在氣路中進樣口、柱子到熱導池間的連接管以及熱導池池腔是很容易被污染的，因此在清洗時要重點處理。
（8）空氣滲入檢測器。
柱后氣路的微小泄漏是造成空氣中氧氣滲入到熱導檢測器中去的根本原因。這大部分發(fā)生在連接管接頭和鎢絲元件的安裝處，對于該部分漏氣的修復方法參見前述氣路泄漏的檢查與排除。
根據(jù)分析對象，色譜柱的類型，操作儀器的擋次和具體檢測器，若使用不合要求的低純度氣體，不良影響有以下幾種可能：
1）樣品失真或消失：如H2O氣使氯硅樣品水解；
2）色譜柱失效：H2O，CO2使分子篩柱失去活性，H2O氣使聚脂類固定液分解，O2使PEG斷鏈。
3）有時某些氣體雜質(zhì)和固定液相互作用而產(chǎn)生假峰；
4）對柱保留特性的影響：如：H2O對聚乙二醇等親水性固定液的保留指數(shù)會有所增加，載氣中氧含量過高時，無論是極性或是非極性固定液柱的保留特性，都會產(chǎn)生變化，使用時間越長影響越大。
5）檢測器：
TCD：信噪比減小，無法調(diào)零，線性變窄，文獻中的校正因子不能使用，氧含量過大，使元件在高溫時加速老化，減少壽命。
FID：特別是在Dt≤1Ⅹ10ˉ⒒/秒下操做時，CH4等有機雜質(zhì)，會使基流激增，噪聲加大不能進行微量分析。
ECD：載氣中的氧和水對檢測器的正常工作影響最大，在不同的供電工作方式中，脈沖供電比直流電壓供電影響大，固定基流脈沖調(diào)制式供電比脈沖供電影響大。這就是為什么目前諸多在操作固定基流脈沖調(diào)制式ECD時，在載氣純度低時必須把載氣純度選擇開關從“標準氮”撥到“一般氮”位置的原因。大家會發(fā)現(xiàn)在此情況下操作，不但靈敏度變低，而且線性亦變窄了。實踐證明：在操作ECD時，載氣中的水含量低于0.02ppm,氧低于1ppm時可達到較理想的性能。值得指出的是,我們多次發(fā)現(xiàn)由于儀器的調(diào)節(jié)氣路系統(tǒng)被污染而造成的對載氣的二次污染至使ECD基頻大幅度增加使信燥比減小。
FPD和NPD等常用檢測器,由于他們屬于選擇性檢測器,操做時要根據(jù)分析要求,特別注意被測敏感物質(zhì)中雜質(zhì)的去除。
6）在做程序升溫操作時,載氣中的某些雜質(zhì),在低溫時保留在色譜柱中,當拄溫升高時不但引起基線漂移還可能在譜圖上出現(xiàn)比較寬的"假峰"。
7）儀器影響
a.各類過濾器加速失效;
b.調(diào)節(jié)閥（穩(wěn)壓閥,穩(wěn)流閥,針形閥）被污染,氣阻堵塞,調(diào)節(jié)精度降低或失靈；
c.氣路系統(tǒng)被污染,若要恢復儀器在高靈敏度情況下操做,有時要吹洗很長時間（可能一周以上）污染嚴重時有時再也無法恢復。
d.檢測器的壽命,實踐表明,對ECD和TCD的壽命影響最明顯，應引起用戶特別注意
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