如何選擇蘭化所氣相色譜柱,我們可以從以下四個方面入手。
1、固定相的選擇
當(dāng)面對一個未知物時,先試用現(xiàn)有GC柱,如果該柱分離不理想,根據(jù)你對樣品的了解,基本原則是分析物與固定相有相似化學(xué)性質(zhì)時才會相互作用。這說明對樣品越了解,越容易找到合適的固定相。
非極性分子——通常僅由C和H組成并且無偶極矩,直聯(lián)(正烷)是常見的非極性化合物的例子。
極性分子——主要由C和H組成同時也有其他原子,如:N、O、P、S或鹵素。樣品包括有醇類、胺類、硫醇類、酮類、有機鹵化物等。
可極化物質(zhì)——主要由C和H組成同時包含不飽和鍵。通常有:炔和芳香族化合物。
如果你的樣品是具有相似的化學(xué)性質(zhì)的非極性組分的混合物,比如大多數(shù)石油餾分中的烴,你可以試用OV-1毛細管色譜柱,它按沸點順序分離。如果你懷疑有芳族化合物,試著用有苯基的SE-52或SE-54柱。極性或可極化組分樣品能夠在中極性和/或可極化固定相色譜柱上進行分析,如有苯基或類似基團固定相,比如OV-17或OV-225柱。如果需要更高極性,可以選用聚乙二醇(PEG)固定相,即通常所說的WAX固定相。
2、長度選擇
一般情況,15m柱用于快速篩選簡單混合物或分子量極高的化合物。30m柱是比較普遍的柱長。超長柱(50、60或100m、150m)用于非常復(fù)雜的樣品。
柱長度在柱性能上不是一個重要參數(shù),例如:加倍柱長,恒溫分析時間則加倍但峰分辨率僅增大約40%。如果分析只是比較好但不是特別好時,有比增加柱長度更好的辦法來改進分析結(jié)果,如考慮更薄的膜,優(yōu)化載氣流量或用程序升溫等。
分析活性極強的組分是一種特殊情況。如果樣品與柱材質(zhì)接觸,那么峰會嚴重拖尾。較厚的膜、相對短的柱可以由于較少的柱材和較厚的固定液體掩蓋其表面以屏蔽活性表面,從而減少相互作用的機會。
3、內(nèi)徑選擇
增加直徑意味著需要更多的固定相,即使厚度不增加,也有較大的樣品容量。同時也意味著降低了分離能力且流失較大。小口徑柱為復(fù)雜樣品提供了所需的分離,但通常因為柱容量低需要分流進樣。如果分離度的降低能夠接受的話,大口徑柱可以避免這一點。當(dāng)樣品容量是主要的考慮因素時,如:氣體、強揮發(fā)性樣品、吹掃和捕集或頂空進樣,大內(nèi)徑甚至PLOT柱可能比較合適。
同時色譜柱內(nèi)徑的選擇中要考慮儀器的限制和要求。填充柱的進樣口可以使用大口徑毛細管柱(0.53mm內(nèi)徑),而小口徑柱就不一定能夠被連接在儀器上使用。毛細管柱的進樣口一般可以用于所有內(nèi)徑范圍的毛細管柱。(0.1mm、0.25mm、0.32mm、0.53mm)直接聯(lián)用的GC/MSD和MSD需要小口徑柱,因為真空泵不能處理大口徑柱的大流量。查明你的整個系統(tǒng)看看你適合那些柱內(nèi)徑的色譜柱。
4、膜厚選擇
薄膜比厚膜洗脫組分快、峰分離好、溫度低。
一般而言,蘭化所氣相色譜柱的膜厚為0.25到0.5μm。對于流出達300℃的大多數(shù)樣品(包括蠟、甘油三脂、甾族化合物等)能夠很好的分析。對于更高的洗脫溫度,可以用0.1μm的液膜。而厚液膜對于低沸點化合物有利,對于流出溫度在100℃~200℃之間的物質(zhì),用1~1.5μm的液膜效果較好。超厚膜(3~5μm)用于分析氣體、溶劑和可吹掃出來的物質(zhì),以增加樣品組分與固定相的相互作用。另一個選擇厚膜的原因是當(dāng)用大口徑柱時保持分離度和保留時間。由于這個原因,大口徑柱都只有厚膜。厚膜的流失較大,溫度極限必須隨膜厚度增加而下降。
綜上所述,我們選擇蘭化所氣相色譜柱時,可以從固定相、長度、內(nèi)徑以及膜厚4個方面來考慮。
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色譜是一種分離分析手段,分離是核心,因此擔(dān)負分離作用的色譜柱是色譜系統(tǒng)的心臟。對色譜柱的要求是柱效高、選擇性好,分析速度快等。市售的用于HPLC的各種微粒填料如多孔硅膠以及以硅膠為基質(zhì)的鍵合相、氧化鋁、有機聚合物微球(包括離子交換樹脂)、多孔碳等,其粒度一般為3,5,7,10μm等,柱效理論值可達5~16萬/米。對于一般的分析只需5000塔板數(shù)的柱效;對于同系物分析,只要500即可;對于較難分離物質(zhì)對則可采用高達2萬的柱子,因此一般10~30cm左右的柱長就能滿足復(fù)雜混合物分析的需要。
在選擇色譜柱規(guī)格時應(yīng)考慮下列因素:
?、偕V柱內(nèi)徑:樣品的上樣要與色譜柱的交叉截面面積相對稱,要選擇色譜柱的內(nèi)徑要適合于樣品的上樣量。
?、谔盍系牧剑涸叫〉牧骄哂性礁叩闹?,但是價格更高,并且?guī)砀叩闹鶋?,要求設(shè)備的硬件具備更高的壓力耐受性。在被測組分的色譜峰與其它色譜峰非??拷鼤r,就需要更高的柱效,此時較小粒徑的色譜填料就顯得非常有用。相反,越大的粒徑則柱效越低,但價格也相對較低,同時對設(shè)備的要求也不高。
③色譜柱長度:越長的色譜柱具有越高的柱效和更高的樣品承載量,但是柱壓將會更高,同時分離時間可能會更長。
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