??? 酶標(biāo)儀的檢測(cè)工作原理是在特定波長(zhǎng)下，檢測(cè)被測(cè)物的吸光值。光是電磁波，波長(zhǎng)100nm～400nm稱為紫外光，400nm～780nm之間的光可被人眼觀察到，大子780nm稱為紅外光。人們只所以能夠看到色彩，是因?yàn)楣庹丈涞轿矬w上被物體反射回來(lái)。綠色植物之所以是綠色，是因?yàn)橹参镂樟斯庵械募t色光譜。
酶標(biāo)儀檢測(cè)單位：
光通過(guò)被檢測(cè)物，前后的能量差異即是被檢測(cè)物吸收掉的能量，特定波長(zhǎng)下，同一種被檢測(cè)物的濃度與被吸收的能量成定量關(guān)系。
檢測(cè)單位用OD值表示， OD是optical delnsity（光密度）的縮寫(xiě)，表示被檢測(cè)物吸收掉的光密度， OD＝1og（1／trans），其中trans為檢測(cè)物的透光值。根據(jù)Bouger-amberT-beer法則，OD值與光強(qiáng)度成下述關(guān)系：
E＝OD=logΙ0/Ι其中E表示被吸收的光密度， Ι0 為在檢測(cè)物之前的光強(qiáng)度，Ι為從被檢測(cè)物出來(lái)的光強(qiáng)度。
OD值由下述公式計(jì)算：
E＝OD=C×D×E
C為檢測(cè)物的濃度
D為檢測(cè)物的厚度
E為摩爾因子
在特定波長(zhǎng)下測(cè)定每一種物質(zhì)都有其特定的波長(zhǎng)，在此波長(zhǎng)下，此物質(zhì)能夠吸收較多的光能量。如果選擇其它的波長(zhǎng)段，就會(huì)造成檢測(cè)結(jié)果的不準(zhǔn)確。因此，在測(cè)定檢測(cè)物時(shí)，我們選擇特定的波長(zhǎng)進(jìn)行檢測(cè)，稱為測(cè)量波
長(zhǎng)。
但是每一種物質(zhì)對(duì)光能量還存在一定的非特異性吸收，為了消除這種非特異性吸收，我們?cè)龠x取一個(gè)參照波長(zhǎng)，以消除這個(gè)不準(zhǔn)確性。在參照波長(zhǎng)下，檢測(cè)物光的吸收最小。檢測(cè)波長(zhǎng)和參照波長(zhǎng)的吸光值之差可以消除非特異性吸收。
Anthos 酶標(biāo)儀檢測(cè)值計(jì)算
儀器中的檢測(cè)器接收透過(guò)被檢測(cè)物的光能量，轉(zhuǎn)換成二進(jìn)位數(shù)字信號(hào)，最大為4095。儀器定義沒(méi)有光源下的透光值為 0％，沒(méi)有檢測(cè)物的透光值為100％。則實(shí)際檢測(cè)中，檢測(cè)物的透光值均在 0％一100％之間。透光值的計(jì)算如下：
T＝（Meas—Min）／（Max—Min）
其中T為透光值， Meas為檢測(cè)的二進(jìn)位數(shù)值， Min為在 0％的情況下檢測(cè)的二進(jìn)位數(shù)值， Max為在100％的情況下檢測(cè)的二進(jìn)位數(shù)值，舉例如下：
MaX=3600 Mn=20 Meas＝30
T=（30-20）/3600-20）＝0．0028
OD＝1og（1/T）=1og（1/0.0028）=2.552
Anthos 酶標(biāo)儀的中心定位
儀器會(huì)自動(dòng)對(duì)酶標(biāo)孔進(jìn)行中心定位，中心定位是要消除酶標(biāo)孔底的凸凹引起的厚薄不均帶來(lái)檢測(cè)的不準(zhǔn)確。在對(duì)每一個(gè)酶標(biāo)儀進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，儀器其實(shí)要進(jìn)行35個(gè)點(diǎn)的測(cè)量，選取最中間的5個(gè)點(diǎn)的均值為本孔的OD值。
光源的參照通道
參照通道是用來(lái)校準(zhǔn)由于電壓不穩(wěn)或燈泡磨損帶來(lái)的影響。
酶標(biāo)儀的用途和其它提示
用于ELISA試劑的測(cè)定，廣泛用于各種實(shí)驗(yàn)室，包括臨床實(shí)驗(yàn)室。
質(zhì)量控制
質(zhì)量控制是試劑檢測(cè)的重要因素。請(qǐng)按照試劑說(shuō)明書(shū)的要求進(jìn)行質(zhì)量控制。
空白校正
有一些試劑盒的說(shuō)陰書(shū)將空白孔設(shè)置為空氣，其它大多數(shù)空白孔的設(shè)置是用試劑來(lái)設(shè)置的，請(qǐng)按照試劑盒的說(shuō)明書(shū)要求進(jìn)行。
檢測(cè)結(jié)果的解釋
由于有相當(dāng)多的因素會(huì)影響檢測(cè)的結(jié)果，如不同的酶標(biāo)板，檢測(cè)試劑的體積，都會(huì)造成OD值的不同，因此，只有使用同一酶標(biāo)板反應(yīng)的試劑檢測(cè)結(jié)果才能比較和分析。對(duì)結(jié)果的臨床解釋請(qǐng)依照試劑盒的說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。
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相關(guān)熱詞：
等離子清洗機(jī),反應(yīng)釜,旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀,高精度溫濕度計(jì),露點(diǎn)儀,高效液相色譜儀價(jià)格,霉菌試驗(yàn)箱,跌落試驗(yàn)臺(tái),離子色譜儀價(jià)格,噪聲計(jì),高壓滅菌器,集菌儀,接地電阻測(cè)試儀型號(hào),柱溫箱,旋渦混合儀,電熱套,場(chǎng)強(qiáng)儀萬(wàn)能材料試驗(yàn)機(jī)價(jià)格,洗瓶機(jī),勻漿機(jī),耐候試驗(yàn)箱,熔融指數(shù)儀,透射電子顯微鏡。
一、測(cè)定波長(zhǎng)目前國(guó)內(nèi)常見(jiàn)的ELISA試劑盒所使用的標(biāo)記用酶均為辣根過(guò)氧化物酶(HRP)，底物通常為四甲基聯(lián)苯胺(TMB)和鄰苯二胺(OPD)，其在過(guò)氧化氫溶液的存在下，經(jīng)HRP作用，分別氧化為2,2,-二氨基偶氮苯(DAB)和聯(lián)苯醌。當(dāng)pH值為5.0左右時(shí)，DAB在450nm波長(zhǎng)處有最大吸收，當(dāng)pH值降為L(zhǎng)0時(shí)，最大吸收波長(zhǎng)移至492nm,同時(shí)摩爾消光系數(shù)變大，顯色加深，因而常用強(qiáng)酸如硫酸或鹽酸終止反應(yīng)。TMB的氧化產(chǎn)物聯(lián)苯醌在波長(zhǎng)450nm處有最大消光系數(shù)，如果HRP量少，H:O:和TMB過(guò)量時(shí)，則形成藍(lán)色的陽(yáng)離子根。降低pH,即可使藍(lán)色的陽(yáng)離子根轉(zhuǎn)變?yōu)辄S色的聯(lián)苯醌，使用硫酸作為終止劑可使產(chǎn)物穩(wěn)定90min.因此，450nm和492nm兩個(gè)波長(zhǎng)是目前ELISA測(cè)定常用的。各種酶標(biāo)儀都配有放置濾光片的可自動(dòng)轉(zhuǎn)換的部件，可以同時(shí)安裝6~8片濾光片，所配備的濾光片均應(yīng)包括上述兩個(gè)波長(zhǎng)，有的酶標(biāo)儀以490nm濾光片替代492nm濾光片，影響不大一般酶標(biāo)儀的測(cè)定波長(zhǎng)在400~750nm或800nm之間，完全可以滿足ELISA的顯色測(cè)定。。除了這兩個(gè)基本濾光片外，考慮到雙波長(zhǎng)比色的需要，還應(yīng)有620nm或630nm或650nm和405nm波長(zhǎng)的濾光片，其他濾光片可根據(jù)自己的需要選擇。有時(shí)，有的實(shí)驗(yàn)室希望用酶標(biāo)儀作微量生化測(cè)定，故酶標(biāo)儀生產(chǎn)廠家對(duì)其生產(chǎn)的酶標(biāo)儀擴(kuò)展了紫外檢測(cè)功能，此時(shí)需要一個(gè)340nm波長(zhǎng)濾光片。此時(shí)，酶標(biāo)儀的測(cè)定波長(zhǎng)范圍就成為340-750nm或800nm。酶標(biāo)儀有單波長(zhǎng)和雙波長(zhǎng)檢測(cè)功能有時(shí)使用者不知在什么情況下使用單或雙波長(zhǎng)檢測(cè)。所謂的“單波長(zhǎng)”就是使用一種對(duì)顯色具最大吸收的波長(zhǎng)即450nm或492nm進(jìn)行比色測(cè)定；而“雙波長(zhǎng)”則除了用對(duì)顯色具最大吸收的波長(zhǎng)即450nm或492nm進(jìn)行比色測(cè)定外，同時(shí)用對(duì)特異顯色不敏感的波長(zhǎng)如630nm進(jìn)行測(cè)定，酶標(biāo)儀最后打印出來(lái)的吸光度則為二者之差。630nm波長(zhǎng)下得到的吸光度是非特異的，來(lái)自于板子上諸如指紋、灰塵、臟物等所致的吸收。因此，在ELISA比色測(cè)定中，可以使用雙波長(zhǎng)，且不必設(shè)空白孔。
二、測(cè)定的吸光度范圍通常，酶標(biāo)儀的吸光度測(cè)定范圍在。0-2.5之間即可以滿足ELISA的測(cè)定要求。早期的酶標(biāo)儀可測(cè)定的吸光度一般在0-2.5之間，但現(xiàn)在基本上都做了拓寬，可達(dá)到3.5以上，并且能保持很好的精密度與線性。如Labsystems公司DragonWellscanMK-2的吸光度測(cè)定范圍為0-3.5，而MultiskanAscent的吸光度測(cè)定范圍(Abs)達(dá)0-4.0，在0-4.0范圍，線性誤差不超過(guò)±2.0%，在0.3-3.0吸光度范圍內(nèi)，測(cè)定精密度CV小于±0.2%；3.0-4.0Abs范圍內(nèi)，測(cè)定精密度CV小于士0.2%。因此，對(duì)于酶標(biāo)儀的吸光度范圍不必去刻意追求大的吸光度范圍，主要要看在一定的吸光度范圍內(nèi)的線性和精密度如何。
三、光學(xué)系統(tǒng)酶標(biāo)儀的光學(xué)系統(tǒng)采用的是垂直光路多通道(通常為8或12通道，亦有單通道)檢測(cè)，一般為硅光管或光導(dǎo)纖維，除測(cè)定通道外，有的酶標(biāo)儀還有一個(gè)參比通道，每次測(cè)定可進(jìn)行自我校準(zhǔn)。酶標(biāo)儀的光學(xué)系統(tǒng)功能如何，均可通過(guò)酶標(biāo)儀測(cè)定的吸光度范圍、線性度、精密度和準(zhǔn)確度等體現(xiàn)出來(lái)。光學(xué)系統(tǒng)好的話，則上述指標(biāo)也應(yīng)較佳。測(cè)定的精密度與測(cè)定通道之間的均一性有直接關(guān)系。單通道可避免因通道不同所致的差異。
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