液相色譜儀作為分析實驗室高端必備儀器之一，是實驗室分析員應(yīng)用頻率較高的儀器，縱然是經(jīng)常使用的經(jīng)驗豐富的老司機在使用過程里不可避免的還是往往疏忽一些問題，從而導(dǎo)致一些儀器的故障。方便快速的分析過程固然重要，但是為了多種樣品而忽略了一些細節(jié)步驟，總是會犯些錯。在使用液相色譜儀時四大關(guān)鍵因素，對正確使用極為重要，下面給大家說說：
1、液相色譜儀本身：
對于儀器本身一般不會有問題，特別是剛買回來的新儀器。對于儀器本身重要的就是儀器的校驗，剛買回來的儀器一般都是由賣家先對儀器做系統(tǒng)的確認工作（包括IQ、PQ、OQ），確認順利通過后，再請國家或省級儀器檢定局的來校驗，檢定合格后就可以放心使用了，除此之外，一些做得好的公司每半年會對儀器進行一次的內(nèi)部校驗，目的就是為了保證儀器的正?？蛇\行狀態(tài)。
2、色譜條件：
色譜條件一般包括流動相、色譜柱、檢測波長、流速及進樣量。
流動相就涉及到配制流動相所用到的水和試劑試液，水一般要求用超純水或其他水的電阻率不大于18、2兆歐級別，試劑試液要求用色譜級別的，原因為防止水和試劑試液中的雜質(zhì)對色譜結(jié)果的干擾。
色譜柱會因不同的品種而有不同的要求，但每根色譜柱都有它的清洗要求，這個在色譜柱說明書上都可以找到，一定要根據(jù)上面的要求進行，否則會造成色譜柱效下降和色譜柱的使用壽命縮短，檢測波長也會因品種的不同有不同的要求，這里需要指出的是要注意觀察檢測器氘燈能量的變化，比如基線波動大，活性成分的響應(yīng)值突然變小等，都有可能是氘燈的能量不足所引起的，氘燈一般建議使用800小時，但實際上使用時間不止，可根據(jù)實際情況更換。
流速也因品種的不同而不同，一般為1、0ml/min，流速是不可隨意改動的，特別是作為QC人員，但是作為研發(fā)人員，有時為了摸索條件或進行方法耐用性驗證，會對流速進行改變以評價方法的適用性。對于進樣量因不同的品種也有不同規(guī)定，如果使用六通閥自動進樣，一般進樣精密度都很好，不需強調(diào)什么。
3、操作人員：
首先，作為液相色譜儀操作人員，一定要認真學(xué)習液相的說明書，掌握液相硬件和軟件的操作，掌握日常的維護保養(yǎng)，掌握最基礎(chǔ)故障的排除和維修。
一般液相色譜儀的操作規(guī)程也是有操作人員起草的，所以只要嚴格按照操作要求進行操作，一般不會出現(xiàn)問題，當然這里需要特別指出的是對于液相的日常維護保養(yǎng)很重要，比如流動相的過濾、脫氣、泵密封墊的清洗、系統(tǒng)管路的清洗、溶劑過濾頭的清洗等，倘若不堅持，很容易導(dǎo)致色譜柱堵塞、系統(tǒng)壓力過強、色譜峰異常等不必要的故障，浪費時間。
其次，操作人員在配制液相色譜儀分析用待測樣品溶液時，由同一個人單獨完成，以免不必要的偶然誤差從而造成分析的失敗或誤差。
4、液相安裝環(huán)境：
液相色譜儀應(yīng)盡量安裝于水平、遠離振動、電磁干擾的屋內(nèi)的臺面上，有條件的話盡量將液相數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)分隔開，一個是防止色譜基線噪音偏大，基線不穩(wěn)等，一個是為減少對人體的危害。
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液相色譜法是一種以液體為流動相的色譜法，液相色譜法是現(xiàn)在應(yīng)用十分廣泛的一種液相色譜法，這種方法是20世紀60年代興起的，經(jīng)過不斷的完善和發(fā)展，現(xiàn)已被應(yīng)用于各個領(lǐng)域。在醫(yī)藥分析領(lǐng)域，液相檢驗的應(yīng)用已經(jīng)普及，而液相色譜法作為液相檢驗中的一種重要手段，也得到了大力的推廣與應(yīng)用，目前實驗室常用的P230液相色譜儀。
液相色譜法及其系統(tǒng)構(gòu)造
液相色譜法是以經(jīng)典液相色譜法為基礎(chǔ)，通過引入氣相色譜理論而迅速發(fā)展起來的。區(qū)別于經(jīng)典液相色譜法柱效低、時間長的特點，液相色譜法采用了高壓泵、固定相和高靈敏度檢測器等技術(shù)，因此其檢測有高壓、高速、、高靈敏度、檢驗速度快、分辨率高等特點，更適宜于分離、分析熱穩(wěn)定性差、高沸點、有生理活性及相對分子量比較大的物質(zhì)。
HPLC系統(tǒng)一般由輸液泵、進樣器、色譜柱、溶劑貯存器、檢測器、檢測數(shù)據(jù)記錄器等組成。其中輸液泵、色譜柱和檢測器關(guān)鍵。制備型HPLC儀有餾分收集裝置。新型HPLC儀增加了微機控制，可進行自動化儀器控制和數(shù)據(jù)處理。
輸液泵性能的好壞直接影響分析結(jié)果的可靠性，好的輸液泵應(yīng)具備輸出壓力高，流量穩(wěn)定、耐腐蝕，密封性能好，液缸容積小等特點；HPLC進樣方式可分為：隔膜進樣、閥進樣、停流進樣、自動進樣，進樣裝置需要：密封性能好，重復(fù)性好，死體積小，對色譜系統(tǒng)的壓力、流量影響??；色譜柱擔負分離作用，是色譜系統(tǒng)的心臟，在選擇色譜柱時要注意選擇柱效高、選擇性好，分析速度快的色譜柱；檢測器是把洗脫液中組分的量轉(zhuǎn)變?yōu)殡娦盘?，其要求線性范圍寬、靈敏度高、重復(fù)性好、噪音低和適用范圍廣。
液相色譜的原理及分類
液相色譜的原理主要依靠分離機制，其分離方法有多種，相應(yīng)的分離機制也不同。根據(jù)分離機制的不同主要有四種基本類型色譜法：吸附色譜、分配色譜、分子排阻色譜及離子交換色譜法，其他還有膠束色譜法、化學(xué)鍵合色譜法及親和色譜法等類別。在液相檢驗中，分離是核心，而色譜是一種分離分析手段。無論是那種分離方法，其分離原理都是一個物理過程，與液相層析的原理相似：將要檢測分析的化合物通過進樣器放入液相色譜儀，流動相攜帶著其流過色譜柱，由于不同物質(zhì)在固定相上的保留時間不同出現(xiàn)的峰高或者峰面積定量以及出峰時間的不同而達到分離，從而或檢測藥物中不同成分的含量、或分析藥效，或測定藥物殘留物雜質(zhì)成分的濃度。
藥物含量檢驗中液相色譜的應(yīng)用
藥物含量檢驗中定量分析的準確與否，關(guān)鍵在于檢測器所產(chǎn)生的信號是否與被測樣品的量始終呈一定的函數(shù)關(guān)系。液相色譜儀可使輸出信號與樣品量好呈線性關(guān)系，這樣進行定藥物含量測定時既準確又方便。
例如，示差檢測法就是用液相色譜測定多糖類藥物，用電化學(xué)檢測器檢測的陰離子交換柱分離出多糖類藥物，這種方法優(yōu)于傳統(tǒng)檢驗法，可直接對低濃度糖作定量分析，不需衍生和樣品處理，在節(jié)約時間和資金的同時避免了有毒衍生試劑的使用。在檢驗中不同類型的糖(如單糖、糖胺聚糖、半乳糖、果糖等)適用于不同的離子交換柱。
藥效檢驗中液相色譜的應(yīng)用
藥物的治療效果取決于人體對藥物的吸收，與藥物成分及其代謝物在血液中的濃度有關(guān)。隨著現(xiàn)代藥物的選擇性越來越高，所服用的劑量越來越低，這就需要提高藥效?，F(xiàn)階段藥效臨床試驗中采用人肝組織，選擇液相色譜法檢測藥性藥效，對混合物中微量組分進行結(jié)構(gòu)分析，可搭配固定相和流動相以達到好的分離效果。
例如，用內(nèi)標法檢測血液中藥物濃度的總量限度。內(nèi)標法是液相色譜的一種常用測定方法。首先提取血液，然后根據(jù)規(guī)定的方法配制不含藥物的溶液，注入到液相色譜儀中，記錄為色譜圖I，然后再配制含有藥物的溶液，以相同的條件注樣，記錄為色譜圖II。然后將圖I與圖II進行比較，則可以通過雜質(zhì)峰確認雜質(zhì)峰的面積，從而達到檢驗的效果。
藥物殘留中液相色譜的應(yīng)用
通常藥物在使用一段時間后在體內(nèi)產(chǎn)生殘留物會影響認得某些生理功能，也就是人們所說的食藥三分毒，如何分析藥物殘留物成分，減少其引起的不必要危害，液相色譜法起到了重要的作用。質(zhì)譜儀是完成藥物代謝物毒性鑒定的主要工具，是制藥工業(yè)中毒理學(xué)試驗的基礎(chǔ)。
今后的醫(yī)藥分析檢驗研究中，可以應(yīng)用液相色譜法不受試樣揮發(fā)性限制等優(yōu)點，結(jié)合其它的先進技術(shù)，如色譜——光譜聯(lián)用、柱切換技術(shù)、傅立葉變換紅外線吸收光譜聯(lián)用等，不斷提高液相色譜在液相檢驗中的應(yīng)用。
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